癌症患者外周血单个核细胞端粒酶逆转录酶的基因表达及其临床意义
发表时间：2010-07-28 浏览次数：422次
作者：门琼，吴瑾瑜，姚永华，施媛，王玫 作者单位：200438 上海市市东医院肿瘤内科
【关键词】 癌症;外周血单个核细胞;人类端粒酶逆转录酶;实时荧光定量PCR
0 引言
端粒酶逆转移酶(hTERT)是端粒酶活性的限制性组分，它能以自身RNA部分为模板，把端粒DNA的重复序列加到染色体末端，从而维持端粒长度和染色体功能的稳定。hTERT的高表达已成为癌症发生发展的一个关键因素。本研究采用实时荧光定量PCR(RQPCR)方法对57例癌症患者及21例正常人进行hTERT的定量检测，旨在探讨癌症患者与正常人之间和不同癌症之间外周血单个核细胞hTERT基因表达的差异及其临床意义。
1 临床资料
1.1 资料
收集上海市东医院肿瘤血液科2004年4～7月的初次确诊癌症患者57例(包括胃癌23例、肺癌18例及结直肠癌16例)，其中男30例，女27例，年龄39～83(平均63.74岁);正常对照21名，均为健康体检者，其中男13名，女8名，年龄45～77(平均58.34岁)，经检查均排除各种恶性肿瘤。
1.2 标本采集
空腹，采静脉血抗凝，PBS液稀释混匀，淋巴细胞分离液中离心15min，吸取单个核细胞层，80℃保存待测。
1.3 RNA抽提及cDNA合成
解冻至常温，采用Trizol试剂抽提总RNA，沉淀溶解于DEPCH2O中。取2μg RNA，采用cDNA合成试剂盒合成cDNA, 反应体积为20μl。取2μl待测样品cDNA，放入RTPCR试剂盒样品管内，在LightCycler系统上直接得到目标基因hTERT和GAPDH表达的拷贝数。
1.4 基因表达值的计算及其结果判定
每份样本均同时检测目标基因hTERT和内参照基因GAPDH的拷贝值，然后计算hTERT的相对值NhTERT(NhTERT=100×hTERT拷贝数/GAPDH拷贝数)，再进行各组间的比较。
1.5 统计分析
采用SSPS11.5统计软件，两样本间的比较用t检验，多个样本间两两比较用q检验。
2 结果
2.1 癌症患者和正常人hTERT基因表达的比较
癌症组hTERT基因表达86.40±17.01高于正常组0.73±0.83，差异有统计学意义(P<0.01)。
2.2 胃癌、肺癌及直肠癌患者之间hTERT基因表达的比较
胃癌90.91±17.12、肺癌76.26±14.78和结直肠癌85.92±16.92之间hTERT基因表达的差异均无统计学意义。
3 讨论
2000年，deKok等[1]采用RQPCR方法研究发现正常组织hTERT基因不表达或低表达，而大多数癌症细胞hTERT基因表达均显著增高。之后，更深入的研究发现外周血单个核细胞hTERTmRNA检测可用于多种癌症的辅助诊断。本研究发现胃癌、肺癌及结直肠癌患者外周血单个核细胞hTERT基因表达虽个体差异比较大，但总体较正常组显著升高，与文献报道一致。同时还发现胃癌、肺癌及结直肠癌患者之间外周血单个核细胞hTERT基因表达并无显著性差异，说明该基因检测并不能作为某种类型癌症的特异性诊断指标。
RQPCR具有数据定量、敏感性高、特异性好等优点，以往对癌细胞hTERT基因的检测，多以癌症组织作为标本，取样与制备较为不便，我们研究表明用实时荧光定量PCR检测癌症患者外周血单个核细胞hTERT基因表达是一种便捷、灵敏的检测方法，可作为癌症早期诊断的有效手段。
【参考文献】
[1]deKok JB, Ruers TJ, vanMuijen GN, et al. Realtime quantification of human telomerase reverse transcriptase mRNA in tumors and healthy tissues[J].Clin Chem, 2000,46(3),313318.
