新疆少数民族食管癌患者血清肿瘤标志物的水平分析

　　作者：程真珍 作者单位：新疆医科大学附属肿瘤医院检验科，新疆 乌鲁木齐

　　【摘要】 目的：探讨血清细胞角蛋白19片断(CYFRA21-1)和鳞状细胞癌相关抗原(SCC-Ag)在少数民族食管癌患者中的差异。方法: 采用电发光免疫测定法(electrochemiluminescence immunoassay, ECLIA)和酶联免疫测定法(enzyme-linked immunoassay, ELISA)检测70例体检健康者及70例食管癌患者血清中CYFRA21-1和SCC-Ag的水平并对其结果进行分析。结果：CYFRA21-1和SCC-Ag的率的比较发现，各民族与正常对照比较均有统计学差异(P<0.01)，但是维吾尔族与哈萨克族之间无统计学差异(P>0.01)。结论：血清细胞角蛋白19片断(CYFRA21-1)和鳞状细胞癌相关抗原(SCC-Ag)在维吾尔族与哈萨克族食管癌患者中无差异。

　　【关键词】 细胞角蛋白19片断; 鳞状细胞癌相关抗原; 食管癌; 少数民族; 血清

　　Study on the serum tumor marker levels in Xinjiang patients of

　　the minority with esophageal cancer

　　CHENG Zhen-zhen, HUANG Yan-chun

　　(Department of Clinical Laboratory, Affiliated Tumor Hospital, Xinjiang Medical University，

　　Urumqi 830011, China)

　　Abstract: Objective: To investigate the serum levels of cytokeratin 19 fragment (CYFRA21-1) and squamous cell carcinoma antigen (SCC-Ag) in Xinjiang people of the minority with esophageal cancer. Methods: Serum CYFRA21-1 and SCC-Ag levels were measured with ECLIA and ELISA in 70 controls and 70 Xinjiang patients of the minority with esophageal cancer. Results: The positive rate of CYFRA21-1 and SCC-Ag of esophageal cancer of the minority were siginificantly higher than those in the controls (P<0.01). But the positive rates in the patients of Uighur and Kazakh were not different (P>0.01). Conclusion: There were not differences among the serum CYFRA21-1 and SCC-Ag levels in Xinjiang patients of the minority with esophageal cancer.

　　Key words: CYFRA21-1; SCC-Ag; esophageal cancer; minority; serum

　　食管癌是世界上最常见的六大恶性肿瘤之一,中晚期患者5年生存率仅为10%左右,多数患者就诊时已发展至晚期,其确诊主要依靠病理学和影像学检查,缺乏有效的其他检测手段。目前可应用的食管癌标志物有食管癌细胞基因类、蛋白类、相关血清蛋白和肽类等[1]。其中一些标志物可用于食管癌的诊断、疗效评价和预后判断及治疗后的追踪。近年来，国内外多数学者将最初用于非小细胞肺癌诊断的血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、鳞状细胞癌相关性抗原(SCC-Ag)、角化素蛋白片段19(CYFRA21-1)用于食管癌的检测,并取得了一些有意义的结果[2,3]。但是CEA的敏感性偏低，而CYFRA21-1和SCC-Ag在不同民族食管癌中有无差异鲜有报道。故本研究对此进行了探讨。

　　1 资料和方法

　　1.1 临床资料 本研究所选取的70例食管癌患者的血清全部取自新疆医科大学附属肿瘤医院胸外科和胸部放疗科于2006年11月至2007年11月收治的住院病人。其中男性52例,女性18例,平均年龄57.01岁，维吾尔族(维族)35例，哈萨克族(哈族)35例。均经内窥镜活检或手术切除后病理检查确诊为食管鳞状细胞癌。所有病人采集血清前均未进行任何治疗。与食管癌病人年龄、性别匹配的70例正常对照血清取自新疆医科大学附属肿瘤医院门诊和体检中心的非肿瘤健康人群，其中男性50例,女性20例,平均年龄56.22岁。

　　1.2 检查方法

　　1.2.1 标本准备 患者均于入院后次日早晨用一次性取血器和真空采血管抽取空腹静脉血3 ml,待血液凝固后，用离心机在常温下4 000 r/min离心4 min，取上清液(即血清)备用。

