洛铂术前化疗后乳腺癌组织中Syk表达及其分子机制的研究

　　作者：史健 王桂英 单保恩 王小玲 刘江 鲁壮平 石军梅 刘志敏 作者单位：河北医科大学第四医院肿瘤内科，河北 石家庄 050011

　　【摘要】 目的 探讨乳腺癌洛铂术前化疗后组织病理改变及其Syk表达变化的分子机制。方法 60例乳腺癌患者随机分组为实验组(术前24 h应用洛铂化疗和洛铂药物作用24 h的人乳腺癌细胞株)、对照组(未行化疗或未用洛铂药物作用的人乳腺癌细胞株)。两组均应用H-E法、免疫组织化学染色法、荧光PCR法分别检测两组人乳腺癌细胞株、乳腺癌组织中Syk、c-myc、P53 、PCNA等分子生物学指标变化。 结果 洛铂药物作用24 h后，人乳腺细胞株中Syk及其蛋白表达均为阳性，SykmRNA表达值均增高，MCF-7中Syk mRNA由1.41×104升高到3.13×104;MDA-MB-231洛铂作用后则由阴性转为阳性表达，SykmRNA由0升高到1.11×104;实验组SYK蛋白染色较对照组乳腺癌组织中明显增强，染色深，颗粒粗。Syk阳性表达率显示，实验组86.7%(26/30)明显高于对照组的63.3%(19/30)。SykmRNA均值实验组〔(26.39±0.017)×104〕明显高于对照组〔(6.17±0.065)×104〕(P<0.001)。实验组乳腺癌患者肿瘤细胞坏死明显，细胞空泡变性增多，核固缩、凝固性坏死显著，肿瘤组织及其周围组织中可见大量淋巴细胞和嗜酸性细胞浸润。实验组乳腺癌组织中Syk、IL-2Rβ、CD4β、c-myc均表达增强，其阳性表达率分别为86.7% 、100%、60%、70%;Syk、c-myc较对照组的阳性表达率增高有显著差异(P<0.05)。结论 洛铂术前化疗可提高乳腺癌组织Syk表达， IL-2 Rβ及其CD4 β是与Syk PTK相关联所必需的，也是IL-2诱导激活的Syk PTK、c-myc及其细胞信号转导增殖所必需的区域。同时IL-2诱导的Syk PTK激活可能导致c-myc基因的表达。

　　【关键词】 乳腺癌;洛铂;术前化疗; Syk

　　基金项目：河北省科技厅科技攻关项目(05276101D-59)

　　The study of Syk expression and its molecule mechanism in human breast cancer of primary chemotherapy by lobaplatin

　　SHI Jian, WANG Gui-Ying, SHAN Bao-En, et al.

　　Tumor Medical Department, Fourth Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050011, Hebei, China

　　【Abstract】 Objective To explore the molecular mechanism of the change in histological pathology and spleen tyrosine kinase (Syk) expression in neoadjuvant chemotherapy with lobaplatin. Methods 60 breast cancer patients were randomly divided into experimetnal group (chemotherapy with lobaplatin 24 h before operation and human breast cancer cell strain treated by lobaplatin for 24 h) and control group (without the above treatment). H-E methods, immunohistochemical method and real-time PCR were performed to evaluate the effect of neoadjuvant chemotherapy and the expressions of Syk, c-myc, p53 and PCNA in breast cancer respectively. Results After treated with lobaplatin for 24 h, Syk and its protein expressed positively in MCF-7 and MDA-MB-231. MCF-7：1.41×104 up to 3.13×104，MDA-MB-231：0 up to 1.11×104. Experiemntal group showed obvious and deepened Syk protein staining, and gross granules comparing to control group. The rate of expression of Syk protein in breast cancer tissue of experiment group (87.6%) was more higher than that of control group (63.3%). The means of value of Syk mRNA in experiment group (26.39±0.017)×104 was more higher than that of (6.17±0.065)×104 in control group (P<0.001). Experimental group showed obviously necrotic tumor cells, increased vacuolar degeneration cells, significant karyopyknosis and coagulation necrosis, a great deal of lymphocyte and eosinophils infiltration in experimental group. The rate of Syk, IL-2Rβ, CD4β, c-myc protein in breast carcinoma was 86.7%, 100%, 60%, 70% repectively. The expressions of Syk and c-myc protein in breast cancer tissue of two groups were significantly different (P<0.05). Conclusions The rate and expression of Syk protein by primary chemotherapy with lobaplatin could be strengthened in breast cancer, which is necessary in the relation to Syk PTK and Syk PTK, c-myc and its cell signaling proliferation induced by IL-2. The activation of Syk PTK induced by IL-2 maybe result in the induced expression of c-myc gene.

