FAP1在乳腺癌中的表达及意义

　　作者：程甜甜1， 杨贤子1， 熊 奎1， 骆志国1， 谢 伟2， 冯茂辉2 作者单位：(1郧阳医学院附属太和医院肿瘤科，湖北 十堰 442000;2武汉大学中南医院肿瘤外科，湖北 武汉 430071)

　　【摘要】 目的:研究Fas相关磷酸酯酶1(FAP1)在乳腺癌组织中的表达及其与临床分期、病理分级、淋巴结转移和患者年龄的关系。方法: SP法检测正常乳腺组织、乳腺癌及乳腺良性肿瘤组织中FAP1蛋白的表达水平。结果: FAP1蛋白在正常乳腺组织中未见表达，在良性肿瘤中的表达率为26%，在交界性肿瘤与恶性肿瘤中的阳性表达率分别为69%和80%;FAP1蛋白的表达与乳腺癌的临床分期、病理分级和淋巴结转移状况有关，而与年龄无关。结论: FAP1在乳腺癌组织中广泛表达，可能成为判断乳腺癌恶变程度及预后的重要指标。

　　【关键词】 乳腺癌;凋亡;Fas相关磷酸酯酶1

　　Signifance and Expression of Fasassociated Phosphatase1 in Breast Cancer CHENG Tiantian1,YANG Xianzi1,XIONG Kui1,LUO Zhiguo1,XIE Wei2,FENG Maohui2 (Department of Oncology,1Taihe Hospital,Yunyang Medical College,Shiyan,Hubei 442000;2Zhongnan Hospital,Wuhan University,Wuhan,Hubei 430071,China)

　　Abstract: Objective To investigate the expression of Fasassociated phosphatase1 (FAP1) in breast cancer tissues and its correlation with clinical stage,tumor pathological grade, lymph node metastasis and patient's age.Methods SP Immunohistochemical technique was used to determine the expression of FAP1 in normal breast tissues,breast cancer tissues and benign tumor tissues,respectively.Results There was no FAP1 expression in normal breast tissues,the rate of expression in benign tissues was 26%,but it was 69% and 80% in human mammary gland borderline tumor and carcinoma tissues,respectively.The expression of FAP1 was positively correlated with clinical stage,tumor pathological grade and lymph node metastasis,but not related to patient's age.Conclusions FAP1 is widely expressed in breast cancer tissues,and may be a valuable indicator in the canceration and prognosis of human breast cancer.

　　Key words: Breast cancer; Apoptosis;Fas associated phosphatase1

　　乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一，其发生与发展常伴随重要基因或蛋白的异常表达[1] 。癌基因Fas可与细胞表面Fas配体(Fas L)结合引导细胞凋亡，而Fas相关磷酸酯酶1(Fas associated phosphatase1，FAP1)能与Fas抗原相互作用，抑制Fas信号的转导[2]研究发现FAP1在卵巢癌、肝癌、大肠癌和自身免疫系统疾病中呈高表达[35]，但其在乳腺癌中作用的研究报道甚少。本文拟检测乳腺癌中FAP1的表达情况，并探讨其与肿瘤患者的年龄、临床分期、病理分级和淋巴结转移的关系。

　　1 材料和方法

　　1.1 标本

　　60例乳腺癌、15例乳腺良性疾病及10例正常乳腺组织(取自癌旁5 cm以上且病理检查为正常形态的乳腺组织)标本蜡块均随机取自武汉大学中南医院病理科。均为女性患者, 年龄19～79(平均45)岁。均经病理确诊, 其中乳腺浸润性导管癌47例、乳腺导管内癌4例、乳腺小叶原位癌1例、髓样癌2例、单纯癌2例、其他4例。15例乳腺良性疾病包括乳腺纤维腺瘤、乳腺囊肿病、乳腺腺病、乳腺囊性小叶增生，患者术前均未接受过放疗、化疗、激素和中草药物等治疗。

　　1.2 免疫组织化学染色

　　兔抗人FAP1多克隆抗体(NeoMarkers公司)及SP免疫组化染色试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒(福州迈新公司)。标本经10%中性福尔马林浸泡固定、石蜡包埋、4 μm连续切片，SP法常规染色，PBS代替一抗作阴性对照;用已知阳性片作阳性对照，细胞质染成棕黄色颗粒为阳性细胞。

　　1.3 结果判断

　　以黄色和棕黄色为阳性信号。根据染色强度和显色细胞比例综合评分，将染色结果分为: ，+，++，+++级。⑴按显色有无及深浅评分：无显色为0分，浅黄色或黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。⑵按显色组织所占的面积比例评分：<5%为0分，5%～25%为1分，25%～50%为2分，>50%为3分。每例标本按积分高低分为：0分为阴性()，0.5～1分为弱阳性(+)，1.5～2分为阳性(++)，2.5～3分为强阳性(+++) 。

　　1.4 统计学处理

　　所有数据均由SPSS 13.0统计软件分析处理, 采用χ2检验，Fisher's精确检验，变量间采用Spearman等级相关分析其相关关系，以P<0.05作为差异显著性检验标准。

　　2 结　果

　　2.1 FAP1在乳腺组织中的表达

　　FAP1在乳腺组织中染色为棕黄色，主要定位在细胞浆内，少数亦可见胞膜着色。正常乳腺组织中无着色，良性肿瘤组阳性产物较少(见图1～2)，交界性及恶性肿瘤中的阳性表达明显高于良性组与正常对照组(见图3、4)。在正常乳腺组与良性肿瘤组在表达强度无显著差异(P>0.05)，交界性与恶性肿瘤组亦未见明显差异(P>0.05，见表1)。表1 不同乳腺组织中FAP1的表达情况　注：与正常乳腺组织表达比较，* P<0.05

