p27、PCNA在乳腺癌中的表达及相关性研究

　　作者：张静, 藏永红 作者单位：(新疆医科大学附属中医医院病理科，新疆 乌鲁木齐 830000)

　　【摘要】 目的：探讨p27、PCNA在乳腺癌中表达的意义及相关性。方法：应用免疫组化S-P法检测48例乳腺癌中p27、PCNA的表达情况,并与29例乳腺良性病变进行对照分析。结果：乳腺良性病变p27、PCNA的阳性率分别为79.3%(23/29)、27.6%(8/29)。乳腺癌p27、PCNA的阳性率分别为42%(20/48)、77.1%(37/48)，差异具有统计学意义(P<0.01)。乳腺癌p27的表达与族别、年龄无关(P>0.05)，与组织学分级相关(P<0.01);PCNA的表达与族别、年龄、组织学分级均无关(P>0.05)。乳腺癌p27、PCNA的表达呈负相关(P<0.05)。结论： p27、PCNA表达异常在乳腺癌的发生、发展中具有重要的作用,两者具有相互作用。p27、PCNA可用于良、恶性乳腺疾病的鉴别，对乳腺良性病变的恶性转化有一定的预兆性。

　　【关键词】 乳腺癌; p27; PCNA

　　Expression and correlation of p27, PCNA in breast carcinoma

　　ZHANG Jing, ZANG Yong-hong

　　(Department of Pathology, Affililated Traditional Chinese Medicine Hospital,

　　Xinjiang Medical University, Urumqi 830000, China)

　　Abstract: Objective: To study the expressions and correlation of p27and PCNA in breast carcinomas. Methods: The expression of p27 and PCNA were studied in 48 cases of breast carcinoma by immumohistochemical technology. 29 cases of benign lesions served as control. Result: Positive rates of p27, PCNA in breast benign lesions were 79.3%(23/29), 27.6%(8/29) respectively. Positive rates of p27, PCNA in breast carcinomas were 42%(20/48), 77.1%(37/48) respectively. Positive rates of p27, PCNA in breast benign lesions and in breast carcinomas had significances of statistics (P<0.01). The expression of p27 in breast carcinomas did not correlate with age, nation (P>0.05). But expression of p27 in breast carcinomas was associated with hitological grading (P<0.01), the expression of PCNA in breast carcinomas did not correlate with age, nation, histological grading (P>0.05). There was a negative correlation between the expressions of p27 and PCNA in breast carcinomas (P<0.05). Conclusion： Abnormal expression of p27, PCNA play an important role initiation and development of breast carcinomas. P27,PCNA interact with one another in breast carcinomas. p27, PCNA can be used to identify benign and malignant breast disease. There is some significance of prediction as malignant change of breast benign lesions.

　　Key words: breast carcinoma;p27; PCNA

　　乳腺癌是人类最常见的一种恶性肿瘤。各国因地理环境、生活习惯的不同，乳腺癌的发病率有很大的差异。北美和北欧大多数国家是乳腺癌的高发区，我国虽属女性乳腺癌的低发国，但近些年来乳腺癌的发病率有明显增高趋势。本研究应用免疫组化S-P法检测乳腺癌p27、PCNA的表达情况，旨在探讨其表达的意义及其相关性，现报道如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料 选取新疆医科大学附属肿瘤医院病理科2004年9～12月乳腺癌根治术后的石蜡包埋组织块及乌鲁木齐市友谊医院1999～2005年乳腺癌根治术后的石蜡包埋组织块48例。良性病变(乳腺腺病和乳腺纤维腺瘤)取自乌鲁木市友谊医院2001～2004年石蜡包埋组织块29例。所有病例均复查无误。上述标本均切成4 μm厚的石蜡切片，连续切成4张，分别行HE染色和免疫组化染色。乳腺癌的组织学分级按2003年WHO乳腺癌组织学分级及分类标准。根据腺管数量、细胞核异型性及核分裂3项9分评定为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级。

　　1.2 方法 应用免疫组化S-P法，一抗为鼠抗人p27、PCNA单克隆抗体。S-P(鼠/兔)试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司，按试剂盒说明书操作，以PBS代替一抗作为阴性对照，用已知阳性的肿瘤标本作为阳性对照。

