Survivin在乳腺癌及大肠癌中表达的临床意义

　　作者：张秀昌 张杰 薄爱华 张晓丽 孙黎 作者单位：河北北方学院医学技术学院寄生虫教研室，河北 张家口 075000

　　【摘要】 目的:探讨大肠癌、乳腺癌中生存素的临床意义。方法:收集大肠癌68例，乳腺癌69例，利用SABC免疫组织化学方法，检测Survivin表达状况。结果：大肠癌和乳腺癌中Survivin阳性率分别为6324%和4203%，Survivin在大肠癌低分化组和深浸润组阳性率明显高于浅浸润和高分化组;在浸润型乳腺癌组和有淋巴结转移组Survivin阳性率明显增高。结论：Survivin表达与癌组织生物学特性有关;检测癌组织中Survivin表达可以提示预后及指导靶向治疗方案的制定。

　　【关键词】 生存素;乳腺癌;大肠癌;免疫组织化学方法

　　The Expression and Clinical Significance of Survivin in

　　Breast Carcinona and Large Intestine Cancer

　　ZHANG Xiuchang1，ZHANG Jie1，BO Aihua2，et al

　　1.Medical Technology Colledge,Hebei North University,Zhangjiakou,075000,Hebei,China;

　　2.Lab Centre,Hebei North University,Zhangjiakou,075000,Hebei,China

　　【ABSTRACT】 Objective:To study the expression and significance of survivin in breast cancer and Large intestine carcinona. Methods: The expression of survivin in 68 cases with colon cancer and 69 cases with breast carcinona was determined by SABC immunohistochemical technigue. Results:The positive rates of survivin were 6324%(43/68) and 4203%(29/69) in large intestine cancer and breast carcinona respectively.The positive rates of light differentiation group and invasive infiltration group were higher than that of violation muscularis group and well differentiation group in large intestine cancer.The positive rates of survivin in invasive breast cancer and lymph node metastasis group were higher than that of noninvasion type and nonlymph node metasis group. Conclusion:The expression of survivin was correlated with the characteristics of biology.Detection of survivin may be useful in predicting prognosis and leading therapeutic targt design.

　　【KEY WORDS】 Survivin; Breast cancer; Large intestine cancer; Immunohisochemistry method

　　生存素(又称生存蛋白;Survivin)能够抑制细胞凋亡，促进肿瘤形成，因此它也属于癌基因之一，一般在胚胎时期或干细胞中呈阳性表达，而在成熟细胞内则无阳性表达，因此目前对肿瘤细胞中Survivin表达状况，倍受生物医学界重视[1,2]。我们采集大肠癌和乳腺癌标本共计137例，检测了癌细胞中Survivin的表达状况，为临床开展靶向化学治疗提供科学依据。

　　1 资料和方法

　　11 一般资料 收集20056~20065月间，张家口市第五医院和河北北方学院附属第一医院手术切除大肠癌标本68例(男36例，女32例)，患者年龄分布35~83岁，平均年龄585岁，中位年龄59岁。乳腺癌切除标本69例，全部为女性患者，患者27~72岁，平均年龄478岁，中位年龄48岁。

　　12 标本处理和切片 将新鲜标本固定于10%中性甲醛内24h，常规乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。切片厚度5μm,裱于涂胶玻片上，37℃贮存待染。

　　13 染色 SABC免疫组织化学染色程序按照试剂盒规程进行操作。其中抗原修复采用微波法;Ⅰ抗室温过夜，Ⅱ、Ⅲ抗体分别37℃(30′)。阳性对照为已知胃癌阳性切片;PBS代替Ⅰ抗作阴性对照。

　　14 统计学处理 组间比较采用χ2检验，P<005为差异性显著。

　　2 结果

　　Survivin阳性细胞的胞质呈黄色或棕黄色，胞核不着色或着色很浅。在一张切片上随机选择10个高倍视野，阳性细胞>10%者为阳性病例。Survivin的阳性率在大肠癌和乳腺癌中分别位6324%(43/68)和4203(29/69)。Survivin在大肠癌中阳性率明显高于乳腺癌P<005。Survivin表达与癌组织病理类型及淋巴结有否转移的相关性见表1、2。表1 乳癌类型及有否转移与Survivin表达的关系注：△与浸润型导管癌和浸润型小叶癌差异明显(P<005)▲与无淋巴结转移差异显著(P<005) 表2 Survivin表达与大肠癌生物学特性的关系注：△与高分化癌组比较P<005;▲与浸润肌层组比较P<005

