PDCD5基因多态性与乳腺癌临床病理特征及预后的关系

　　作者：胡英，徐 晔，欧阳涛，李金锋，王天峰， 范照青，范 铁，林本耀，解云涛，耿排力 作者单位：青海大学医学院基础医学部

　　【摘要】 目的 探讨PDCD5基因多态性与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析方法，检测311例长期随访的原发性乳腺癌患者PDCD5基因多态性，用Pearson χ2检验分析PDCD5基因多态性与乳腺癌患者临床病理特征间的关系，并通过Kaplan-Meier曲线分析其与乳腺癌患者生存率之间的关系。结果 在311例乳腺癌病例中，PDCD5 CG/GG基因携带者的孕激素受体(progesterone receptor，PR)阴性率(50.9%)显著高于CC基因携带者的PR阴性率(38.6%)，P=0.035;PDCD5基因多态与乳腺癌患者的其他临床病理特征均无相关性(P>0.05)，也未见其与患者预后相关(P>0.05)。结论 PR阴性高表达的乳腺癌患者常提示预后不良。PDCD5基因多态与PR阴性高表达有关，提示PDCD5基因型可能与预后不良有关，但生存分析却未显现其与乳腺癌患者预后间具有相关性。本研究结果初步显示，PDCD5基因多态性检测对女性乳腺癌患者预后评价可能没有直接参考价值。 胡英(1977～)，女，土族，青海籍，讲师，青海大学医学院2005级研究生

　　【关键词】 PDCD5 乳腺癌 多态性 预后

　　THE ASSOCIATION OF PDCD5 POLYMORPHISMS

　　WITH CLINICOPATHOLOGIC CHARACTERISTICS

　　AND PROGNOSIS IN PATIENTS WITH BREAST CANCER

　　Hu Ying1, Xu Ye2, Ouyang Tao2, et al.

　　(1. Qinghai University Medical college; 2. Breast Center, Peking University Cancer Hospital )

　　Abstract Objective To investigate the contributions between PDCD5 polymorphisms and clinicopathologic characteristics, Prognosis in patients with breast cancer. Methods The polymorphisms of PDCD5 were detected by using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisms assay (PCR-RFLP) in 311 patients with breast cancer with a long-term follow-up. Pearson χ2 was applied to assess the association between the polymorphisms in PDCD5 and clinicopathologic characteristics, Survival curves were analyzed by Kaplan-Meier method (log-rank test statistics). Results In 311 patients with breast cancer, PR( progesterone receptor)-negative rate (50.9%) in Patients with PDCD5 CG/GG genotype were more than those in patients with CC genotype(38.6%), P=0.035. The polymorphism of PDCD5 were not significantly associated with other clinicopathologic characteristics (P>0.05) and survival (P>0.05). Conclusion The prognosis of the patients with PR-negative higher expression is worse than that of the patients with PR-negative lower expression. The polymorphism of PDCD5 is significantly associated with PR and may suggest a worse prognosis, but survival curves showed they were not associated with prognosis. The research implied that the polymorphism of PDCD5 has no significant value for evaluating prognosis in women with breast cancer.

　　Key Words PDCD5 Breast cancer Polymorphism Prognosis

　　程序性细胞死亡因子5 (programmed cell death 5，PDCD5)也被称为TF-1细胞凋亡相关基因19 (TF-1 cell apoptosis related gene-19，TFAR19)，是由北京大学医学部免疫学重点实验室利用cDNA代表差异分析技术(cDNA-representational difference analysis ,cDNA-RDA)从人红白血病细胞株TF-1细胞中克隆到的凋亡相关基因之一。研究表明它参与调控细胞凋亡过程[1]。近年来国内外已有PDCD5的表达失调与肿瘤密切相关的报道[2，3] ,却鲜见有关PDCD5基因多态性与乳腺癌相关关系的研究。本文对具有长期随访资料的乳腺癌样本进行回顾分析，总结判断PDCD5基因多态性与女性乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象