　　1.2.2 CYFRA21-1的检测 (1)检测仪器设备和试剂:用瑞士罗氏公司生产的Elecsys2010 仪器和CYFRA21-1 试剂盒及相关用品进行检测。(2)检测方法:应用电发光免疫测定法(electrochemiluminescence immunoassay ,ECLIA) 进行检测。具体检测过程如下:第1次孵育:在孵育孔中加入20 μl 血清标本、生物素-抗Cytokeratin19 特异性单克隆抗体、Ruthenium complex-抗Cytokeratin19 特异性单克隆抗体进行孵育,并形成生物素-Cytokeratin19 抗体-Cytokeratin19 抗原-Cytokeratin19 抗体-Ruthenium complex 夹心复合物。第2次孵育:在第1 次孵育后的混合液中加入与链酶亲和素相结合后的微粒,经孵育后形成微粒-链酶亲和素-生物素-Cytokeratin19 抗体-Cytokera tin19抗原-Cytokeratin19抗体-Ruthenium complex复合物。将上述反应的混合液吸至测量孔中,微粒被带磁性的电极表面吸引固定,再用洗液(ProCell)将未结合的其他物质洗尽,电极通电后,刺激与微粒结合的复合物上的发光物质发光,通过光电倍增管收集光信号形成的曲线测量标本中Cyfra21-1的含量(且所测定的高、低值质控均在范围内)。

　　1.2.3 SCC-Ag的检测 用瑞士GENESIS公司生产的RMP150进行检测,所用试剂盒和相关用品均由该公司提供。检测方法应用酶联免疫测定法(enzyme-linked immunoassay, ELISA)。具体过程如下:在反应板的孵育孔中加入血清标本及酶联物进行孵育,后甩净板内液体，用洗涤液洗涤反应板并去除水滴，反复洗涤五次。每孔再加入底物和显色剂，15 min 后每孔加入终止液，30 min 内在450 nm处读OD值。以OD值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据血清样品中的OD值可在标准曲线上查出标本中SCC-Ag的浓度(且所测定的高、低值质控均在范围内)。

　　1.3 判定标准 以CYFRA21-1>3.3 ng/ml，SCC-Ag>2 ng/ml为阳性。

　　1.4 统计学处理 采用SPLM3.0软件对数据进行统计学分析，各组间肿瘤标志物率的比较行χ2检验，检验水准为α=0.01。

　　2 结果

　　2.1 在少数民族食管癌患者肿瘤标志物CYFRA21-1阳性率比较中发现，各民族与正常对照率的比较均有统计学差异(P<0.01)，见表1。

　　2.2 在少数民族食管癌患者肿瘤标志物SCC-Ag阳性率比较中发现，各民族与正常对照率的比较均有统计学差异(P<0.01)，见表2。表1 少数民族食管癌患者肿瘤标志物CYFRA21-1阳性率比较注：与正常对照比较， *P<0.01; 与哈族组比较， ○P>0.01表2 少数民族食管癌患者肿瘤标志物SCC-Ag阳性率比较 注：与正常对照比较， *P<0.01; 与哈族组比较， ○P>0.01

　　3 讨论

　　食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一。中国是世界上食管癌发病率及死亡率最高的国家,每年全世界新诊断的30万食管癌患者中,有一半在中国。食管癌的发生还有地域性差异,我国以河南省林县的发病率最高。

　　CYFRA21-1是细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)片段,在多数正常上皮细胞及癌上皮细胞内均有表达,而在间叶组织不表达,当细胞癌变时,激活的蛋白酶加速了细胞角蛋白的降解,使肿瘤细胞坏死释放角蛋白片段入血循环,可采用两种抗CK19的特异性单克隆抗体KS19.1和BM19.21检测到,因此将之称为CYFRA21-1细胞角蛋白是构成细胞骨架的一种中间丝状物,正常时含量极微,以寡聚物形式存在,不同的组织肿瘤有不同的CK表达。据报道,CYFRA21-1在肺癌、头颈部鳞癌、肝癌、胸腹腔积液、鼻咽癌、宫颈癌、卵巢癌中均有不同程度的表达[4～6]。Yamamoto等[7]于1997年首次将血清CYFRA21-1检测食管鳞状细胞癌,其后,国内外多篇文献报道食管癌患者血清CYFRA21-1水平随界值的不同其阳性率可达43.9%[8～11]左右,是目前食管癌最好的指标。

