胃癌中eif4E、cyclinD1及P27的表达及其意义

作者：王坤 耿敬姝作者单位：哈尔滨医科大学第三附属医院病理科硕士研究生，现在齐齐哈尔医学院药学系辅导办（王坤）    【摘要】  目的 研究eIF4E、P27及cyclinD1在胃癌中的表达及其相关性，探讨其表达的临床意义。方法 应用免疫组织化学技术，检测56例胃癌组织eIF4E、P27及cyclinD1的表达情况。运用卡方检验或确切概率法统计，利用SPSS13.0对数据进行分析。结果 56例胃癌患者中，eIF4E表达的阳性率为82.14%,eIF4E表达在胃癌不同的分化组间差异显著(P<0.01)；P27及cyclinD1表达的阳性率分别为42.86%、33.93%,二者表达在胃癌分化、淋巴转移及浸及深度不同的组间差异均显著(P<0.05)。三者之间的表达显著相关(P<0.01)。结论 eIF4E、P27及cyclinD1与胃癌的分化程度密切相关,且P27及cyclinD1与胃癌的浸及深度及淋巴结转移密切相关。eIF4E、P27及cyclinD1可作为反映胃癌生物学行为的客观指标。 【关键词】  胃癌 eIF4E P27蛋白 细胞周期素D1 免疫组织化学　　恶性肿瘤的发生及发展是一个多步骤的过程，是多种基因型及其表型变化的结果，是原癌基因的激活和抑癌基因的失活而引起细胞生长和功能调节的变化导致的。胃癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一，在中国曾经是造成死亡人数最多的恶性肿瘤。近年来它的发病数字仍居高不下，严重威胁着广大人民的健康。其死亡率高原因之一是胃癌一经发现几乎均为中晚期。近年来的研究表明，癌基因的显性作用和肿瘤抑制基因的失活是肿瘤发生的分子基础。cyclinD1和eIF4E作为原癌基因在国内外许多研究中发现其过度表达与恶性肿瘤的发生发展有关，p27 作为抑癌基因的失活与肿瘤的发生密切相关。本文旨在探讨cyclin D1、eIF4E 和p27在胃癌中表达的临床意义及三者之间的关系，同时为胃癌的诊断提供参考指标，也为胃癌的治疗提供一些实验依据。现报道如下。　　1  材料和方法

　　1.1  标本来源  56例胃癌选自哈医大附属肿瘤医院1999~2005年手术标本，男41例、女15例，年龄30～75 岁，平均53.6 岁。并有完整临床资料和病理诊断。标本均按全国胃癌协作组［1］规范取材、诊断，组织学类型为高分化胃癌18 例，低分化腺癌18 例，粘液腺癌10例及印戒细胞癌10 例。淋巴结转移：阳性24例，阴性32例。浸及深度：累及浆膜者27例，未累及浆膜者29例。

　　1.2  方法  所有标本常规取材,福尔马林固定,石蜡切片(4μm)，用于免疫组化染色。采用S2P法，玻片经多聚赖氨酸预处理，高压锅抗原修复。一抗采用即用型工作液cyclinD1兔抗人单克隆抗体，鼠抗人p27kipl单克隆抗体，鼠抗人eIF4E单克隆抗体。一抗和S2P 试剂盒购自福州迈新公司。染色过程按试剂盒说明操作。

　　1.3  结果判定  切片免疫组化染色分析以已知阳性的乳腺癌为阳性对照，以PBS 替代一抗为阴性对照。ceIF4E、P27及cyclinD1的判断标准：选染色均匀的区域，显微镜下随机选择10 个高倍视野计数，阳性细胞数<10 %为阴性，≥10%为阳性［2］。

