BRCA1在晚期非小细胞肺癌组织中的表达及预后意义

　　作者：单莉 刘甚红， 韩志刚 作者单位：1新疆医科大学附属肿瘤医院化疗一科，新疆 乌鲁木齐 ;2新疆乌鲁木齐市友谊医院， 新疆 乌鲁木齐

　　【摘要】 目的： 探讨DNA损伤修复基因BRCA1在晚期非小细胞肺癌 (NSCLC) 组织中的表达情况，对于含铂类化疗的治疗疗效影响以及预后意义。方法：应用二步免疫组织化学染色法对 81例晚期非小细胞肺癌组织进行BRCA1基因定性检测，回顾调查入组患者的治疗方法、治疗反应，疗效评价、疾病进展时间及生存时间。组间差异采用卡方检验、疾病进展及生存期差异采用时序检验、Kaplan-Meier生存曲线进行统计分析。结果: 81晚期非小细胞肺癌组织中BRCA1表达阳性率为51.9%,化疗有效率为43.2%;其中BRCA1阴性组化疗有效率为56.4%，BRCA1阳性组化疗有效率为31.0%，BRCA1阴性组化疗有效率高于阳性组，差异有统计学意义。BRCA1阴性组与阳性组中位疾病进展时间、中位生存期及1年生存率均无统计学差异。结论：晚期NSCLC中BRCA1的表达与临床特征无明显关联，BRCA1表达阴性有助于化疗成功，1年生存率较高，但总生存无差异。BRCA1可作为预测化疗疗效的指标之一。

　　【关键词】 非小细胞肺癌; 化疗; 预后; BRCA1

　　small cell lung cancerSHAN Li, LIU Shen-hong, HAN Zhi-gang

　　(Department of Medical Oncology, First Affiliated Tumor Hospital, Xingjiang Medical University,

　　Urumqi 830011, China)Abstract：Objective: To investigate the expressions of BRCA1 members of DNA repair gene family in patients with advanced non small-cell lung cancer (NSCLC), the response to platinum-based chemotherapy as well as their clinical prognostic significance. Methods: Expression levels of BRCA1 were detected by method of immunohistochemistry in 81 advanced NSCLC patients. Retrospective studies on their treatment， therapeutic reactions， and progression time,survival time as well were done. Chi-square criterion, Kaplan-Meier survival curve were used for statistical analysis. Results: The positive rate of BRCA1 gene in 81 advanced NSCLC patiences was 51.9%. Response rate was 43.2%. While response rate of negetive BRCA1 was 56.4%, positive BRCA1 was 31.0%. The response rate of negetive BRCA1 was higher than positive BRCA1.There was significance differrence between them through statistics analysis. There was no significant differrence in the median progression time, the median- survival time and one year survival rate between negetive BRCA1 and positive BRCA1. Conclusion： The expression levels of BRCA1 make no difference with clinical feature. Patients with low expression of BRCA1 could make a successful chemotherapy. One year survival rate was higher, But no difference in total survival. Patients with low expression of BRCA1 maybe had better prognosis. BRCA1 could be used as predict to platinum-based chemotherapy response of NSCLC.

　　Key words： non-small cell lung cancer; chemotherapy; prognosis; BRCA1

　　非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)约占肺癌总数的86%。且65%以上的NSCLC患者发现时已为晚期，随着第3代化疗药物如长春瑞滨、吉西他滨和紫杉类等药物的开发和应用，NSCLC的治疗有了很大的进展，但有效率和中位生存时间仍然很低[1]，本文旨在研究BRCA1在晚期非小细胞肺癌患者肿瘤组织中的表达情况，探讨其表达与铂类化疗疗效及生存之间的关系。

　　1 资料与方法

　　1.1 临床资料 标本取自新疆医科大学附属肿瘤医院 2001年1月～2006 年12月经病理证实的初治晚期非小细胞肺癌患者的活检常规石蜡切块81 例 ,其中男性65例,女性16例。年龄31～75岁，中位年龄62岁。其中腺癌29例、鳞癌52例。按1997年国际抗癌联盟(UICC)TNM标准进行分期：ⅢB期51例，Ⅳ期30例。81例非小细胞肺癌患者均接受至少2周期含铂类化疗,治疗方案为GP(吉西他滨1 g/m2,d1、d8;顺铂 30 mg/m2，d1-3)或NP(长春瑞滨25 mg/m2，d1、d8;顺铂 30 mg/m2,d1-3)或TP(多西他赛 75 mg/m2，d1;顺铂30 mg/m2,d1-3)方案。

