CTGF与TGF-β1在胃癌组织中的表达及其意义

　　作者：赵刚　 窦拉加　 张成武　 李菊英 作者单位：1.青海大学医学院 ;2.青海大学附属医院

　　【摘要】 目的 探讨结缔组织生长因子与转化生长因子-β1在胃癌组织中的表达及其意义。方法 利用免疫组织化学方法检测50例胃癌组织和正常组织中CTGF、TGF-β1的表达，并分析其与胃癌临床病理因素之间的关系和意义。结果 胃癌组织中CTGF、TGF-β1的阳性表达率均明显高于正常组织(P<0.05);CTGF的高表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移与否、临床分期均密切相关(P<0.05);TGF-β1的高表达与胃癌的分化程度和淋巴结转移密切相关(P<0.05);相关分析显示在胃癌组织中CTGF和TGF-β1的表达呈正相关关系(rs=0.355,P=0.012)。结论 CTGF和TGF-β1在胃癌组织中均呈现高表达，并且与胃癌的分化程度、淋巴结转移与否有关，两者联合检测可以作为胃癌早期诊断和预后判断的指标。

　　【关键词】 胃癌 结缔组织生长因子 转化生长因子-β1

　　EXPRESSION OF CTGF AND TGF-β1 AND THEIRSIGNIFICANCE IN GASTRIC CANCER

　　Zhao Gang1,Dou Lajia2,Zhang Chengwu2,Li Juying1

　　(1.Qinghai University Medical College; 2. Qinghai University Affiliated Hospital )

　　Abstract Objective To investigate the expression and significance of Conective tissue growth factor(CTGF)and Tranforming grouth factor-β1(TGF-β1)in gastric carcinoma. Methods The expression of CTGF and TGF-β1 in 50 patients with gastric cancer was examined by immunohistochemistry. Results The expression of CTGF and TGF-β1 was higher in GC group than that of in normal (P<0.05); Expression of CTGF were highly correlated with the carcinoma's degree of differentiation, lymph node metastasis and clinical stage (P<0.05); Expression of TGF-β1 were highly correlated with the carcinoma's degree of differentiation and lymph node metastasis (P<0.05) too; And CTGF and TGF-β1 overexpression were positively correlated in gastric carcinoma(rs=0.355,P=0.012). Conclusion All of CTGF and TGF-β1were over-expressed in gastric carcinoma, and correlated with the differentiation and tlymph node metastasis. It is considered that detection of CTGF and TGF-β1 may serve as fairly good index for early diagnosis and evaluating the prognosis of gastric carcinoma.

　　Key words Gastric carcinoma CTGF TGF-β1

　　结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)属于即刻早期基因家族的一员，在人类多种组织器官中表达，参与细胞增殖和组织的形成[1]。研究发现，CTGF的表达水平与人类多种组织的恶性肿瘤的发生、进展、浸润转移及其预后密切相关[2]。但有关CTGF与胃癌相关性的研究较少，还不能确定其与胃癌的具体关系。CTGF是转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的下游介质，在多种细胞类型中，可在转录水平经多种途径被TGF-β1诱导产生。TGF-β1是一种负性细胞生长调节因子，与胃癌的发生进展及其临床病理特征都有较强的相关性。本研究利用免疫组织化学方法对50例胃癌组织和正常组织中的CTGF、TGF-β1表达情况进行检测分析，初步探讨CTGF 与胃癌的关系，以及CTGF与TGF-β1联合检测在胃癌诊断和预后判断中的意义。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　收集青海大学附属医院2007年9月～ 2008年9月的胃癌切除标本50例作为实验组，其中男性41例，女性9例，年龄35～ 80岁，平均55.7岁;标本经病理证实均为胃癌，同时进行分级：高分化8例，中分化15例，低分化27例;按照国际抗癌联盟2002年TNM临床分期标准：Ⅰ+Ⅱ期22例，Ⅲ+Ⅳ期28例。以距癌灶5 cm远组织作为正常对照组织。各组患者术前均未接受放化疗。