　　1.4  统计分析  运用卡方检验或确切概率法统计，采用SPSS13.0统计分析软件。

　　2  结果　　　　见表1和表2。

　　表1  胃癌eIF4E、P27及cyclinD1表达与临床病理参数之间的关系　略    　　eIF4E在胃癌中表达的阳性率为76.79%。eIF4E阳性表达主要位于胃癌细胞浆和细胞膜上。利用SPSS13.0统计软件分析，eIF4E的表达在胃癌不同分化程度组间有显著差异（P<0.05）、在淋巴结有无转移组间及不同浸润深度组间无显著差异（P>0.05）。p27在胃癌中表达的阳性率为42.86%。p27阳性表达主要位于胃癌细胞核上。P27的表达在胃癌不同分化程度组间、不同浸润深度组间及淋巴结有无转移组间有显著差异（P<0.05）。cyclinD1在胃癌中表达的阳性率为51.79%。cyclinD1阳性表达主要位于胃癌细胞核上。cyclinD1的表达在胃癌不同分化程度组间、不同浸润深度组间及淋巴结有无转移组间有显著差异（P<0.05）(见表1)。

在56例胃癌中，44例eIF4E阳性胃癌中p27阳性14例；12例eIF4E阴性胃癌中p27阳性10例，eIF4E阴性者的p27阳性表达率显著高于eIF4E阳性者(χ2=10.217，P=0.001，P<0.01)，呈明显负相关。提示eIF4E和p27在胃癌组织中呈反向表达。在56例胃癌中，44例eIF4E阳性胃癌中cyclinD1阳性27例；12例eIF4E阴性胃癌中cyclinD1阳性2例，eIF4E阳性者的cyclinD1阳性表达显著高于eIF4E阴性者(χ2=7.544，P=0.006，P<0.01)，呈明显正相关。提示eIF4E和cyclinD1在胃癌组织中呈正向表达。在56例胃癌中，24例P27阳性胃癌中cyclinD1阳性2例;32例p27阴性胃癌中cyclinD1阳性27例，p27阴性者的cyclinD1阳性表达显著高于p27阳性者(χ2=31.761，P=0.000,P<0.01)，呈明显负相关。提示p27和cyclinD1在胃癌组织中呈反向表达(见表2)。

