COX2、Survivin在乳腺良、恶性疾病中的表达及其意义

　　作者：艾秀清， 赵峰， 李景英， 张银华 作者单位：(新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺放疗科， 新疆乌鲁木齐830011)

　　【摘要】目的：探讨环氧化酶2(COX2)和生存素(Survivin)在乳腺良性病变、乳腺导管原位癌及乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组化染色法检测乳腺良性病变、乳腺导管原位癌、乳腺浸润性导管癌组织中COX2和Survivin的表达情况。结果：COX2在乳腺浸润性导管癌中的阳性表达率为81.67%，明显高于乳腺良性病变(50.00%)和乳腺导管原位癌(76.67%)，差异有统计学意义(P<0.05)。Survivin在乳腺浸润性导管癌中阳性表达率为70.00%，明显高于乳腺良性病变(41.67%)和乳腺导管原位癌(60.00%)，差异有统计学意义(P<0.05)。COX2阳性表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移、临床分期、雌激素受体(ER)阳性表达有关(P<0.05)，而与患者发病年龄、肿瘤大小、孕激素受体(PR)情况、患者是否绝经无关(P>0.05)。Survivin阳性表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05)，而与患者年龄、肿瘤大小、ER、PR、患者是否绝经无关(P>0.05)。在乳腺浸润性导管癌中COX2阳性表达与Survivin阳性表达呈正相关(r=0.33, P<0.05)。结论：COX2与Survivin在乳腺癌的发生、发展中起重要作用。COX2与Survivin阳性表达密切相关，在乳腺癌的发生、发展中起协同作用。

　　【关键词】 环氧化酶2; 生存素; 乳腺癌; 免疫组化

　　Expression and clinical significance of COX2, Survivin in breast benign lesion and breast carcinoma

　　AI Xiuqing， ZHAO Feng， LI Jingying，et al

　　(Department of Radiation Oncology， Affiliated Tumor Hospital， Xinjiang Medical University，Urumqi 830011, China)

　　Abstract： Objective： To investigate the relationship between the expression of cyclooxygenase2 (COX2) and survivin in breast benign lesion， ductal carcinoma in situ and invasive breast carcinoma and their clinical significances. Methods: Sixty cases of breast benign lesion, 60 cases of ductal carcinoma in situ and 60 cases of in invasive breast carcinoma were detected by of the immunohistochemical staining. Results： The positive rate of COX2 were 50.00% (30/60) in breast benign lesion， 76.67%(46/60) in breast ductal carcinoma in situ and 81.67%(49/60) in breast invasive ductal carcinoma, the difference showed statistically significance (P<0.05). In breast benign lesion the positive rate of survivin was 41.67% (25/60), in breast ductal carcinoma in situ it was 60.00%(36/60)， in breast invasive ductal carcinoma the positive rate of survivin was 70.00% (42/60)， which were significantly different (P<0.05). COX2 expression was not associated with patient’s age, tumor size, PR state, menopause or not (P>0.05), but it was correlated with patient’s lymph node metastasis, clinical stages, estrogen receptor positive (P<0.05). Survivin expression was not associated with patient’s age, tumor size, ER state, PR state, menopause or not (P>0.05)， but it was correlated with patient’s lymphnode metastasis, clinical stages (P<0.05). COX2 expression was positive relation to survivin expression (r=0.33，P<0.05). Conclusion: COX2 and survivin might play an important role in the carcinogenesis and progression in breast carcinoma. A positive correlation between expression of COX2 and survivin were observed in breast carcinoma，COX2 has coordinated action with survivin in the carcinogenesis and progression in breast carcinoma.

　　Key words： cyclooxygenase2; survivin; breast carcinoma; immuno histochemistry

　　乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，我国为乳腺癌低发的亚洲地区，但是近年来随着经济的迅猛发展、城镇化的逐步扩大，以及饮食西化和其他诸多因素的影响，乳腺癌的发病率呈明显上升趋势。乳腺癌的发生是一个多因素、多步骤、多阶段、多种癌基因和抑癌基因参与的复杂病理过程。环氧化酶(Cyclooxygenase，COX)是前列腺素合成过程的一个主要限速酶，可将花生四烯酸代谢成各种前列腺素(Prostaglandins，PGs)产物，哺乳动物的COX有两种同工酶COX1和COX2。近年大量文献研究表明，COX2不仅在炎症反应中起重要作用，且在多数肿瘤中过度表达，参与肿瘤的发生和发展，已逐渐成为作为肿瘤预防和治疗的靶点[1]。生存素(Survivin)是新近发现的一种凋亡抑制基因，它的主要作用是抑制肿瘤细胞凋亡，促进肿瘤细胞增殖，它在多种常见的肿瘤中表达[2]。本研究应用免疫组化染色检测乳腺良性病变、乳腺导管原位癌及乳腺浸润性导管癌中COX2、Survivin的表达并探讨其与临床病理的关系。