　　【Key words】 Breast cancer; Primary chemotherapy; Lobaplatin; Spleen tyrosine kinase (Syk)

　　随着术前化疗后肿瘤细胞的病理、细胞增殖动力学和分子生物学改变研究的逐渐深入，术前化疗已成为目前肿瘤治疗的新动态。国内尚无大规模的临床病例观察和循证医学的证据，国际上也未有规范、正规的术前化疗的方案。以顺铂为主的联合化疗作为第一线方案可以获得40%～50%缓解率〔1〕，但是顺铂的肾毒性、胃肠道反应等毒性使其剂量强度受到一定的限制。洛铂是新一代铂剂，具有良好的抗肿瘤作用。本文应用HE方法观察术前化疗后乳腺癌组织的病理变化及其应用免疫组织化学法、荧光PCR方法，分别检测洛铂药物干预前后的乳腺癌细胞株、乳腺癌术前化疗后肿瘤标本中Syk、p53、PCNA、c-myc、IL-2Rβ等指标的改变，并探讨其之间关系的分子机制，为评价术前洛铂化疗疗效及其抗肿瘤作用的分子机制研究提供理论依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 细胞株及其培养 人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231，由本室保存。MCF-7、MDA-MB-231。应用含10%小牛血清20 mmol/L Hepes和50 g/ml庆大霉素的DMEM培养基，于37℃，5%CO2环境下培养。每天在倒置显微镜下观察细胞生长情况，每3 d传代1次。收集呈对数生长期的细胞，经台盼蓝染色检测活细胞百分率为95%以上，调整细胞浓度为1×106/ml备用。加入注射用洛铂，药物浓度为5×105mmol/L，作用细胞株24 h待检测。

　　1.2 方法

　　1.2.1 试剂和药品 抗Syk抗体由我院科研中心提纯〔2〕;免疫组化显色试剂盒购自北京中山生物工程公司;Trizol购自拜昂生物技术有限公司;p53单抗(Ab-2)购自美国Oncor Science公司;IL-2Rβ、CD4β、c-myc单抗购自晶美生物公司。注射用洛铂海南长安药业有限公司生产，规格50 mg/支，批号:20050621。注射用洛铂标准品购自海南长安药业有限公司。PE7000自动荧光PCR仪购自美国Perkin Elmer公司。

　　1.2.2 人新鲜组织标本 选取经病理确诊为乳腺癌的手术根治标本60例，随机分为对照组、实验组。对照组：空白人乳腺癌细胞株、术前均未化疗、放疗和内分泌治疗的乳腺癌手术患者30例。实验组：药物作用24h人乳腺癌细胞株及其术前应用注射用洛铂化疗的30例乳腺癌患者。年龄35～75岁，中位年龄48岁，均为女性。浸润性导管癌18例，浸润性小叶癌13例。伴腋窝淋巴结转移者13例，不伴腋窝淋巴结转移者17例。标本直接取自无菌、离体15 min的乳腺癌组织及距肿瘤>5 cm正常乳腺组织各0.1 g，每份标本均取2份，1份取材后立即置液氮速冻后，-80℃冰箱保存备用。另一份标本经4%甲醛固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片。

　　1.2.3 细胞生长曲线 将MCF-7和MDA-MB-231各自用0.05%胰酶和0.02% EDTA混合液消化后，用显微镜计数板、台盼蓝染色活细胞计数法，制成1×104细胞悬液，接种于24孔培养板，每天消化后计数，共9 d，每组设3孔，将实验结果制成细胞生长曲线。

