乳腺癌C-erbB-2基因蛋白表达与CAF化疗方案的敏感性
发表时间：2010-07-23 浏览次数：438次
作者：李海峰 常宝 吴丽敏 蒋亚楠 乔振江 薄爱华 作者单位：河北北方学院实验中心，河北 张家口 075029
【摘要】 目的 探讨CAF方案(环磷酰胺+阿霉素+5-FU)与乳癌C-erbB-2基因蛋白表达的相关性。方法 采用SP免疫组织化学染色和乳癌原代细胞培养(MTT法)药敏实验检测90例乳腺癌标本。结果 表明对CAF方案敏感病例(抑制率>30%)占44.4%(40/90);C-erbB-2阴性患者对CAF方案敏感率高于阳性病例(P<0.05)。结论 检测乳癌中C-erbB-2对化疗方案选择有指导作用。
【关键词】 乳腺癌;基因蛋白;药物敏感性;免疫组织化学
基金项目：河北省科技厅攻关项目(No.03276117)
乳腺癌术后化疗治疗是综合性治疗乳腺癌的重要措施，CAF化疗方案(环磷酰胺+阿霉素+5-FU)又是临床最常用的化疗方案，该方案与乳癌组织中C-erbB-2基因蛋白表达的相关性，目前尚未见报道。我们利用原代癌细胞培养技术(MTT法)检测CAF方案对乳癌细胞的抑制率，同时利用SP免疫组化技术检测乳癌中C-erbB-2阳性率，旨在探讨C-erbB-2阴、阳性患者对CAF方案的敏感性，进而阐明C-erbB-2基因表达与化疗方案选择的相关性。
1 材料与方法
1.1 临床资料 于2004年1月至2006年5月收集我市第一附属医院和第五人民医院乳腺癌标本90例，均为女性，年龄27～72(平均48.8)岁，中位年龄48岁。
1.2 原代癌细胞培养药敏实验(MTT法) 常规原代细胞培养技术，按成人临床用药量计算培养液中CAF药量，96孔板培养72 h，加MTT，4 h后常规酶标仪检测药物对癌细胞抑制率。
r(抑制率)=对照孔吸光度-实验孔吸光度 对照孔吸光度×100%，r≥30%为敏感病例;r<30%为不敏感病例。
1.3 免疫组织化学方法检测C-erbB-2 新鲜乳癌组织固定于10%中性甲醛液内24 h;常规石蜡包埋，切片厚度5 μm，37℃储存待染。兔抗人C-erbB-2抗血清和SP免疫组化试剂盒及DAB显色剂，购自北京中杉金桥公司。操作按试剂盒规程进行。DAB显色，阳性对照为已知肠癌阳性切片，阴性对照用 PBS替代第一抗体。
1.4 统计学处理 组间比较采用χ2检验。
2 结果
2.1 C-erbB-2阳性率 90例乳癌病例中C-erbB-2阳性患者59例，阳性率为65.56%(59/90);对CAF方案敏感病例(r>30%)40例，敏感率为44.44%(40/90)。
2.2 C-erbB-2在乳癌中表达与癌组织病理特征的关系 由表1中可见浸润性乳腺癌和有淋巴结转移的乳腺癌C-erbB-2阳性率高于非浸润或未转移组(P<0.05)。因此提示C-erbB-2阳性患者预后不良。
表1 C-erbB-2表达与乳癌类型和转移相关性(略)
与非浸润乳腺癌组比较：1)P<0.05;与未转移组比较：2)P<0.05
2.3 C-erbB-2阴性病例对CAF方案的敏感性 在90例乳腺癌中C-erbB-2阳性者59例，其中对CAF方案敏感者(即r>30%)占35.59%(21/59);不敏感者64.41%(38/59)。表明阳性患者对CAF方案不敏感者多于敏感者(P<0.05);而C-erbB-2阴性患者31例对CAF敏感者占61.29%(19/31)，不敏感者(r<30%)为38.71%(12/31)(P<0.05)。
3 讨论
C-erbB-2基因(又称neu)是一种癌基因，在多种上皮性肿瘤内有较高表达，其中在乳癌内的表达率各项报告差距较大〔1，2〕。然而大家一致认为C-erbB-2在有淋巴结转移组表达率高于无转移组，本实验同时发现在乳癌有腋淋巴结转移组阳性率(76.47%)明显高于无淋巴结转移组(51.28%)，说明C-erbB-2高表达与乳癌细胞的侵袭力强，预后差有关系〔3，4〕。
C-erbB-2是一种具有酪氨酸激酶活性的基因蛋白，与表皮生长因子(EGFR)有着类似的结构与功能。当细胞受到不良刺激导致C-erbB-2基因激活，C-erbB-2编码蛋白增多及活性增强，导致①细胞凋亡被抑制;②酪氨酸激酶自磷酸化，信息通道打开激活细胞内多种基因，细胞增殖加快;③C-erbB-2通过对Bcl-2α、β整合蛋白和黏附分子的相互作用，破坏了机体反侵袭屏障，导致癌细胞转移力增强;④C-erbB-2对血管内皮生长因子有上调作用，从而促进瘤组织内血管增生，加快肿瘤生长速度。本文结果提示C-erbB-2阳性患者，可能癌细胞增生更活跃、侵袭力更强、恶性度更高。
CAF方案是目前张家口地区临床治疗乳癌的常用方案,其中环磷酰胺为烷化剂抗癌药物，使细胞内蛋白质核酸、巯基、嘌呤基、羟基等烷基化改变其结构与功能,导致细胞分裂抑制或凋亡〔5，6〕。阿酶素为抗生素类抗癌药，能插入DNA链与之形成复合物，抑制DNA及RNA复制，从而达到抗癌作用。5-FU为抗代谢药物是嘧啶类拮抗剂，间接干扰DNA及RNA合成，阻断细胞有丝分裂〔7〕。CAF方案从多方面抑制细胞有丝分裂，有较好的抗肿瘤作用，但是CAF方案的针对性不强，它不仅仅对癌细胞发生抑制作用，同时对骨髓细胞增殖也有抑制作用。因此本实验提示阴性患者使用CAF方案效果较好，同时与临床所见C-erbB-2阳性者预后差，并对常用化疗方案敏感性差是相符合的，所以C-erbB-2是提示预后较差的指标之一。
总之，C-erbB-2阴性者对CAF方案较敏感，同时预后优于阳性患者。因此，本实验提示临床病理检测C-erbB-2表达状况，将对乳腺癌预后及治疗方案选择有指导意义。
【参考文献】
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