　　1.3 结果判断标准 p27的阳性表达定位于胞核/胞浆;PCNA的阳性表达定位于胞核(参照福州迈新生物技术开发有限公司免疫和分子病理学产品目录)。胞核型：以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性标志。选5个高倍视野观察，阳性细胞核<5%为(-)，阳性细胞核<25%为(+)，阳性细胞核达25%～50%为(++)，阳性细胞核>50%为(+++)。胞浆型：根据每张切片的阳性细胞比例及着色深浅记分。选5个高倍视野观察:(1)无色为0分 ，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。(2)阳性细胞<5%为0分，阳性细胞<25%为1分，阳性细胞<50%为2分，阳性细胞>50%为3分。将(1)和(2)相加，(-)为0～1分，(+)为2～3分，(++)为4～5分，(+++)为6～7分。

　　1.4 统计学处理 应用SPLM 统计软件对数据进行统计学分析，采用χ2检验、Spearman等级相关，检验水准α=0.05。

　　2 结果

　　2.1 乳腺良恶性病变中p27、PCNA的阳性表达情况 在乳腺癌中PCNA的阳性表达为胞核出现棕黄色颗粒(图1)。p27的阳性表达为胞核或胞浆出现棕黄色颗粒，但以胞核为主(图2)。p27在乳腺癌中的阳性表达率(42.0%)明显低于乳腺良性病变的阳性表达率(79.3%)，差异具有统计学意义(P<0.01);PCNA在乳腺癌中的阳性表达率(77.1%)明显高于乳腺良性病变的阳性表达率(27.6%)，差异具有统计学意义(P<0.01),见表1。

　　2.2 不同民族乳腺癌患者p27、PCNA的表达情况 乳腺癌中p27、PCNA的阳性表达率在少数民族(包括维吾尔族和回族)和汉族间差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。表1 乳腺良恶性病变中p27、PCNA 的阳性表达表2 不同民族乳腺癌患者p27、PCNA的阳性表达[例 (%)]

　　2.3 不同年龄乳腺癌患者p27、PCNA的表达情况 乳腺癌中p27、PCNA的阳性表达率在不同年龄患者中差异无统计学意义(P>0.05),见表3。表3 不同年龄乳腺癌患者p27、PCNA的阳性表达

　　2.4 乳腺癌中p27、PCNA在不同组织学分级中的表达情况 乳腺癌Ⅰ～Ⅱ级中p27阳性表达率(58.6%)高于乳腺癌Ⅲ级(15.8%)，差异具有统计学意义(P<0.01)，与乳腺癌组织学分级相关;PCNA的阳性表达率在乳腺癌不同组织学分级中差异无统计学意义，与乳腺癌组织学分级无关(P>0.05),见表4。表4 乳腺癌中p27、PCNA在不同组织学分级中的　阳性表达

　　2.5 乳腺癌中p27、PCNA的相关性 乳腺癌中PCNA、p27的表达呈负相关(r=-0.358 6, P<0.05),见表5。表5 乳腺癌中 p27、PCNA表达的相关性

　　3 讨论

　　3.1 p27与乳腺癌发生的关系 p27是一种新型的肿瘤抑制基因，一种新的细胞周期相关因子[1]，有促进细胞凋亡,参与细胞分化调控的作用。作为胞外信号是与细胞周期联系的媒介，有调节肿瘤耐药性、防御炎性损伤等功能[2]。细胞周期中p27蛋白水平在G0期细胞最高，在S期细胞难以检测到。现已证实,p27在真核细胞周期调控中起至关重要的作用[3]。p27基因转染细胞的过量表达可使细胞DNA合成强烈受抑,阻止其从G1期进入S期。p27抑制细胞周期蛋白依赖性激酶(Cyclindependentkinase,CDK)的活性是通过阻断CDK的激活过程而实现的,p27通过与CDK亚单位的结合,使CDK激酶(Cyclinactivatingkinase,CAK)不能与CDK发生直接作用,从而阻断了CAK诱导CDK4Thr172和CDK2Thr160的磷酸化过程,使CDK处于非活性状态,对细胞周期实行负调控，其最终的结果是抑制细胞分裂和增殖，促进细胞分化和凋亡。p27是一种抑癌基因，其活性受多种因素调节,当p27表达下降或缺失时,可导致细胞的不稳定,甚至引起肿瘤的发生。在肿瘤细胞中极少突变或缺失,仅在极少数肿瘤组织中发现p27基因的改变。所以，p27和肿瘤的关系主要体现于其蛋白的化学剂量的关系上，即原发性肿瘤及其细胞系中p27的蛋白量远低于正常细胞中的量，如原发性卵巢腺癌、前列腺癌、乳腺癌等[4，5]。