　　1.2.4 注射用洛铂抗人乳腺癌细胞株作用的有效药物浓度 取新鲜手术标本，无菌操作D-Hankps 液冲洗，剔除血污、坏死组织及结缔组织，置含1 000 U/ml双抗、5%小牛血清RPMI 1640中，分离、剪碎，加入0.25% 胰蛋白酶消化15min，300 目钢筛过滤，细胞悬液离心(1 000 r/min，10 min)，弃上清。加D-Hankps液洗2 次，离心(1 000 r/min,，10 min)，加入适量含20%小牛血清RPMI1 640培养液，台盼蓝染色活细胞计数，细胞存活率达90%以上，调整细胞浓度至2×105/ml。将单细胞悬液，接种于96孔板180 μl/孔，加入洛铂药液20 μl/孔，终浓度为20 μg/ml;对照组加等量生理盐水，空白对照为完全培养液，每组设3孔，细胞置37℃、5% CO2培养24 h后，加入MTT (5 mg/ml)20 μl/孔，继续培养4 h后，离心、弃上清，加入DMSO 100 μl/孔，混匀后在酶标仪上测定光吸收值(OD值) (C=570 mm)，计算抑制率。抑制率= (对照组OD值-实验组OD值)/对照组OD值×100%。

　　1.2.5 Syk的表达 细胞爬片的制备：将密度为1×105/ml的细胞悬液，接种于预先置有盖玻片的6孔培养板内，24 h后吸去培养液，用PBS液洗3次，加入2 ml丙酮固定4 min，取出盖玻片，晾干，黏于载玻片上。组织标本的处理：取瘤体和正常乳腺组织标本(经10%福尔马林溶液固定)进行常规病理切片，切片常规脱蜡至水。步骤：用PBS冲洗5 min×3次，用0.3%过氧化氢甲醇溶液室温下作用10 min，蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min。每张切片加5 μl 10%山羊血清封闭10 min，倾去血清，滴加50 μl(1:300稀释)兔抗Syk抗体(我室制备)，反应60 min，用PBS冲洗5 min×3次。滴加50 μl生物素标记二抗溶液(中杉生物有限公司的通用型二抗)，孵育20 min，用PBS冲洗5 min×3次。滴加50 l辣根过氧化物酶标记抗链霉卵白素抗体，室温下孵育30 min，用PBS冲洗5 min×3次。每张切片滴加100 μl新鲜配置的DAB溶液显色，镜下观察显色反应。显色适度时终止反应(一般15～30 min)。流水冲洗后，蒸馏水洗一次。苏木素淡染5～10 min后，常规脱水、透明、封片。以上实验均用PBS代替一抗作为阴性。

　　综合分析整张切片的阳性细胞所占比例及染色强度,光镜下观察结果并拍摄图像。阳性标准为：Syk为胞浆着色，细胞出浆内现棕黄色颗粒为阳性细胞。阳性细胞数≤25%视为阴性，25%～50%为“+”，51%～75%为“”，76%～100%为“”。

　　1.2.6 SykmRNA检测 采用Primer express 2.0软件，根据GenBank中syk的基因序列设计引物和探针。sykmRNA序列如下：F:5′-GCAGGCAATGACGAGAACTACTC-3′，R:5′-CTGGCCACCTGGTTCTTCA-3′，Probe:5′-FAM-CTGAGCTGCGCAATGCCTCGG-TAMRA-3′。取正常乳腺组织及癌组织各约0.5 g，应用Trizol提取组织的总RNA。将提取的RNA样本进行逆转录反应，逆转录成cDNA。反应体系：5×逆转录buffer4 μl，上下游引物各0.4 μl，dNTPs0.2 μl，逆转录酶1 μl，DEPC水9 μl，RNA模板 5 μl，总体积共20 μl。反应条件：37℃ 1 h，然后95℃ 3 min。阳性模板标准梯度的制备：阳性模板浓度为1010，反应前按10倍比稀释后浓度分别为109、108、107、106、105。反应体系如下：5×定量PCR buffer 10 μl，阳性模板上下游引物各0.5 μl，dNTP 0.5 μl，阳性模板荧光探针0.5 μl，Taq 酶2 μl，阳性模板DNA 5 μl，ddH2O 31 μl，总体积50 μl。取5 μl逆转录产物作为模板和阳性模版，按以下反应体系进行定量PCR扩增：5×定量PCR buffer 10 μl，上下游引物各0.5 μl，dNTP 0.5 μl，荧光探针 0.5 μl，Taq 酶 2 μl，cDNA模板 5 μl，ddH2O 31μl，总体积 50 μl。反应条件为：93℃ 2 min，然后93℃ 1 min，55℃ 1 min，共40个循环。扩增仪收集反应信息后，根据阳性定量标准模板的扩增情况自动绘制标准曲线。根据阳性定量模板和待测样本的扩增情况，算出反应体系中待测样本中cDNA的拷贝数。根据标准曲线得出样本荧光定量反应的绝对定量值。A (拷贝数/μg总RNA) = B(拷贝数/l cDNA)÷样本RNA的OD260值×5/6。定量的单位B=拷贝数/ lcDNA。

