乳腺癌组织中耐药基因蛋白表达的相关研究

　　作者：蔡红光 包磊 杨惠英 作者单位：312000 浙江省绍兴市妇幼保健院病理科

　　【摘要】 目的 探讨多药耐药基因P-gp、LRP、TOPOⅡ在化疗前乳腺癌组织的表达及其与ER、PR、CerbB-2及淋巴结转移之间的相关性。方法 采用免疫组化SP法检测76例乳腺癌组织中ER、PR、CerbB-2、P-gp、LRP、TOPOⅡ的表达水平。 结果 P-gp、LRP、TOPOⅡ在化疗前乳腺癌中的表达率分别为28.9%(22/76)、84.2%(64/76)和80.3%(61/76)。LRP、TOPOⅡ与CerbB-2之间存在正相关关系，LRP、TOPOⅡ与ER、PR之间无相关，P-gp与ER、PR及CerbB-2之间均无相关性。有无淋巴结转移对耐药相关基因LRP、P-gp、TOPOⅡ的表达无显著性影响。 结论 P-gp、LRP、TOPOⅡ与乳腺癌原发MDR的发生有相当关系，CerbB-2基因可能也参与了MDR基因的调节机制。

　　【关键词】 乳腺癌 多药耐药 免疫组织化学

　　【Abstract】 Objective To investigate the expression of multidrug resistance genes P-gp, LRP,TOPOⅡin breast cancer before chemotherapy, and evaluate their relations with ER, PR, CerbB-2 and lymphatic metastasis. Methods Immunohistochemical staining (S-P method ) was used to detect the expression of ER, PR, CerbB-2, P-gp, LRP,TOPOⅡ in 76 cases of breast cancer. Results The expression rate of P-gp, LRP,TOPOⅡin breast cancer before chemotherapy was 28.9%(22/76), 84.2%(64/76), 80.3%(61/76) respectively, The expression of LRP, TOPOⅡ and CerbB-2 show positive correlation, The expression of LRP,TOPOⅡ show no correlation with the expression of ER and PR, and the expression of P-gp also show no correlation with the expression of ER , PR and CerbB-2.Lymphatic metastasis or not show no significant effect on the expression of LRP, TOPOⅡand P-gp. Conclusion Genes P-gp, LRP,TOPOⅡ may be involved in the primary MDR of breast cancer and gene CerbB-2 may correlate with the regulatory machanism of MDR genes.

　　【Key Words】 breast cancer multidrug resistance immunohistochemistry

　　乳腺癌是女性易患的恶性肿瘤之一，并且其发病率呈逐年上升趋势，严重危害广大妇女的健康。化疗和内分泌治疗是临床上常用的治疗手段，但多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致乳腺癌化疗及内分泌治疗失败的重要原因。目前发现了一些与化疗及内分泌治疗耐药相关的基因。作者应用免疫组织化学方法检测P糖蛋白(P-gp)、DNA拓扑异构酶II ( topoisomerase II ,Topo II )、肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP )在化疗前乳腺癌组织中的表达，并探讨其相互之间及其与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、癌基因CerbB-2以及有无淋巴结转移之间的相关性，为判断预后及临床治疗提供依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 一般资料

　　收集本院2003 至2005年的乳腺癌手术标本共83例，术前均未经过化疗及放疗。均为女性;年龄28～69岁。其中浸润性导管癌74例，浸润性小叶癌2例，导管内癌4例，粘液腺癌2例，小管癌1例。考虑到其中导管内癌、小管癌和粘液腺癌恶性度较低，相对预后较好，为更好地观察研究结果，故将其从研究组中剔除，实际例数是76例，其中伴有淋巴结转移35例，无淋巴结转移41例。

　　1.2 检测方法

　　选用P-gp、LRP、TOPOⅡ、ER、PR、CerbB-2共6项指标，采用免疫组化SP 法检测癌组织中的表达。所有单抗及SP试剂盒均购自福州迈新公司，操作步骤按试剂盒说明书进行，DAB显色，苏木素复染。

　　1.3 结果判断

　　阳性结果为癌细胞中出现棕黄色颗粒。LRP阳性颗粒位于胞浆中，P-gp阳性颗粒位于胞膜及胞浆中，TOPOⅡ阳性颗粒定位于细胞核中。阳性细胞<10%为阴性，10%～25%为+，25%～75%为，>75%为。+为低表达，～为高表达。

　　1.4 统计学处理

　　运用SPSS统计软件，对有、无淋巴结转移两组进行卡方检验，并对上述指标进行等级相关分析。

　　2 结果

　　2.1 乳腺癌组织中各项指标的表达情况见表1。对3种耐药相关基因的表达与ER、PR、C-erbB-2之间进行相关分析，结果显示：LRP、TOPOⅡ与CerbB-2之间存在正相关关系(P<0.01); LRP、TOPOⅡ与ER、PR之间无相关关系，P-gp与ER、PR及CerbB-2之间均无相关性。

　　表1 乳腺癌组织中P-gp、LRP、TOPOⅡ、ER、PR、CerbB-2的表达情况 (略)