　　本研究发现,p27在乳腺癌中的表达率为42%,在乳腺良性病变中的表达率为79.3%,差异有统计学意义(P<0.01)。说明p27作为抑癌基因蛋白在乳腺癌中表达下降,从而失去其对细胞周期的负性调控作用,使DNA合成增加,大量细胞进入S期,造成细胞异常增殖,导致肿瘤发生。提示p27蛋白可用于良、恶性乳腺疾病的鉴别，可能参与乳腺癌的发生、发展，对乳腺良性病变的恶性转化有一定的预兆作用。本研究发现,p27蛋白与乳腺癌组织学分级具有相关性，随着组织学分级的增高，p27蛋白的表达下降。提示p27基因的改变是乳腺癌发生、发展的重要分子事件之一,在乳腺癌进展过程中,随着肿瘤恶性程度的增高，p27表达逐渐下调,功能逐步丧失。本研究发现乳腺癌p27的表达与患者的族别、年龄无关。

　　3.2 PCNA与乳腺癌发生的关系 增殖细胞核抗原(PCNA)是一种仅在增殖细胞中合成或表达的核内多肽,其合成、表达与细胞周期有关。PCNA从细胞增殖周期G1期开始出现在细胞核内,S期最为明显。因此,免疫组化方法显示PCNA表达阳性细胞是处于DNA合成期细胞,即分裂增殖状态的细胞。PCNA在肿瘤的良恶性的划分、恶性程度的确定等方面有广泛的应用[6]。

　　本研究发现,PCNA在乳腺癌中的表达率为77.1%,在乳腺良性病变中的表达率为27.6%,在乳腺癌中的表达明显高于乳腺良性病变中的表达(P<0.01)。提示PCNA可用于良、恶性乳腺疾病的鉴别，可能参与乳腺癌的发生、发展,对乳腺良性病变的恶性转化有一定的预兆作用。本研究发现乳腺癌PCNA阳性表达率在Ⅰ～Ⅱ级为75.9%，在Ⅲ级为78.9%，两者相比差异无统计学意义(P>0.05)。提示无论乳腺癌的分化程度如何，其恶性细胞均保持较高的增殖活性。本研究发现乳腺癌PCNA的表达与患者的族别、年龄无关。

　　3.3 乳腺癌 p27、PCNA的相互关系 本研究发现， p27表达下降或缺失与乳腺癌的生物学行为有关,显示当病变组织中p27表达下降或缺失时,其增殖活性可能较高, 即p27与PCNA呈负相关。由此推断p27是抑制细胞增殖的，当p27表达减弱，导致细胞周期失控，其抑制增殖的功能减弱，引起细胞恶性增殖，引起PCNA表达升高。此外，PCNA在G0期不表达，p27在G0期高表达,也验证了两者呈负相关。提示P27、PCNA在乳腺癌的发生、发展过程中可能具有拮抗作用。

　　综上所述，乳腺癌的发生是多因素、多阶段、进行性的过程，存在着细胞周期调控的异常、基因的突变、缺失或蛋白水平的变化，p27作为细胞周期抑制剂,具有多种生物学功能。p27蛋白是通过翻译和泛素蛋白酶体降解来进行调节的。p27蛋白通过影响cyclin CDK复合物活性来阻滞细胞停滞于G1期,从而抑制细胞增殖,诱导细胞分化，促进细胞凋亡。PCNA是反映细胞增殖活性的指标，与其它指标的联合应用将更有助于肿瘤的诊断。

　　【参考文献】

　　[1] 许双塔，许东坡.新型侯选肿瘤抑制基因p27的研究进展[J]. 福建医科大学学报,2000，6(34)：4-5.

　　[2] 郭贵龙.抑癌基因p27的分子调控机制研究进展[J].山西医科大学学报,2001，10(32)：5.

　　[3] King RW, Deshaies RJ, Peter JM, et al. How proteolysis drive sthecell cycle[J] Science，1996，274(5293):1652.

　　[4] Fernadez PL, Arce Y, Farre X, et al. Expression of p27 is down-regulated in human prostatye carcinoma proression[J].Am J Pathol,1999，187：563.

　　[5] 薛兴欢，代志军，苏宝山，等.P27蛋白在乳腺癌中的表达及临床病理意义[J].第四军医大学学报,2003，24(13): 1231-1233.

　　[6] 周金良，陈长春，邵 渊.p53,c-erBb-2,PCNA,EGFR等在膀胱癌中过表达及意义[J].临床与实验病理学，1998，(6)：535-541.