　　1.2 主要仪器及试剂 仪器为LEIKE RM2235切片机，冰箱，电热干燥箱，荧光显微镜，Sony图文分析系统。BRCA1抗体为鼠抗人单克隆抗体，购自Santa Cruz生物工程公司，工作浓度1∶100，二步发免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

　　1.3 方法 采用二步法免疫组化检测。组织石蜡切片常规脱蜡水化后预处理，以3%的H2O2去离子水孵育10 min，阻断内源性过氧化物酶，蒸馏水洗3次，每次2 min;滴加1∶100鼠抗人BRCA1单抗(1∶100倍稀释)，室温孵育1～2 h，蒸馏水洗3次，每次2min;，滴加一抗，37℃孵育20 min，蒸馏水洗3次，每次2 min;滴加二抗工作液，37℃孵育20～30 min，蒸馏水洗3次，每次2 min;应用DAB-H2O2显色5 min;自来水充分冲洗，苏木素复染、脱水，二甲苯透明，中性树脂封片、编号。在放大400倍的视野中随机计数300个肿瘤细胞，如果活检组织染色中少于300个肿瘤细胞，计数所有细胞(最少不能少于150个肿瘤细胞)，根据肿瘤细胞是否核染色呈棕黄色分别记录阳性或阴性，超过10%细胞阳性定义为免疫组化染色阳性。

　　1.4 评价标准 疗效评价按照世界卫生组织实体瘤客观疗效标准,分为完全缓解CR 、部分缓解PR、稳定SD和进展 PD,CR+PR视为化疗有效。

　　1.5 随访情况 生存期自化疗首日至死亡或失访日止。截至2007年12月31日，死亡56例，存活22例，失访3例，随访时间106～1 579 d，中位随访时间：373 d，失访率3.70%。

　　1.6 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件，组间比较采用卡方检验,疾病进展及生存期比较采用时序检验、Kaplan-Meier生存曲线进行统计分析，检验水准α=0.05。

　　2 结果

　　2.1 BRCA1在肺癌组织中的表达情况 在81 例晚期非小细胞肺癌患者中，BRCA1表达阳性42例，阴性39例，阳性率为51.9%。

　　2.2 BRCA1 在肺癌组织中的表达与临床特征之间的关系 将81例入组患者分别按照性别、病理类型、TNM分期，吸烟状况、年龄分组，运用卡方检验，分别探讨BRCA1表达与上述临床特征之间的关系，结果表明，BRCA1在晚期非小细胞肺癌中的表达与性别差异、年龄分布、病理类型、TNM分期、是否吸烟方面均无明显关系。具体结果见表1。表1 BRCA1在肺癌组织中的表达与不同临床特征之间的关系

　　2.3 BRCA1的表达与含铂类化疗近期疗效的关系 81例晚期NSCLC患者经至少2周期含铂化疗后无CR，PR35例，SD37例，PD9例，CR+PR患者共35例，化疗总有效率43.2%，疾病控制率88.9%。经过分组研究发现，BRCA1表达阳性的肺癌患者化疗后达PR者为13例，有效率为31.0%，肿瘤控制率为85.7%。BRCA1表达阴性的肺癌患者化疗后达PR者为22例，有效率为56.4%,控制率为92.3%。发现BRCA1阴性组的有效率是阳性组有效率的1.82倍，差异有统计学意义。肿瘤控制率经检验无统计学差异(χ2=5.34，P<0.05),见表2。表2 BRCA1 的表达与含铂类化疗有效率的关系

　　2.4 BRCA1的表达与预后的关系 81例晚期非小细胞肺癌患者化疗后中位疾病进展时间为197 d，BRCA1表达阳性患者的中位疾病进展时间为177 d，表达阴性患者为220 d。应用Kaplan-Meier生存曲线观察本组资料的疾病进展时间，发现无论BRCA1表达高还是低，无疾病进展几率均呈下降趋势，大多患者于30～200 d之内发生疾病进展，两组疾病进展时间无统计学差异(χ2=1.3873，P>0.05)。81例患者中随访1年尚存活的患者为35例，死亡46例，1年生存率为43.2%。其中BRCA1阴性组1年生存率54.8%，BRCA1阳性组1年生存率30.8%,差异有统计学意义(P<0.05)，认为BRCA1的表达与1年生存率有关，阴性组高于阳性组。