　　2.2 FAP1表达与乳腺癌患者的年龄、临床分期、病理分级及淋巴结转移状况的关系表2 FAP1的表达与乳腺癌的临床参数的关系注：ⅢⅣ期与ⅠⅡ期比较，* P<0.05;

　　低分化组与高分化组比较，** P<0.01;

　　转移组与无转移组比较，# P<0.05。

　　FAP1的阳性表达率与乳腺癌的临床分期、病理分级及转移性呈显著相关，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期明显高于Ⅰ～Ⅱ期(P <0.05)，病理分级Ⅱ～Ⅲ级明显高于Ⅰ级(P<0.01)，转移组高于无转移组(P<0.05)，而与年龄无明显相关性(P>0.05，见表2)。

　　3 讨　论

　　Fas抗原(Apo21/CD95)与Fas配体(Fas L)组成的Fas系统是体内转导凋亡信号的主要系统之一，当Fas与Fas L结合后，Fas抗原可向细胞内部传导凋亡信号，使表达Fas的细胞在数小时内发生凋亡，这是机体清除异物、维持免疫自稳的重要调节手段。Fas相关磷酸酯酶1(FAP1)是从嗜碱性白血病细胞株中提取的一种新型蛋白质酪氨酸磷酸酯酶(PTP)，其与Fas C端的15个氨基酸残基结合，抑制Fas的活性，阻止与FasL 或抗Fas激活性抗体结合，以阻断凋亡信号的传递，是Fas系统的负性调节因子。而在拮抗Fas介导的细胞毒性作用的组织或细胞系中均有FAP1的高表达，提高FAP1在T细胞系中的表达可以部分抑制Fas诱导的凋亡。由此推定FAP1是Fas信号转导中的负性调节因子，在调控机体细胞的增殖与程序性死亡之间的动态平衡过程中起着重要作用[6]。

　　已有文献报道在一些恶性肿瘤和自身免疫系统疾病中FAP1表达增高，并且可能与这些疾病抵抗Fas介导的凋亡有关[35]。Rey[7]等研究发现FAP1大多表现在ER+的乳腺癌细胞株上，FAP1 mRNA在乳腺癌细胞株中呈高表达，它与Fas介导的细胞毒性有关，FAP1中基因转移介导的上升，大部分消除了Fas介导的凋亡，这一结果同样支持FAP1是Fas介导凋亡途径中的一个负性调控因子。

　　本研究结果发现FAP1在正常乳腺上皮组织中不表达，在乳腺良性肿瘤中低表达，但在乳腺恶性肿瘤中阳性及强阳性表达率均明显增加，说明FAP1蛋白表达水平的高低可能与肿瘤的良恶性相关。进一步比较发现，FAP1表达随肿瘤的临床分期和病理分级(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)的增高而增加，并与淋巴结的转移状况呈显著相关，而与患者年龄无相关性，提示FAP1可能参与了乳腺癌细胞的分化过程，对病变的发展有一定的促进作用，推测FAP1可能是乳腺恶性肿瘤发生中的早期事件，并随疾病的进展呈增高趋势，对肿瘤的恶性性质和分化程度具有一定的指示意义。

　　许多化疗药物是通过上调癌细胞中的Fas分子的表达及活化Fas L或Fas抗体，增强T淋巴细胞的攻击力，同时诱导肿瘤细胞的凋亡来清除病灶[8]，而FAP1通过与Fas C端的结合来抑制Fas的活性，阻断Fas介导凋亡信号传导通路，逃避机体的免疫监控，促进肿瘤细胞的过度增殖，因而FAP1可能是引起乳腺癌对化疗药物产生耐药性的原因之一，但其确切的作用机理还有待进一步研究。

　　(文中图1～4见封三)

　　【参考文献】

　　[1]李文仿,谭 最,王 耕,等.乳腺癌中CXCR4的表达及与PCNA、淋巴结转移的关系[J].郧阳医学院学报,2008,27(1):911.

　　[2] Sato T,Irie S,Kitada S,et al.FAP1:a protein tyrosine phosphatase that associates with Fas[J].Science,1995,268(5 209):411415.

　　[3] 王 滨,郑维国,辛晓燕,等.FAP1反义寡核苷酸联合卡铂对卵巢癌细胞SKOV3凋亡的作用[J].癌症,2004,23(8):885889.

　　[4]Yeh SH,Wu DC,Tsai CY,et al.Genetic characterization of fasassociated phosphatase1 as a putative tumor suppressor gene on chromosome 4q21.3 in hepatocellular carcinoma[J].Clin Cancer Res,2006,12(4):1 0971 108.

　　[5]姚和瑞,谢德荣,李志花,等.FAP1在人结肠癌组织中的表达[J].中山大学学报(医学科学版),2003,24(2):168170.

　　[6]Wieckowski E,Atarashi Y,Stanson J,et al. FAP1mediated activation of NFkappa B induces resistance of head and neck cancer to Fasinduced apoptosis[J].J Cell Biochem,2007,100(1):1628.

　　[7]Rey JM,Pujol P,Callier P,et al.Semiquantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction to evaluate the expression patterns of genes involved in the oestrogen pathway [J].J Mol Endocrinol,2000,24(3):433440.

　　[8]韩苏夏,朱 青,李明众.Fas/Fas L及其与肿瘤的关系[J].西安医科大学学报,2000,21(4):397398