　　1资料和方法

　　1.1临床资料收集新疆医科大学附属肿瘤医院2004年3月～2006年3月间乳腺良性病变、乳腺导管原位癌及乳腺浸润性导管癌手术切除标本各60例，均为女性，其中乳腺浸润性导管癌中<45岁的22例，≥45岁的38例;肿瘤病灶直径<2 cm的6例，2～5 cm的37例，>5 cm的17例;腋窝淋巴结有转移者29例，腋窝淋巴结无转移者31例。按照乳腺癌TNM分期，临床Ⅰ期及以下20例，Ⅱ期8例，Ⅲ～Ⅳ期32例。免疫组化ER阳性34例，ER阴性26例，PR阳性38例，PR阴性22例。绝经前后各30例。乳腺癌病例术前均未接受新辅助化疗、内分泌治疗及放疗;乳腺良性病变选取乳腺腺病不伴有腺泡或导管上皮异型增生。所有标本均经10%甲醛溶液固定，常规石蜡切片，HE染色光学显微镜下行病理学诊断。

　　1.2免疫组织化学检测COX2、Survivin单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司，(PV9000)二步法免疫组化染色，步骤严格按照试剂盒说明进行，PBS代替一抗作阴性对照。

　　1.3结果判断免疫组化结果判定参照文献[3]，COX2阳性表达定位于细胞浆内，呈棕黄色颗粒。Survivin阳性表达定位于细胞浆和(或)细胞核内，呈棕黄色颗粒。在400倍光镜下至少观察5个视野，阳性细胞>5%为阳性。

　　1.4统计学处理所有数据采用SPSS10.0软件进行处理，采用χ2检验，列联系数分析其相关性，检验水准α=0.05。

　　2结果

　　2.1COX2和Survivin在乳腺良性病变、乳腺导管原位癌、乳腺浸润性导管癌中的表达情况乳腺良性病变与乳腺导管原位癌的COX2阳性表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺良性病变与乳腺浸润性导管癌的Survivin阳性表达比较差异有统计学意义。乳腺良性病变、乳腺导管原位癌、乳腺浸润性导管癌三者之间COX2阳性表达比较，差异具有统计学意义(χ2=16.39，P<0.05);Survivin的阳性表达三者比较，差异具有统计学意义(χ2=10.12，P<0.05)(表1)。

　　表1COX2与Survivin在乳腺良性病变、乳腺导管原位癌、乳腺浸润性导管癌中的阳性表达情况(略)

　　注： 与乳腺良性病变比较, *P<0.05

　　2.2乳腺浸润性导管癌各临床病理特征与COX2和Survivin的表达COX2表达与乳腺浸润性导管癌中腋窝淋巴结转移、临床分期、免疫组化ER阳性有关。COX2阳性表达随着临床分期的增加，呈逐步上升趋势，表现为正相关关系，三期比较差异有统计学意义(P<0.05)。Survivin阳性表达与乳腺浸润性导管癌中腋窝淋巴结转移、临床分期有关(P均<0.05)，见表2。

　　2.3乳腺浸润性导管癌中COX2表达与Survivin的相关性在49例COX2阳性表达病例中,Survivin阳性表达者38例，11例COX2阴性表达病例中,Survivin阳性表达4例。COX2与Survivin的表达呈正相关(r=0.33 ， P<0.05)(表3)。

　　表2乳腺浸润性导管癌中各临床病理特征与COX2、Survivin表达的关系(略)

　　表3乳腺浸润性导管癌中COX2与Survivin的相关性(略)