　　1.2.7 pP53、c-myc、IL-2 Rβ、CD4β表达的检测 一抗应用公司的p53抗体，阳性标准：p53蛋白棕色染色颗粒均定位于细胞核，MCF-7细胞分化好，生长倍增速度慢，细胞之间的黏附性好;而MDA-MB-231细胞分化差，生长倍增速度快，细胞之间黏附性差。两者p53蛋白的染色强度和表达分布均不一样，反映p53蛋白不同的性质和功能状态。c-myc阳性标准：细胞核着色，细胞核内出现棕色颗粒。阳性细胞数≤25%视为阴性，25%～50%为“+”，51%～75%为“”，76%～100%为“”。IL-2 Rβ阳性标准：细胞膜染色。CD4β阳性标准：细胞膜染色。

　　1.3 统计学分析 数据用x±s表示。两组间数据用χ2检验，多组间数据用单因素方差分析。应用SAS 6.12软件计算。

　　2 结果

　　2.1 乳腺癌细胞形态和生长特性 倒置显微镜下观察MCF-7和MDA-MB-231细胞的生长情况，两株细胞均呈贴壁依赖性生长，前者分化较好，生长倍增速度慢，细胞形态为多角形，体积较大，胞浆丰富，核大，圆形居中，细胞之间黏附性高，成膜状生长，传代时胰酶不易消化;后者分化较差，生长倍增速度快，细胞形态为圆形或长梭形，体积较小，胞浆少，核小，圆形居中，细胞之间黏附性差，传代时胰酶易消化(图1)。

　　2.2 洛铂对MCF-7和MDA-MB-231细胞Syk表达的影响 对照组人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231细胞中Syk表达强度和分布均不一致;Syk在MCF-7细胞浆中呈阳性表达，可见棕黄色颗粒;MDA-MB-231细胞Syk表达阴性。实验组经洛铂处理后，MCF-7和MDA-MB-231细胞胞浆中Syk均呈阳性表达，即可见棕黄色颗粒，且MCF-7细胞株中细胞胞浆中Syk颗粒较对照组的颗粒粗，染色深。表明注射用洛铂作用人乳腺癌细胞株，不仅可使MCF-7细胞Syk的表达增强，并可使逆转Syk在MDA-MB-231细胞的表达，注射用洛铂可增高人乳腺癌细胞株Syk的表达(图1)。同样，经洛铂处理后，MCF-7和MDA-MB-231细胞Syk mRNA表达增高，MCF-7中Syk mRNA数值由1.41×104升高到3.13×104(P<0.01);MDA-MB-231作用后则由阴性转为阳性表达，数值为0升高到1.11×104，但两种细胞间Syk比较有显著性差异(P<0.01)。

　　2.3 洛铂术前化疗后乳腺癌组织的病理学HE染色变化 实验组较对照组可见乳腺癌患者肿瘤细胞坏死明显，胞浆红染，核固缩，凝固性坏死显著，仅残留少许空泡变性的肿瘤细胞;肿瘤组织及其周围组织中可见大量淋巴细胞和嗜酸性细胞浸润，并肿瘤组织可见的退行性变，见图2。

　　对照组MCF-7细胞 对照组MD-231细胞 实验组MCF-7细胞 实验组MD-231细胞

　　图1 Syk在人乳腺癌细胞株的表达(SP法×200)(略)

　　对照组(200×) 对照组(400×) 实验组(200×) 实验组(400×)

　　图2 两组化疗后乳腺组织的病理学形态(HE染色)(略)

