cyclinD1、P27在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

　　作者：巩玉森，孔庆兖，柳 红 作者单位：徐州医学院病理学教研室，江苏徐州221002

　　【摘要】目的 探讨细胞周期素D1(cyclinD1)和P27在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义。方法 应用SP法对56例NSCLC进行cyclinD1和P27蛋白检测。结果 cyclinD1和P27蛋白表达与NSCLC的组织分化程度、淋巴结转移和临床分期有关，且两者在NSCLC中的表达呈负相关(P<0.05)。结论 cyclinD1的高表达和P27的低表达在NSCLC的发生发展中起重要作用，两者的联合检测有可能作为判断NSCLC恶性程度和预后的生物学指标。

　　【关键词】 非小细胞肺癌 细胞周期素D1 P27 免疫组织化学 病理学 临床

　　Expressions of cyclinD1 and P27 protein in non-small cell lung cancer and their clinical significance

　　GONG Yusen, KONG Qingyan, LIU Hong*

　　(Department of Pathology, Xuzhou Medical College, Xuzhou, Jiangsu 221002, China)

　　Abstract: Objective To investigate the expressions of cyclinD1 and P27 protein in non-small cell lung cancer (NSCLC) and their clinical significance. Methods 56 NSCLC were detected by immunohistochemical technique (streptavidin-peroxydase) for the expression of cyclinD1 and P27 protein. Results The expressions of P27 and cyclinD1 were closely related to the histodifferentiation, lymphatic metastasis and clinical stages. The expression of cyclinD1 was negatively correlated with that of P27 (P<0.05). Conclusions The high expression of P27 and low expression of cyclinD1 may play an important role in the pathogenesis and progression of NSCLC. Detection of cyclinD1 and P27 can be used as a biological marker to assess the malignancy and prognosis of NSCLC.

　　Key words: non-small cell lung cancer; cyclinD1; P27; immunohistochemistry;pathology,clinical

　　肺癌在我国的发病率和病死率日渐增高，是我国发病率最高的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌(NSCLC)在肺癌中比例较高。研究发现，肺癌的发生是一个长时间、多因素、多步骤逐步演进的复杂的生物学过程，细胞周期紊乱、细胞失控性生长是肺癌发生的主要机制之一[1]。本实验采用免疫组织化学SP法检测NSCLC中细胞周期素D1(cyclinD1)及其调节因子P27的表达,并探讨两者在NSCLC发生、发展过程中的作用及临床病理意义。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料 收集56例NSCLC患者手术切除标本存档蜡块,取自徐州医学院附属医院。均具备完整资料，其中男性42例,女性14例，年龄32～75岁，中位年龄57.1岁。根据李维华肺癌的分化表型分类方法[2]分为鳞癌16例、腺癌24例、类癌4例、肺泡细胞癌12例。TNM分期采用1997年UICC肺癌国际分期标准：Ⅰ-Ⅱ期24例，Ⅲ-Ⅳ期32例。取远离肿瘤的正常肺组织10例作为对照组。标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋切片，苏木精-伊红染色。

　　1.2 试剂及方法 鼠抗人cyclinD1单克隆抗体、鼠抗人P27单克隆抗体、链霉素抗生物素-过氧化物酶免疫组化超敏试剂盒(UltraSensitiveTMS-P Kit即用型)均购自福州迈新生物技术有限公司。按SP试剂盒说明书操作，用已知阳性片和PBS代替一抗分别作为阳性和阴性对照。

　　1.3 结果判断标准 cyclinD1和P27阳性表达产物为突出于背景的棕黄色或棕褐色细颗粒，定位于细胞核。凡阳性细胞数>5%者为阳性。

　　1.4 统计学处理 采用STATA 7.0统计软件包处理。计量资料的比较采用t检验，cyclinD1和P27阳性表达率的比较采用χ2检验或确切概率法，两者表达与NSCLC临床特征的关系用秩和检验，生存曲线采用Kaplan-Meier法,生存率的比较采用Mantel-Haenszel检验。检验水准：α=0.05。