　　3 讨论

　　3.1 DNA修复与顺铂耐药 DNA作为一种遗传物质必须保持相对的稳定性。在外源性和或内源性有害物质的损伤下基因组DNA始终处于一个不断损伤和修复的动态平衡中，如果DNA损伤修复能力低下或缺陷，则会导致原癌基因的激活和或抑癌基因的失活，导致肿瘤的发生。细胞中存在的 DNA修复基因对某些类型的 DNA损伤具有特异性的修复能力。在肿瘤的治疗过程中，DNA的损伤修复能力异常增高与肿瘤耐药性的形成又有着密切关系[2,3]。铂类是非小细胞肺癌标准治疗方案不可缺少的药物，铂类药物通过与细胞内亲核的 DNA结合，导致DNA链间交链或链内交链，引起 DNA损伤，从而导致细胞死亡。而顺铂(DDP)等细胞毒性化疗药物对肿瘤损伤后，肿瘤细胞的 DNA修复机制启动。具有较高修复能力的肿瘤细胞易于对化疗耐药，研究提示，DNA修复基因的表达状况可能作为化疗疗效相对理想的预测因子。

　　3.2 BRCA1基因的表达与化疗疗效、生存 BRCA1 基因定位于人染色体 17q12-21，是一种抑癌基因，阻滞细胞周期于 G/M期，并诱导细胞凋亡[4]。BRCA1通过与其他修复因子的直接相互作用或通过DNA调控通路中其它基因的表达水平来介导损伤修复，是一个重要的细胞周期负调控子[5]。研究发现上调 BRCA1表达对顺铂耐药增加[6]，认为BRCA1的高表达使细胞修复能力增强，从而使细胞不易被化疗药物杀死导致耐药，BRCA1低表达却不易形成铂类耐药，增加化疗有效的机率。

　　本组测定81例晚期非小细胞肺癌组织中BRCA1基因的表达情况发现，BRCA1的表达与性别、年龄、病理类型、临床分期、吸烟状况均无明显差异性，与大部分研究结果一致[7～10]。

　　本试验观察含铂类化疗的治疗效果发现，BRCA1的表达与化疗有效率相关，阴性组的有效率明显高于阳性组，此结果与多数学者认为的BRCA1高表达与铂类耐药有关相符。认为BRCA1的高表达使细胞修复能力增强，从而使细胞不易被化疗药物杀死，导致耐药。本试验对于1年生存情况获得有意义结果，证实BRCA1阴性组的1年存活人数显著多于阳性组，考虑BRCA1表达阴性的晚期NSCLC患者预后较好，但本试验结果显示BRCA1的表达与疾病进展时间及生存时间均无统计学意义，BRCA1与总生存未获得阳性结果，考虑是否与样本量少有关。陈芹等[11]研究32例Ⅰ～Ⅲ期“肺癌根治术”后NSCLC患者的BRCA1表达情况，结果显示BRCA1高表达组的生存期明显长于低表达组(P=0.01)，与本试验结果正好相反。Rosell等[12]研究证实，在晚期 NSCLC患者中 RRM1低表达者的中位生存期显著长于高表达者。Simon等[13]报道晚期NSCLC患者ERCC1高表达往往导致癌细胞对铂类制剂耐药,使化疗失败。而BRCA1与ERCC1、RRM1同属于DNA修复相关基因[14]，是否可以猜想BRCA1基因的表达情况对于肺癌患者预后的影响也可能因病期早晚而有不同，不过，本试验样本量不够大，故这一假设仍需进一步探讨。

　　肺癌的发生发展是一个长期的、多阶段的、多基因改变累积的过程，具有多基因控制和多因素调节的复杂性;肺癌的治疗反应、预后也是多因素、多环节、多通道相互制约、相互影响的结果，任何一种机制都不可能完全解释肺癌顺铂耐药现象的发生。因此 ，有必要对肺癌顺铂耐药机制进行纵深研究，以期指导临床真正达到治疗个体化，使患者获得最大受益。

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