　　3讨论

　　人类COX2的基因编码现在已比较清楚，它在静息状态下几乎不表达，但炎症或肿瘤等病理反应过程中，细胞分裂素、生长因子、肿瘤促进因子等均可诱导COX2表达水平上调。Howe等[4]通过RTPCR检测13例乳腺癌中COX2表达均为阳性，而在乳腺正常组织中均为阴性，同时发现COX2水平与肿瘤恶性程度有关。本研究检测结果显示乳腺浸润性导管癌中的COX2阳性率为81.67%，明显高于乳腺良性病变和乳腺导管原位癌，差异有统计学意义(P<0.05)，与国外报道基本一致[5],提示与乳腺浸润性导管癌的发生、发展有关。乳腺癌的TNM临床分期根据乳腺癌肿块大小、腋窝淋巴结转移情况、是否有远处转移来划分，淋巴结转移通常是病情较晚的表现，也是恶性程度较高的一个体现。本实验显示COX2在乳腺浸润性导管癌中的阳性表达与肿瘤大小无关，但是实验结果又显示临床分期越晚，COX2阳性表达率越高，考虑是所选标本肿瘤组织分化程度低、恶性程度高所致。COX2阳性表达与患者腋窝淋巴结转移有相关性，与Costa等[6]的结论一致，显示了COX2高表达的患者有不良预后。而患者临床分期越晚其COX2阳性表达率上升，本研究ⅢⅣ期患者阳性率为96.88%。Tomozawa等[7]研究发现，大肠癌的高COX2表达与肿瘤复发和血行转移密切相关且COX2患者无病生存明显短于低表达者，COX2是唯一独立的与无病生存相关的因素。本研究结果显示ER阳性组的COX2表达高于ER阴性组，差异有统计学意义,提示雌激素与乳腺癌的发生有着密切关系。体外实验证明，雌激素促进乳腺细胞增生，抑制细胞凋亡。动物实验显示，服用雌激素可增加肿瘤发展速度。Survivin是迄今发现的最强的凋亡抑制因子，Survivin基因在正常人组织中不表达，在胚胎组织和许多肿瘤组织中呈阳性表达。Kajiwara等[8]认为在星形细胞瘤中Survivin的表达与肿瘤分级有关。张淑群等[9]认为Survivin的表达与乳腺癌淋巴结转移有关。本研究显示乳腺浸润性导管癌中的Survivin表达阳性率为70.00%(42/60)，明显高于乳腺良性病变(41.67%)和乳腺导管原位癌(50.00%)，这与Tanaka等[10]的结果基本一致。Survivin在乳腺良性病变、乳腺导管原位癌及乳腺浸润性导管癌中的表达呈逐渐上升趋势，差异有统计学意义。Survivin在乳腺浸润性导管癌中的表达与患者腋窝淋巴结转移、临床分期呈正相关。Survivin阳性表达提示病人预后不好。

　　本研究显示，在乳腺浸润性导管癌组织中COX2与Survivin的表达呈正相关(r=0.33，P<0.05)，即COX2阳性程度越高，Survivin阳性表达率越高。可能是由于COX2可抑制细胞色素C释放，从而抑制Caspase的活性，使凋亡抑制，而Survivin也有协同作用即可抑制细胞色素C从线粒体内释放出来，抑制细胞凋亡。乳腺肿瘤的发生、发展是多因素、多步骤、多阶段复杂的过程。COX2和Survivin在乳腺良、恶性疾病中起着不同程度的作用。有关二者相互作用的深入研究，需要分子生物学及临床更大样本的进一步研究。

　　【参考文献】

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　　[6] Costa C, Soares R, ReisFihlho JS, et al. Cyclooxygenase2 expression is associated with angigogenesis and lymph node metastasis in human breast cancer[J]. J Clin Pathol,2002, 55:429434.

　　[7]Tomozawa S， Tsuno NH， Sunaml E， et al. Cyclooxygenase2 overexpression correlates mith tumor recurrence especially hematogenous metastasis of coloretal[J].Br J Cancer，2000，61(3)：324328.

　　[8]Kajiwara Y， Yamasaki F， Hama S， et al. Expression of survivin in astrocytic tumors：correlation with malignant grade prognosis[J].Cancer，2003，97(4)：10771083.

　　[9]张淑群，强木云，杨文彬，等.Survivin蛋白在乳腺癌发生、发展的不同阶段的表达及意义[J].癌症，2004，23(6)：697700.

　　[10]Tanaka K, Iwamoto S, Gon G, et al. Expression of Survivin and its relationship to loss of apoptosis in breast carcinomas[J]. Clin Cancer Res,2000,6:127132.