　　1.2 主要试剂

　　鼠抗人多克隆CTGF浓缩型工作液购自美国R&D system corporation, HistostainTM-plus kits 试剂盒、浓缩型DAB显色试剂盒、多聚赖氨酸购自北京中杉金桥生物科技有限公司。兔抗人转化生长因子β1免疫组化多克隆抗体、即用型免疫组化ElivisionTM-plus 试剂盒(鼠/兔)购自福州迈新生物技术开发有限公司。

　　1.3 方法

　　所有组织均在10%甲醛中固定，常规石蜡包埋，连续切片(厚度5μm)，每例制片3张，附着在经多聚赖氨酸处理过的载玻片上备用。CTGF的染色严格按照试剂盒说明书采用S-P法染色;TGF-β1的染色按照说明采用常规S-ABC法染色。苏木素复染，中性树胶封片。

　　1.4 结果判定标准[3]

　　免疫组织化学染色结果的判读：阳性细胞数≤25 %为+ ,25 %～50 %为++ , > 50 %为+++ ,无阳性细胞为-。并规定，“+～+++”为阳性表达，“-”为阴性表达。

　　1.5 统计学处理方法

　　数据统计均使用SPSS V12.0 for windows软件进行处理。结果用百分率表达，显著性检验采用χ2检验，CTGF和TGF-β1在胃癌组织中表达的相关性检验采用Spearman相关分析;检验水准为α=0.05。

　　2 结 果

　　2.1 不同组织中CTGF 和TGF-β1的表达

　　在正常对照组CTGF表达的阳性率为6.0%，实验组阳性表达率为64%，两者比较P<0.05，有显著统计学差异。TGF-β1在正常粘膜和胃癌组织组的阳性表达率分别为14.0%和84.0%，两者比较P<0.05，有显著的统计学意义。具体比较见表1。表1不同组织中CTGF和TGF-β1的表达比较结

　　2.2 CTGF、TGF-β1的表达与胃癌临床病理因素之间的关系

　　CTGF在胃癌组织中阳性染色主要位于癌细胞胞质中，呈弥漫性分布(图1);TGF-β1主要表达于癌细胞胞质中，呈弥漫性分布(图2)。CTGF和TGF-β1的表达与胃癌临床病理因素之间的关系见表2。由表2可见，胃癌的分化程度、淋巴结转移与否，临床分期与CTGF表达的阳性率的差异具有显著的统计学意义(P<0.05);而与性别、年龄的差异无统计学意义(P>0.05)。TGF-β1的高表达与胃癌患者的年龄、性别、临床分期的差异无统计学意义(P>0.05),与胃癌的分化程度、淋巴结转移与否的差异有统计学意义(P<0.05)。表2胃癌临床病理因素与CTGF、TGF-β1表达之间的关系

　　2.3 胃癌中CTGF和TGF-β1表达的相关性

　　胃癌中CTGF和TGF-β1表达的相关性见表3。相关性检验r =0.355，在胃癌组织中CTGF与TGF-β1的表达呈正相关关系。表3胃癌中CTGF和TGF-β1表达的相关性

　　3 讨论

　　3.1 CTGF对胃癌生物学行为的影响

　　研究表明，CTGF的生物学作用主要表现在促进血管生成;刺激、促进细胞迁移;调节基底膜的降解和合成;诱导细胞凋亡 ;促纤维化作用;促进细胞粘附、增殖和存活等功能。随着研究的深入，逐渐发现CTGF与肿瘤的关系也很密切。CTGF在肝细胞癌、脑胶质瘤、食管腺癌中阳性或高水平表达者与阴性或低水平表达者比较,肿瘤细胞的浸润转移能力强;CTGF可能是这几种肿瘤的一个潜在的促肿瘤形成因子[4]。这可能与CTGF影响肿瘤血管生成,从而影响肿瘤细胞的转移有关。许多肿瘤的发生还与细胞周期紊乱、细胞无限增殖有关, CTGF可介入细胞周期,影响细胞的有丝分裂,其通过调控细胞周期素A(CyclinA)基因的表达,升高CyclinA水平,使细胞从G1期进入S期，从而参与了肿瘤的发生与发展过程。