　　2.4 洛铂对人乳腺癌组织Syk表达的影响 对照组、实验组的正常乳腺组织中，Syk阳性表达率分别为89.2%、92.37%，两组间无显著性差异。两组癌组织中Syk阳性表达率分别为63.3%(19/30)、86.7%(26/30)，两组乳腺癌组织之间的Syk阳性表达率有显著统计学差异(P<0.01)。对照组乳腺癌组织中Syk表达水平较低，染色浅，颗粒不明显;正常乳腺组织中Syk呈强阳性表达，颗粒明显(图3);实验组乳腺癌细胞Syk的表达较对照组明显增强，染色深，颗粒粗，Syk染色接近正常胰腺组织的表达水平(图3)。SykmRNA表达比较显示，对照组、实验组两组癌组织中Syk阳性表达率分别为63.3%(19/30)、86.7%(26/30)，SykmRNA均值分别为(6.17±0.065)×104、(26.39±0.017)×104，两者之间有显著性差异(P<0.001)。

　　对照组 实验组

　　图3 人乳腺癌新鲜组织标本Syk蛋白的表达(SP法×200)(略)

　　2.5 乳腺癌组织中p53、PCNA蛋白的表达 p53蛋白阳性染色颗粒：棕色染色颗粒均定位于细胞核，实验组有13例p53蛋白表达阳性，阳性表达率为65%;对照组有12例p53蛋白表达阳性，阳性表达率为40%，两组p53蛋白的染色强度和表达分布均不一样，两组之间比较差异有显著性(P<0.01)。见图4。

　　对照组 实验组

　　图4 两组乳腺癌组织中P53蛋白表达(SP法×200)(略)

　　2.6 乳腺癌组织中蛋白的表达变化 对照组有17例PCNA蛋白表达阳性，阳性表达率为56.7%，实验组有6例PCNA蛋白表达阳性，阳性表达率为30.0 %;两组之间比较差异有显著性(P<0.01)。见图5。

　　图5 PCNA在人乳腺癌新鲜组织标本的表达(SP法)(略)

　　2.7 洛铂术前化疗对乳腺癌组织中c-myc、CD4、IL-2Rβ、表达 洛铂术前化疗后乳腺癌组织c-myc阳性表达率增高，实验组Syk阳性表达率(70%)较对照组(52.8%)有显著性差异(P<0.05)。洛铂术前化疗后乳腺癌组织CD4阳性表达率增高，实验组CD4阳性表达率(60%)较对照组(68.7%)未有显著性差异。洛铂术前化疗后乳腺癌组织IL-2Rβ阳性表达率增高，实验组CD4阳性表达率(100%)与对照组(100%)间无有显著性差异。

　　2.8 洛铂术前化疗对乳腺癌组织中Syk、c-myc、IL-2Rβ、CD4β表达间关系 洛铂术前化疗后，乳腺肿瘤组织Syk、c-myc、IL-2Rβ、CD4表达增高，Syk、c-myc的表达与对照组相比有显著的统计学差异(P<0.05);而IL-2 Rβ、CD4的表达不具有显著性统计学差异。

　　3 讨论

　　传统的乳腺癌综合治疗常采用根治术后化、放疗的方法，其结果将化疗推迟了1～4个月，致使肿瘤细胞倍增约5次，肿瘤负荷增加约2个对数值，产生突变的耐药细胞的危险性增加5%～95%，使一部分乳腺癌患者在手术后12个月到数年和转移。1982年Frei提出新辅助化疗(neoadjuvant chemotherapy)的概念，为乳腺癌综合疗法第一步治疗。采用术前化疗不但可遏制肿瘤细胞的增殖，且可防止耐药细胞的产生〔3〕。且综合20世纪90年代以来文献报道〔4～8〕，明确表明采用术前化疗可直接观察到化疗前后肿瘤的大小、病理学及生物学指标的变化，可直观地了解到化疗药物、方案对具体肿瘤是否有效。因此，我们建议肿瘤较大、腋窝淋巴结转移以及复发、转移高危险因素的的乳腺癌患者，通过术前化疗，不仅可使切除困难的局限晚期乳腺癌肿块易于手术切除，不可切除者变为可能可切除，大大提高了肿瘤的切除率和根治效果，而且全身化疗使已存在的周身亚临床转移灶得以控制，生存率明显改善。5年生存率可高达76%，达到改善患者的预后的目的。注射用洛铂是新一代的三代铂剂，其抗癌治疗指数高于顺铂和卡铂，而且对部分顺铂和卡铂耐药的肿瘤有效〔9〕。洛铂抗肿瘤活性源于与DNA以共价健结合并使之变性 (主要形成Pt-GG和Pt-AG链内交叉连接)，使DNA失去复制功能，导致细胞生长停滞及死亡。洛铂影响c-myc基因表达，c-myc基因调节肿瘤细胞生成、增殖、分化和凋亡。姜文奇等〔10〕观察单药洛铂治疗复发性或转移性乳腺癌有效率为45.2%。