　　1984年9月～1996年7月，北京大学临床肿瘤学院乳腺中心收治的原发性乳腺癌患者311例，全组患者均为女性，平均年龄49.7岁(16～82岁)。依据UICC(Union International Contre le Cancer)进行TNM分期，I期45例，Ⅱ期181例，III期39例，未知分期43例。依据北京大学临床肿瘤学院病理科组织病理学检查确定淋巴结转移情况，其中淋巴结阴性乳腺癌患者146例，淋巴结阳性患者114例，未知淋巴结状况者48例。患者中位随访时间11年(0.2～16.1年)，至末次随访死于乳腺癌者94例，随访期间患者失访、死于其他原因或研究终止者均计为删失数据。本研究得到北京大学临床肿瘤学院伦理委员会审查认可。

　　1.2 DNA提取和基因型检测

　　应用酚-氯仿方法提取乳腺癌肿瘤组织基因组DNA。通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测PDCD5基因多态，根据文献[4]，从GenBank查找基因登记号为AF014955的人PDCD5基因全序列。根据此序列采用Primer 5.0、Oligo 6.0软件辅助设计引物。引物由北京赛百盛生物技术有限公司合成。PDCD5F：5'-GGG CCA TGC AGA GTG ACT GT-3'，PDCD5R：5'-GCA ACC ACA GGC AGC ATT C-3'。PCR反应体系(20μl)含100ng模板DNA，1×Go Taq reaction buffer，0.8mmol/L dN，0.5μmol/L上、下游引物，1.0 U Taq DNA聚合酶(美国promega公司)。反应条件：95℃预变性3 min，94℃变性30 sec，61℃退火30 sec，72℃延伸30 sec，共35个循环后于72℃延伸10 min。15 μl PCR产物用限制性核酸内切酶BssS1(美国New England Biolabs公司)于37℃孵育2 h，酶切产物于2.5%琼脂糖凝胶(含溴化乙锭0.5 μg/ml)中行电泳分离。AlphaImager 2200凝胶成像系统观察酶切结果，结果显示，PDCD5 GG纯合突变型为1条带(190bp),CC纯合野生型为2条带(100和90bp), CG杂合型为3条带(190、100和90bp)，见图1。部分样本通过测序验证结果(北京利嘉泰成科技有限公司)，测序结果与实验结果相符(图2～4为部分测序结果)。

　　1.3 统计学分析

　　应用SPSS 13.0软件进行统计学处理。用群体遗传学Hardy-Weinberg 平衡定律检验分析311例原发性乳腺癌患者PDCD5的基因型频率是否符合Hardy-Weinberg 平衡定律，用Pearson χ2检验分析其基因多态性与乳腺癌患者临床病理特征的关系，并用log-rank检验、Kaplan-Meier生存曲线分析基因多态性与乳腺癌患者预后之间的关系。检验方法均为双侧概率检验，以P<0.05为有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 基因型分布

　　311例原发性乳腺癌患者中，PDCD5基因多态频率分布为：CC纯合野生型41.8%(130/311)、CG杂合型43.4%(135/311)、GG纯合突变型14.8%(46/311)。其基因多态频率分布符合Hardy-Weinberg 平衡定律(P=0.260)。同时检测了30对乳腺癌肿瘤组织基因型和正常配对乳腺组织基因型，证实两者基因型一致。

　　图1 PCR-RFLP检测PDCD5基因多态性

　　M：100 bp ladder

　　1，4：纯合突变型GG (190 bp) ;

　　2，3，6：杂合型CG (190 bp、100 bp、90bp) ;

　　5，7：纯合野生型CC(100 bp、90 bp) 图2 PDCD5基因测序结果(为CG)

　　2.2 PDCD5基因多态性与临床病理参数的关系

　　在311例病例中，PDCD5基因型与乳腺癌患者的PR状态相关，PDCD5 CG/GG基因携带者的PR阴性率(50.9%)显著高于CC携带者的PR阴性率(38.6%)，P=0.035，而PDCD5基因多态性与年龄、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移状态、雌激素受体(estrogen receptor，ER)状态、孕激素受体(Progesterone receptor,PR)状态等临床病理特征均无显著相关性(P>0.05)，见表1。