　　本研究发现CTGF在胃癌组织中的阳性表达率明显高于正常组织的阳性表达率，差异具有显著的统计学意义，说明CTGF可能有促进胃癌发生的作用，这与一些研究[4～9]发现CTGF在食管鳞状细胞癌、甲状腺癌、胰腺癌、喉鳞状细胞癌、肺癌、结直肠癌中可作为肿瘤抑制因子发挥作用的研究结果截然相反，具体原因有待进一步的研究。

　　通过本研究还发现，CTGF在低分化胃癌组中的表达明显较高中分化组高，两者比较具有显著的统计学意义;在有淋巴结转移组中的表达也明显高于无淋巴结转移组,具有显著的统计学意义;在临床分期中，Ⅲ+Ⅳ组的阳性表达率明显高于Ⅰ+Ⅱ期组，具有显著的统计学意义。而CTGF的高表达与患者的年龄、性别之间没有明显的关系。这与Lu-Ying Liu等[10]的报道一致。通过本研究结果可以看出，CTGF是胃癌发生发展过程中的一个重要的影响因素，且CTGF高表达患者表现为肿瘤组织分化相对较差、有淋巴结转移和病程相对较晚的特征。因此我们认为，CTGF在肿瘤恶化的过程中可能起到促进的作用，在临床中将CTGF作为胃癌患者的常规检查因子之一，可起到判断病程和指导治疗方案选择的作用;但是CTGF在胃癌的发病过程中具体以什么方式影响肿瘤的演进还有待进一步的研究。

　　3.2 TGF-β1对胃癌生物学行为的影响

　　TGF-β1主要在内皮细胞、血细胞、结缔组织细胞和上皮细胞中表达，参与细胞的增殖、分化及凋亡等生理、病理过程。Naef[11]研究发现，正常胃粘膜TGF-β1主要在壁细胞和一些粘液细胞的胞浆中表达，在胃癌组织中位于癌细胞的胞浆中，胃癌TGF-β1 mRNA含量高于正常胃粘膜4.8倍。Kinugasa[12]应用免疫组化技术对50例胃癌手术后患者进行回顾研究发现TGF-β1高表达者5年生存率明显低于TGF-β1低表达者，说明TGF-β1的表达与胃癌患者的预后密切相。Nakamura[13]应用RT-PCR技术对进展期胃癌患者术前胃镜活检标本TGF-β1 mRNA进行检测，发现TGF-β1 mRNA阳性组分级更差、淋巴结转移更多、存活时间更短。也有研究认为TGF-β1表达水平与肿瘤预后无关[14]。还有报道认为，在早期胃癌中，TGF-β1 mRNA水平高于累及固有肌层的胃癌，无淋巴结转移的胃癌高于有淋巴结转移的胃癌，因此认为TGF-β1更可能与胃癌早期发病机制相关。

　　本研究发现，TGF-β1在胃癌组织中的表达明显高于正常组织，两者比较具有显著的统计学意义。同时发现，TGF-β1的表达与胃癌患者的年龄、性别、临床分期无关,而在低分化组织中的表达明显高于高中分化组织，两者比较具有显著的统计学意义;有淋巴结转移组的阳性表达率明显高于无淋巴结转移组,说明TGF-β1的过度表达与胃癌的恶性程度密切关系，TGF-β1表达情况患者具有肿瘤瘤细胞分化差、淋巴结转移率高的倾向，这与吴道宏等[15]的研究结果一致。本研究中发现，TGF-β1的表达在胃癌不同临床分期中没有显著的差异，原因有待于进一步的研究。我们认为，TGF-β1的高表达可以作为术前病情评估和术式选择的依据。