　　3 讨论

　　Survivin是近几年来新发现的凋亡抑制蛋白家族成员[3]，其基因位于17号染色体(17q25)，它含有4个外显子和3个内含子;其编码蛋白质─Survivin由142个氨基酸组成，分子量162KD。目前认为Survivin是最强的凋亡抑制因子，其作用机制是由于Survivin分子中含有一个凋亡抑制蛋白重复序列，其中含有三个氨基酸残基(Pro、Trp和Cys)，这些残基能够与半胱氨酸蛋白酶(Caspase 3及Caspase 7)结合，从而抑制Caspase活性。由于Caspase 3及Caspase 7被激活是凋亡过程的重要环节，当Caspase活性被Survivin抑制时，则凋亡过程被抑制，导致细胞永生。因此Survivin又被称为“生存蛋白”或“生存素”。Survivin也可以抑制由于肿瘤坏死因子(TNF)、Fas基因、维生素K3(VK3)和部分抗癌药物引起的细胞凋亡[4，5]。Survivin也是一个细胞周期调节基因，它的表达只存在于G2/M期，细胞有丝分裂时Survivin与纺锤体微管特异性结合，从而稳定微管维持细胞有丝分裂的正常进行[6]。有报告表明在肺癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、淋巴瘤和神经细胞瘤中Survivin均有过表达现象，同时表明，Survivin高表达者凋亡指数下降，而且阳性表达与临床分级、分期呈正相关，有人发现阳性患者5年生存率明显低于阴性患者[7]。因此认为Survivin与肿瘤发生进、展及提示预后有重要意义。本研究发现Survivin在大肠癌中阳性表达率明显高于乳腺癌(P<005)，说明Survivin虽然广泛存在于肿瘤组织中，但是由于不同来源的肿瘤，Survivin基因表达活性也有区别。由于Survivin在分化差、浸润深及有淋巴结转移的病例中阳性率增高，从而提示Survivin高表达者可以作为诊断和预后不良的指标之一。生存素在正常人组织细胞中不表达，而在肿瘤细胞内广泛高表达的特点，使之成为抗癌靶向治疗的焦点[8]。目前以Survivin为靶点的抗癌措施受到人们关注，其中有以下策略可以参考[9]：①人工合成的生存素反义寡核苷酸(代号4003)可以抑制肺癌细胞株(A549)中生存素mRNA的表达，并且提高了A549细胞对依托泊甙的敏感性[9];②用Survivin基因突变体(T34A)体外传染乳腺癌、肺癌、大肠癌和宫颈癌，可以导致细胞凋亡;③采用抑制生存素磷酸化激酶(cdc2)的方法，间接削弱生存素的抑制细胞凋亡功能，达到抗肿瘤目的;④使用长春新碱或长春花碱破坏微管，间接干扰生存素功能降低细胞存活率。总之，临床病理对Survivin检测和研究，不仅可以帮助癌症诊断和提示预后，同时也可以帮助选择Survivin为靶点的抗癌措施，将为提高肿瘤治疗效果开辟新途径。

　　【参考文献】

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　　3 薛军，林茂芳. 凋亡蛋白抑制因子家族成员(IAPS)之一Survivin 的研究进展[J].国外医学内科学分册,2003,30(1):2830

　　4 Ambrosini G, Adida C, Altier DC, et al. A novel antiapoptosis gene, survivin,expressed in cancer and lymphoma [J]. Nat med,1997,3(8):917921

　　5 Suzuki A,Ito T,Kawano H,et al. Survivin initiates ptrocapase 3/p21 complex formation as a result of interaction with CDK4 to resist Fasmediated cell death [J].oncogene, 2000,10(10):13461353

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　　8 刘丰，罗小东，傅仲学.靶向抑制Survivin对结肠癌细胞凋亡及增殖效应的影响[J].实用肿瘤杂志，2006,21(4):336337

　　9 燕善军，张成斌，陶仪生,等.生存素的表达与胃癌细胞凋亡和生物学行为的关系[J].胃肠病学，2006,11(7):415419