　　2.2 乳腺癌组织中各项指标的表达与淋巴结转移的关系见表2。结果显示：有无淋巴结转移对耐药相关基因LRP、P-gp、TOPOⅡ的表达无显著性影响，两组比较无统计学意义。表2 两组乳腺癌组织中P-gp、LRP、TOPOⅡ的表达情况(略)

　　3 讨论

　　P-gp是多药耐药基因产物，为多药耐药细胞膜上一种分子量为170 ku的跨膜糖蛋白，作为“药泵”功能引起癌细胞产生耐药而参与多种肿瘤的多药耐药机制[1，2]。Burger等[3]认为P-gp的高表达是乳腺癌的不良预后指标。目前倾向认为P-gp表达是不依赖于肿瘤细胞增殖的独立指标。P-gp表达与化疗敏感性有密切关系。Verrelle等[4]检测原发性乳腺癌化疗前P-gp水平，并随访其化疗疗效，发现两者明显负相关。本研究发现，P-gp在化疗前乳腺癌组织中有一定的表达，说明其在乳腺癌的原发耐药中亦有重要作用。

　　LRP肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)基因是1995年由Scheffer等克隆得到，它定位于染色体16p11.2 ，编码的蛋白质LRP由896个氨基酸组成，相对分子质量约为1.1×105。LRP主要介导顺铂和烷化剂等药物耐药，可表达于许多肿瘤组织中，其表达程度的强弱反映不同癌组织的化疗敏感性[5]。本研究发现LRP在乳腺癌组织中有较高的表达率(84.2%)，是3种耐药相关基因中表达率最高的，其升高可能是乳腺癌原发多药耐药的主要机制。有文献报道[6]单一LRP基因的导入并不产生多药耐药基因表型，LRP完成耐药机制可能与其他成分有关。

　　TopoⅡ在DNA复制、转录和染色体分离中起着重要作用。与Topo II有关的化疗药物有表鬼臼毒素、葱环类、葱醌类。目前研究主要集中于TopoⅡα与MDR的关系。Jarvinen等[7]观察到TopoⅡα的表达与处于S期的肿瘤细胞数、DNA非整倍体及CerbB-2的水平呈显著正相关，提示TopoⅡα可能与肿瘤的增殖能力及远处转移有一定关系。Sandri等[8]发现TopoⅡα在乳腺癌中的表达具有预后意义，但与肿块大小、淋巴结转移、雌孕激素受体等无明显相关，与肿瘤细胞增殖状况呈正相关，即SPF值(S-phase fraction，代表DNA合成活跃的肿瘤细胞百分比)越大，TopoⅡα总体表达水平越高。本组76例乳腺癌中61例表达TopoⅡα，提示其余15例乳腺癌的MDR可能与TopoⅡα的不表达有关。

　　本研究观察到在乳腺癌中P-gp、LRP及TopoⅡα均有一定的表达，尤其LRP和TopoⅡα具有较高的表达，说明三者均与乳腺癌原发MDR的发生有相当的关系。同时也观察到乳腺癌LRP、TopoⅡα与CerbB-2的表达显著正相关，提示CerbB-2基因可能参与MDR基因的调节机制。

　　【参考文献】

　　1 Bodey B, Bodey B J R, Groger A M, et al. Immunocytochemical detection of the P170 multidrugresistance (MDR) and the P53 tumor suppressor gene protein in humen breast cancercell: clinical and the therapeuticalsignificance.Anticancer Res, 1997, 17(2B):1311.

　　2 夏奇,裘雅芬.LRP和P-gp在卵巢上皮性癌组织中的表达及与化疗耐药关系的探讨.浙江临床医学，2003, 5 (7 ):501.

　　3 Burger H, Foekens JA, Look MP, et al. RNA expression of breast cancer resistance protein, lung resistance-related protein, multidrugresistance-associated proteins 1 and 2, and multidrug resistance gene 1 in breast cancer: correlation with chemotherapeutic response.Clin Cancer Res,2003,9:827.

　　4 Verrelle P,Meissonnier F,Fonck Y,et al. Clinical relevance of immunohis tochemical detection of multidru gresistance P-glycoprotein in breastcarcinoma. JNatl Cancer Inst ,1991，83: 111.

　　5 董岩，赵晓红，纪萍.P53和LRP蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义.青岛大学医学院学报，2003, 39 (4): 457.

　　6 李小曼,王恩华.肺耐药相关蛋白及其介导的多药耐药研究进展.解剖科学进展，2002, 8 (4): 358.

　　7 Jarvinen TA, Kononen J, Pelto-Huikko M, et al. Expression of Topoisomerase Ⅱ alpha is associated with rapid cell proliferation, aneuploidy, and CerbB2 overexpression in breast cancer. Am J Patho，1996，148:2073.

　　8 Sandri MI,Hochhauser D,Ayton P,et al.Differential expression of the Topoisomerase Ⅱ alpha and beta genes in human breast cancers. Br J Cancer,1996,73:1518.