　　2 结 果

　　cyclinD1、P27在NSCLC和正常肺组织中的表达及与临床病理参数的关系见表1。本组中cyclinD1、P27的表达强弱与NSCLC的分化程度、TNM分期及淋巴结转移明显相关(P<0.05)，与患者性别、年龄、组织学类型无明显关系。在高分化型、中晚期和伴有淋巴结转移的NSCLC中cyclinD1显著高表达，而P27蛋白表达强度降低，差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。此外，实验结果显示，cyclinD1、P27的表达无论在NSCLC组织分化程度、有无淋巴结转移还是TNM分期上，二者之间呈负相关(r=-0.214，P<0.05)。表1 NSCLC中cyclinD1和P27蛋白的表达及其与临床病理参数的关系

　　2.2 cyclinD1、P27蛋白与NSCLC患者预后的关系 Kaplan-Meier法生存曲线显示，P27阳性组患者生存率高于阴性组，cyclinD1阳性组患者生存率低于阴性组，差异有显著性(P<0.05，P<0.01)。见图1。

　　3 讨 论

　　NSCLC的发生、临床诊断、治疗和患者预后与小细胞肺癌(SCLC)差异显著，常常表现为肿瘤恶性程度高、易于早期转移、患者生存率低等特点。本实验主要从肿瘤细胞周期方面，分析NSCLC与cyclinD1、P27的关系，寻找NSCLC发生发展的分子机制，探索影响NSCLC预后的关键因素，为NSCLC的诊断、治疗及预后判断提供理论依据。

　　肺癌的发生与肿瘤细胞周期调控异常密切相关。cyclinD1定位于染色体11q13 扩增区域, 编码大约295个氨基酸序列，是与细胞周期中G1期调控有关的蛋白,被认为是癌基因[3]。在细胞由G1期向S期转化的过程中,cyclinD1可与细胞周期素激酶CDK4/CDK6结合，形成cyclin/CDK复合物，激活Rb蛋白,启动细胞S期相关基因的转录,使细胞进入自主分裂增殖程序。研究发现NSCLC中cyclinD1常常过表达，导致细胞周期启动异常,引起细胞持续性恶性增殖[4]。Wang等[5]的研究表明cyclinD1与NSCLC的转移和预后不良有关，认为cyclinD1是NSCLC发生的晚期事件，可以作为判断NSCLC的预后指标之一。本实验结果显示cyclinD1在NSCLC过表达，显著高于癌旁肺组织，而且显示cyclinD1的过表达与NSCLC的分化程度、淋巴结转移、TNM分期呈正相关，与Yoo等[6]报道相符。

　　P27蛋白是细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物(CDKI)家族成员之一,是一种新型候选抑癌基因[7]。研究发现，P27在细胞增殖过程的G1/S转换中发挥作用,它可以特异性结合cyclinD-CDK4(CDK6)、cyclinA-CDK2及cyclinE2-CDK2等在S期具有活性的细胞周期素复合物及其单体,抑制cyclin/CDK复合物的活性,阻滞Rb蛋白的磷酸化，对细胞周期进行负调节，与肿瘤的发生密切相关[8]。Lindberg等[9]的研究发现P27基因突变在肿瘤的发生过程中是稀有事件,P27与肿瘤的关系主要体现在其蛋白水平上,表现为P27蛋白的减少或缺失。P27蛋白的下降，降低了P27对正性细胞周期调控蛋白的抑制效应,导致细胞增殖过度,发生肿瘤[10]。本研究发现，P27在癌旁肺组织呈现高表达，而在56例NSCLC中阳性率仅为17.9%;进一步研究其与NSCLC各临床病理因素的关系发现，P27与NSCLC的细胞分化、恶性程度、早期转移及TNM分期有关，且呈负相关。揭示其作用机制可能为：P27低表达削弱了抑制cyclin/CDK或其单体活性的作用,诱导了肿瘤细胞周期进展，加速了肿瘤细胞由G1期向S期的转换，促进肿瘤发展。

　　此外本实验还发现，NSCLC中cyclinD1与P27蛋白的表达呈负相关(r=-0.214，P<0.05)，说明P27蛋白的表达下降与cyclinD1的过表达密切相关，在NSCLC的发生中有偶联作用，与李蓓等[11]的研究结果一致，反映了肿瘤的恶性程度较高,预后较差。同时Mantel-Haenszel检验发现cyclinD1高表达、P27低表达患者的生存率显著下降，提示联合检测cyclinD1和P27可作为判断NSCLC预后的生物学指标。

　　【参考文献】

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