　　目前国内外已有资料显示〔11，12〕，超过50%的原癌基因和癌基因产物都具有蛋白酪氨酸激酶活性，其异常表达致使细胞增殖调节发生紊乱，与肿瘤发生、侵袭、转移、肿瘤新生血管的生成和肿瘤的化疗抗性等密切相关。其中非受体型蛋白质酪氨酸激酶Syk是强有力的乳腺癌肿瘤抑制因子，其表达缺失与乳腺癌的发生、发展及转移有关在免疫细胞的激活中起着至关重要的作用，其在正常乳腺组织中高表达，肿瘤组织中低表达甚至不表达。因此，本研究以肿瘤组织中Syk、 P53、PCNA蛋白的表达改变，作为术前化疗疗效及其预后评价的指标。本研究结果显示：实验组乳腺癌组织的Syk表达的阳性率显著高于对照组;且Syk蛋白表达程度上较对照组明显增强，染色深，颗粒粗，Syk染色接近于正常乳腺组织的表达。可见，术前化疗可明显提高患者乳腺癌组织中Syk蛋白的表达。HE染色法观察两组病理变化表明，实验组乳腺癌组织肿瘤细胞坏死明显，细胞空泡变性增多，胞浆红染，核固缩、凝固性坏死显著，肿瘤组织及其周围组织中可见大量的淋巴细胞和嗜酸性细胞浸润，与肿瘤自身发展迅速导致的坏死的病理征象相鉴别，证明了洛铂术前化疗抗肿瘤作用。本研究显示：术前化疗后P53蛋白表达增高及其PCNA蛋白表达下降较对照组具有显著性差异 。这与Okamura等报道Syk基因的表达是p53蛋白依赖性的，p53蛋白的功能丧失会导致Syk的活性下降，Syk与p53呈负相关的结果一致。

　　术前洛铂化疗可提高乳腺癌患者Syk蛋白的表达的分子机制目前还不清楚。近年发现，在免疫系统之外的多种非淋巴细胞上存在IL-2R〔13～16〕，活化的IL-2R复合物中存在酪氨酸激酶活性，IL-2可快速诱导细胞内蛋白质酪氨酸磷酸化。文献报道在Syk阳性的白血病细胞株中Syk PTK的激活可导致c-myc基因诱导;其cDNA编码的嵌合体受体承担着CD4细胞外/跨膜区，是IL-2和Syk PTK相关联的起着重要的作用;Syk在IL-2 诱导的c-myc基因表达和随后的细胞增殖中起着关键的诱导作用，且IL-2Rβ的S区是细胞增殖所必需的结论相一致。但在实体瘤中作用未有报道。6%～52%的乳腺癌中可见c-myc基因扩增，其mRNA水平升高与预后不良有关。本研究表明，洛铂术前化疗后，乳腺癌组织中Syk、IL-2Rβ、CD4阳性表达均增高，IL-2Rβ、CD4的阳性表达增高不明显，但Syk、c-myc增高有显著性差异;IL-2Rβ、CD4阳性表达是Syk、c-myc激活所必需的。与文献报道的IL-2Rβ、细胞质内S区域、CD4β是与Syk PTK相关联所必需的，也是IL-2诱导激活的Syk PTK、c-myc及其细胞信号转导增殖所必需的区域;IL-2诱导的Syk PTK激活可能导致c-myc基因的诱导表达相一致。我们认为机理可能与c-myc作用存在双相影响的机制提出双信号假说有关;即细胞在c-myc基因作用下时出现增生还是发生凋亡，取决于细胞接受外来的信号。本研究应用洛铂围手术期化疗后，Syk作为第二信号表达增高，而已知syk是一种抑癌基因，因此，Syk、c-myc共同作用，发挥抑制乳腺癌作用。另外c- myc基因的诱导是有选择性的，我们不能排除其它可能PTK信号传导的使c-myc全基因诱导。目前已有最近资料报道，Jak家族中的Jak1和Jak1 PTK也可被IL-2刺激激活。