　　2.3 PDCD5基因多态性与乳腺癌预后的相关性

　　表2显示，在311例病例中，PDCD5基因多态性与乳腺癌患者预后均无相关性。PDCD5 CC、PDCD5 GG+CG的5年无病生存率(Disease-free survival，DFS)分别为76.7%和77.8%(P=0.671);5年总生存率(Overall survival，OS)分别为80.7%和81.7%(P=0.770)，生存曲线见图5。此外，乳腺癌患者的肿瘤大小、TNM分期、淋巴结状态、ER状态、PR状态与预后显著相关(P<0.05)。

　　3 讨论

　　细胞增殖与细胞凋亡之间的不平衡是肿瘤形成的基础，PDCD5基因是调控细胞凋亡的因子之一，在肿瘤的发生发展中起着非常重要的作用。Spinola等[5]应用单核苷酸多态性全基因组扫描技术行肺癌易感基因研究，统计分析显示，与常见的CC基因型相比，变异型GG或CG基因型携带者肺癌发病风险显著升高，提示PDCD5基因多态在肿瘤发生过程 表1PDCD5的多态性与临床病理参数关系表2 PDCD5基因多态性对乳腺癌患者DFS和OS的影响 中起重要作用。至今国内外尚未见关于此基因多态与乳腺癌易感性及预后之间的报道。

　　本文对具有长期随访资料的乳腺癌肿瘤组织样本进行回顾性研究，探讨PDCD5基因多态与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系，实验中同时检测了30对乳腺癌肿瘤组织和配对正常组织基因型，其基因型结果一致，说明对于PDCD5基因多态检测而言，肿瘤组织基因型基本可以代表患者胚系基因型情况。研究结果显示，在311例病例中，PDCD5基因型与乳腺癌患者的PR状态相关，PDCD5 CG/GG基因携带者的PR阴性率显著高于CC基因携带者，PR阴性高表达的乳腺癌患者常提示预后不良。PDCD5基因多态与PR阴性高表达有关，提示PDCD5基因型可能与预后不良有关。但在311例病例中，PDCD5基因多态与预后无显著相关性，与Spinola等[5]报道不一致，他们对254例意大利肺癌患者进行生存分析，结果显示变异型PDCD5 CG/GG基因型携带者的生存率低于CC基因型携带者。这种结果可能是由种族差异引起，也可能是由于病例数或病种不一致或引物序列不一致所致，Spinola等[5]采用的是rs1862214序列，所以PDCD5是否是不同种族的肿瘤患者的易感因素或是否与不同肿瘤的预后有关尚待进一步研究。本研究结果初步显示，PDCD5基因多态性检测对乳腺癌患者预后判断可能没有直接参考价值。

　　【参考文献】

　　[1]Liu HT , Wang YG,Zhang YM, et al . PDCD5 , a novel apoptosis-related gene cloned from human leukemia cell line TF-1 , could enhance apoptosis of some tumor cells induced by growth factor withdrawal [J].Biochem Biophy Res Comm, 1999, 254 :203 - 210

　　[2]杜颖, 洪天配. TF-1细胞凋亡相关基因19与甲状腺肿瘤之间关系的初步探讨. 中华内科杂志, 2003, 42 (7) : 492-494

　　[3]冯静, 崔恒, 魏丽惠, 等. TFAR19 蛋白在卵巢上皮性癌中的表达. 中国妇产科临床, 2002, 3 (3) : 164-167

　　[4]刘红涛,王玉刚,张颖妹,等. TF-1细胞凋亡相关基因的研究[J] . 生物化学与生物物理进展, 1999, 26 (1) :38-43

　　[5]Spinola M, Meyer P, Kammerer S, et al. Association of the PDCD5 locus with lung cancer risk and prognosis in smokers. J Clin Oncol, 2006, 24(11):1672-1678