　　3.3 CTGF与TGF-β1在胃癌组织中的表达相关性

　　本研究发现，CTGF与TGF-β1在胃癌中的表达呈正相关关系(RS=0.355,P=0.012)，即TGF-β1高表达组织中CTGF也表现为较高的表达水平，可能是因TGF-β1对CTGF产生诱导原因。我们认为CTGF和TGF-β1在促进肿瘤的演进过程中具有协同性。这些结果提示，在胃癌患者术前胃镜检查过程中联合检测CTGF和TGF-β1对胃癌的诊断、治疗和预后判断可起到积极的指导作用。

　　【参考文献】

　　[1]吴秀珍,赵静,任鹏.结缔组织生长因子的研究进展[J].中国煤炭工业学杂志, 2006,9(7):673 -675

　　[2] Hishikawa K, Oemar B S , Tanner F C, et al. Connective Tissue Growth Factor Induces Apoptosis in Human Breast Cancer Cell LineMCF2[J]. J Biol Chem ,1999,274(52):37461-37466

　　[3] 邢传平，刘斌，董亮.免疫组织化学标记结果的判断方法[J].中华病理学杂志，2001,30(4):318

　　[4] KoliopanosA, Friess H, DiMola FF, et al. Connective Tissue Growth Factor Gene Expression Alters Tumor Progression in Esophageal Cancer[J]. World J Surg, 2002,26(4):420-427

　　[5] 陶秀平,张裕华,刘福云. 甲状腺癌CTGF、TGF-β1表达及其临床病理意义[J]. 医学临床研究,2005,22 (7):936-938

　　[6] 杨竹林,黄生福,苗雄鹰,等. 胰腺癌组织中CCN家族基因和转化生长因子-β1表达及其临床病理意义[J]. 中华实验外科杂志,2005,22(10):1276

　　[7] 李友忠,卢永德,曾益慈,等. 喉鳞状细胞癌组织中CTGF和OPN的表达及其临床意义[J]. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志,2007,21(3): 121-123

　　[8] 董秀明. 结缔组织生长因子可降低结直肠癌转移率[J]. 中华放射肿瘤学杂志, 2005, 14 (3):176

　　[9] Iin BR, Chang CC,Chen TF, et al. Connective Tissue Growth Factor Inhibits Metastasis and Acts as an Independent Prognostic Marker in Colorectal Cancer[J]. Gastroenterology,2005,128(1):9-23

　　[10] Lu-Ying Liu, Yan-Chun Han, Shu-Hua Wu，et al. Expression of connective tissue growth factor in tumor tissues is an independent predictor of poor prognosis in patients with gastric cancer[J]. World Journal of Gastroenterology,2008 ,14(13): 2110-2114

　　[11] Naef M，Ishiwata T，Friess H，et al.Diferential localization of transforming growth factor-beta iseforms in human gastric mucosa and overexpression in gastric carcinoma[J].Int J Cancer，1997，71(2)：131-137

　　[12] Kinugasa S，Abe S，Tachibana M，et al.Overexpression of transforming growth factor-betal in scirrhous carcinoma of the stomach correlates with decreased survival[J].Oncology，1998，55(6)：582-587

　　[13] NakamuraM，Katano M，Kuwahara A，et al.Transforming growth factor betal(TGF-beta1)is a preoperative prognostic indicator in advanced gastric carcinoma[J].Br J Cancer，1998，78(10)：1373-1378

　　[14]Natsugoe S，Xiangrning C，Matsumoto M，et al.Smad4 and trail S-forming growth factor beta expression in patients with squamous cell carcinoma of the esophagus[J].Clin Cancer Res，2002，8(6)：1838-1842

　　[15] 吴道宏，吴本俨，王孟薇，等.VEGF、TGF-β1在早期胃癌中的表达及意义[J].现代肿瘤医学,2008,16(6)：999-1001