　　表2  eIF4E、p27、cyclinD1蛋白表达的相关性　略

　　3  讨论　　　　研究发现肿瘤的发生发展是多因素、多阶段、多因子作用结果，其中癌基因的激活与抑癌基因的失活是其重要特征。eIF4E 在正常水平是低表达的，过度表达的eIF4E 导致一些原癌基因和一些重要的细胞生长调节因子。上述所提到的基因产物对细胞过度增殖、分裂导致恶性变化有重要影响。从而致肿癌的发生及发展。本研究通过在56例不同分化胃癌标本中对eIF4E 的表达水平检测，可以看到eIF4E 基因蛋白在高分化、低分化及粘液腺癌和印戒癌中的表达率是递增的，提示eIF4E 基因过度表达随恶性度增加而升高，从而证实eIF4E有使细胞恶性转化的能力。可以得出：eIF4E的过度表达与胃癌的发生及发展相关，其过度表达或许可以作为胃癌恶性程度的一个分子标志。可见，eIF4E 以其在胃癌中独特的生物学性能不仅可作为胃癌恶性改变的分子标记，还可以作为基因治疗的靶目标。1994年Toyoshima［3］和Polyak等［4］发现并克隆抑癌基因P27，是一种细胞调节有丝分裂抑制因子，是细胞周期负调控因子，P27的功能主要介导细胞外负性增殖信号向细胞内传递，通过化学计量方式与CDK或cyclin/CDK复合物结合，抑制cyclin/CDK复合物的活性，阻止细胞周期中GI/S期的转换，使细胞周期停滞于G1/GO期，从而抑制细胞增殖，使细胞有机会修复损伤的DNA或DNA复制中的错误，因而被普遍认为是一种抑癌基因。本实验研究发现在p27在胃癌组织中的表达与胃癌的淋巴结转移，浸润深度及分化程度有关。在高分化癌、中分化癌、低分化癌、胃粘液癌及印戒细胞癌中表达阳性率分别为66.67%，27.78%，20.00%和50.00%，经统计学分析，差异显著，提示P27与肿瘤的恶性程度有关，随着肿瘤分化程度降低，p27kip1表达也降低，提示p27基因在胃癌进展中逐渐失去细胞周期负调控能力，使癌细胞具有更高的恶性程度，而肿瘤的分化程度影响肿瘤的预后，证实p27与肿瘤的预后及生物学行为有关，此结果与有关文献报道一致［5-6］。在无淋巴结转移组p27蛋白阳性率(86.25%)明显高于有淋巴结转移组(25.93%)，表明p27蛋白在胃癌的进展及转移过程中逐渐丧失了作为细胞周期负调控因子的抑癌作用，使得癌细胞具有更高的恶性程度和侵袭力。cyclinD1 是一种原癌基因，cyclinD1 与CDK4 结合或复合物活化CDK4，使PRb磷酸化释放出E2F，启动S 期相关基因的转录，使细胞由G1 期进入S 期。cyclinD1表达失控时将引起细胞增殖周期失调，细胞失控性生长形成肿瘤。本研究结果显示，CyclinD1仅在胃癌细胞中表达，56例胃癌标本中发现29例(阳性率为51.79%)有阳性表达，以细胞核为主，这在一定程度上反映CyclinD1的过度表达与胃癌形成间的关系，即CyclinD1的异常参与胃癌的发生。我们还发现CyclinD1在分化程度越低的癌中其表达率越高。提示cyclin D1 的过表达在胃粘膜细胞癌变过程中起重要作用。本实验结果显示，eIF4E与p27在肿瘤的发生发展中相互拮抗，p27的低表达与eIF4E的过度表达可以促进肿瘤的发生发展。eIF4E表达与CyclinDl蛋白的表达呈显著的正相关。eIF4E与CyclinDl在肿瘤的发生发展中可协同促进肿瘤的发生发展。cyclin D1表达与p27蛋白的表达呈显著的负相关，eIF4E与p27在肿瘤的发生发展中相互拮抗，p27的低表达与eIF4E的过度表达可以促进肿瘤的发生发展。综上所述，eIF4E、P27及cyclinD1与胃癌的分化程度密切相关；P27及cyclinD1与胃癌的浸及深度及淋巴结转移密切相关；胃癌中eIF4E与P27呈负相关，eIF4E与cyclinD1呈正相关，P27与cyclinD1呈负相关；eIF4E、P27及cyclinD1可作为反映胃癌生物学行为的客观指标。

【参考文献】  　　［1］ 邓仲端，陈学诗，彭杰青，等.外科病理学［M］.武汉:湖北科技出版社，1978，75(2)：87-88

　　［2］ Xiangming C，Natsugoe S，Takao S,et al.The cooperative role of p27 with cyclinE in the prognosis of advanced gastric carcinoma［J］.Cancer,2000，89(6):1214-1219

　　［3］ Toyoshimo H，Hunter T.P27，anovel inhibitor of G1 cyclin cdk protein kinase activity is related to p21［J］.Cell，1994，78(1)：67-74

　　［4］ Polyak，Lee MH，Drdjumont，Bormage H.Cloning of p27 acyclin-dependent kinase inhibitor and a potential mediator of extracollular antimitogenic signals［J］.Cell，1994，78(1)：59-66

　　［5］ Kim DH，Lee Hl，Nam ES，Shim HS,Sohn JH，Park CH，Yoon DS，Song SY&Park YE.Reduced expression of the cell cycle inhitor p27kip1 is associated with progression and lymph nodemetastasis of gastric carcinoma［J］.Histopathology，2000，36(1)：245-251

　　［6］ Takano Y，Kato Y,Van-Diest PJ，Masuda M，Mitomi H，Okayasu I.CyclinD2 overexpression and cyclinE inversely with a por prognosis in gastric cancer cases［J］.Am J path，2000，156(2)：585-591