　　鳞状细胞癌相关抗原(squamous cell carcinoma antigen，SCC-Ag)是TA-4的亚单位，TA-4是1977年Kato等[12]首先发现的一种肿瘤相关抗原。TA-4从宫颈鳞癌中取得，至少由14个亚结构组成，SCC-Ag 是其中一种提纯亚单位。SCC-Ag作为鳞癌血清中肿瘤标记物已在大量研究中证实[12～14]。但是尚未见报道不同民族食管癌患者血清角蛋白19片断(CYFRA21-1)及鳞状细胞癌相关抗原(SCC-Ag)水平有无差异。

　　本研究结果发现，CYFRA21-1阳性界值为CYFRA21-1>3.3 ng/ml，阳性率在正常对照组为0%，食管癌组为37.14%，其中维族为40.00%，哈族为34.29%，此结果与文献[7,8]的40%较接近。本研究结果显示各民族与正常对照率的比较均有统计学差异(P<0.01)，说明血清CYFRA21-1水平对食管癌患者有意义，敏感性较好。而维族与哈族之间无统计学差异(P>0.01)，但是这与黄国福等[15]的研究不同，可能与样本量较小有关，这还有待于进一步扩大样本进行论证。本研究还发现，SCC-Ag水平同样对食管癌患者有意义，但敏感性较CYFRA21-1稍差。

　　【参考文献】

　　[1] 毛友生,赵晓航,张德超,等.食管癌肿瘤标志物研究进展[J].世界华人消化杂志,2002,10：1321-1323.

　　[2] Ychou M, Khemissa-Akouz F, Kramar A, et al. A comparison of serum Cyfra 21-1and SCC AG in the diagnosis of squamous cell esophageal carcinoma[J]. Bull Cancer,2001,88:1023-1027.

　　[3] Kawaguchi H,Ohno S,Miyazaki M,et al.CYFRA 21-1 determination in patients with esophageal squamous cell carcinoma: clinical utility for detection of recurrences[J].Cancer,2000,89:1413-1417.

　　[4] Mady EA. Cytokeratins as serum markers in Egyptian bladder cancer. A comparison of CYFRA21 - 1, TPA and TPS[J]. Int J Biol Markers,2001,16(2):130.

　　[5] Hatzakis KD,Froudarakis ME, Demostenes B, et al. Prognosticvalue of serum tumor markers in patients with lung cancer[J]. Respiration,2002,69(1):25.

　　[6] Dejsomritrutai W,Senawong S, Promkiamon B. Diagnostic utility of CYFRA21-1 in malignant pleural effusion[J]. Respirology,2001,6(3):213.

　　[7] Yamamoto K, Oka M. CYFRA21-1 is a usefulmarker for esophageal squamous cell carcinoma[J]. Cancer,1997,79(9):1647.

　　[8] Brockmann JG, St Nottberg H, Glodny B,　et al. Analysis of serum　CYFRA21-1 concerations in patients　with esophageal cancer[J]. Anticancer　Res,2000,20(6):4899.

　　[9] Brockmann JG, St Nottberg H, Glodny B, et al. CYFRA21 - 1 serum analysis in patients　with esophageal cancer[J]. Clin Cancer Res,2000,6(11):4249.

　　[10] 杨文峰,王善政,左传同.食管癌患者血清CYFRA21-1水平的研究[J].癌症,2002,21(1):95.

　　[11] Wang T, Zhang W, Liu Y.Clinical significance of the novel tumormarker CYFRA21-1 in patients with esophageal cancer[J]. Zhonghua YiXue Za Zhi,2001,81(22):1390.

　　[12] Kato H,Torigoe T. Radioimmunoassay for tumor antigen of human cervical squamous cell carcinoma [J].Cancer,1977,40(4):1621-1628.

　　[13] 黄 忠,梁伊仁,冯海林,等.CA199检测及其在消化道肿瘤中的应用[J].癌症,1998,17(5):400.

　　[14] Ngan NH, Cheng GT, Yeung WS, et al. The prognostic value of TPA and SCC in squamous cell carcinoma of the cervix [J].Gynecol Oncol,1994,52(1):63-68.

　　[15] 黄国福,郭建琳，李 迅,等.不同民族食管癌患者血清CYFRA21-1水平分析[J].放射免疫学杂志,2005,18(1):31-33.