　　延长生存时间是提高治疗效果的目的之一。本研究近期疗效肯定，明显提高患者的生活质量，但由于研究的样本较小，随访时间短，观察周期长，对肿瘤复发率、无病生存率、总生存率的观察结果尚难以评价，还需要更多的临床随机对照实验和更长的随访观察时间。

　　【参考文献】

　　1 Sledge GW，Roth BJ.Cispaltin in the management of breast cancer〔J〕.Seminars Oncol，1989;53(4):110.

　　2 单保恩，董 青，王晓玲，等.兔抗Syk抗体制备和在乳腺癌诊断中的应用〔J〕.细胞与分子免疫学杂志，2003;19(5)：486-8.

　　3 Bhalla K，Harris W B.Molecular and biologic determinants of neoadjuvant chemotherapy of locoregional breast cancer〔J〕.Semin Oncol，1998;25suppl(3):19.

　　4 Fisher B，Bryant J，Wolmark N，et al.Effect of pre-operative chemotherapy on the outcome of women with operable breast cancer〔J〕.J Clin Oncol，1998;16:2672.

　　5 Mauriac L，Mac Grogan G，Avril A，et al.Neoadjuvant chemotherapy For operable breast carcinoma larger than 3 cm:A unicentre randomized trial with 124Omonth median follow-up 〔J〕.Ann Oncol,1999;10:47.

　　6 Broet P，Shcoll S M，De la Rochefordiere A，et al.Short and long term effects on survival in breast cancer patients treated by primary chemotherapy:An updated analysis of a randomized trial〔J〕.Breast Cancer Res Treat,1999;58:151.

　　7 Bonadonna G，Valagussa P，Brambilla C，et al.Primary chemotherapy in operable breast cancer:EightOyear experience at the Milan Cancer Institute 〔J〕.J Clin Oncol,1998;16:93.

　　8 Jos A.van der Hage，Cornelis J H，van de Velde，et al.Preoperative chemotherapy in primary operable breast cancer:Results from the European organization for research and treat of neoadment of cancer trial 10902〔J〕.J Clin Oncol，2001，19:4224.

　　9 Harstric A，Hapke G，Scharnofske M，et al.High activity of lobaplatin in cisplatinsensiutive and resistant humancarcinoma cell lines in vitro and in vivo〔J〕.Proc Sm Assoc Cancer Res，1993;34:403.

　　10 姜文奇，林桐榆，徐瑞华，等.乐铂单药治疗乳腺癌的II期临床研究〔J〕.实用癌症杂志,1998;13(4)：294-5.

　　11 杨光华.病理学〔M〕.第5版.北京：人民卫生出版社.107.

　　12 Stewart ZA，Pietenpol JA.Syk：a new player in the field of breast cancer〔J〕.Breast Cancer Res，2001;3：5-7.

　　13 吕宝璋，田 英.受体学概论〔M〕.北京:科学出版社，1991：213-23.

　　14 Haugen PK，Letourneau PC.Interleukin-2 enhances chick and rat sympathetic，but not sensory，neurite outgrowth〔J〕.J Neurosci Res，1990;25:443-52.

　　15 Arzt E，Stelzer G，Renner U.et al.Interleukin-2 and inter-leukin-2 receptor expression in human corticotropic adenoma and murine pituitary cell cultures〔J〕.J Clin Invest，1992;90:1944-1951.

　　16 Yasuhiro Minanel,Yoko Nakagawa,A tsuo K awahara,et al.Protein trosine Kinase syk is Associated with and Activatde by the IL-2 Receptor：Possible Link with the c-myc Induction P athway〔J〕.Immunity,1995;12:89-100.