肾透明细胞癌中FGFR1的表达及其临床意义

　　作者：郭峻莉1,罗志飞2,郑少江2　　作者单位：国家自然科学基金(30660055，81060184);教育部新世纪优秀人才基金(NCET080657) (海南医学院 1.海南省热带病重点实验室;2.病理学教研室, 海南 海口 571101)

　　【摘要】目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子受体1 (fibroblast growth factor receptor 1, FGFR1)在肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma， RCCC)中的表达及其临床意义。方法：采用SP免疫组化方法检测45例RCCC组织中FGFR1的表达。同时，用原位杂交方法检测20例RCCC组织中FGFR1 mRNA的表达。结果：在RCCC中FGFR1蛋白及FGFR1 mRNA表达的阳性率分别为68.9%(31/45)、80.0%(16/20), 明显高于癌旁正常肾组织(P<0.01)。FGFR1蛋白表达与FGFR1 mRNA的表达呈一致性(P<0.05)。FGFR1蛋白表达与病理组织学分级和临床TNM分期相关(P<0.05)。结论：FGFR1与肾透明细胞癌的发生发展和转移密切相关，对判断预后具有一定临床意义。

　　【关键词】 碱性成纤维细胞生长因子受体1,肾透明细胞癌,免疫组织化学;原位杂交

　　[ABSTRACT] Objective: To investigate the expression and their clinical relationship of fibroblast growth factor receptor 1(FGFR1) in renal clear cell carcinoma(RCCC). Methods：SP immunohistochemical method was used to examine the expression of FGFR1 protein in 45 cases of RCCC，which had not been treated by chemotherapy and radiotherapy before surgery. And then in situ hybridization was performed to detect the mRNA level of FGFR1 gene in 20 freezing specimens. Results：Out of 45 RCCC，the positive rates of FGFR1 protein and FGFR1 mRNA were 68.9%(31/45), 80.0%(16/20), respectively. It was found that the expression of FGFR1 was obviously higher in RCCC than in normal tissue adjacent to the tumor(P<0.01). The expression of FGFR1 protein was coincidence with the FGFR1 mRNA, and was significantly correlated with the histologic grade as well as the TNM stage of tumor(P<0.05). Conclusions：The expression of FGFR1 is closely involved in the development, growth and metastasis of RCCC and is comprehensive indexes for prognosis.

　　[KEY WORDS] Fibroblast growth factor receptor1; Renal clear cell carcinoma; Immuohistochemistry;In situ hybridization

　　现已证实实体肿瘤的生长与转移是依赖于血管生成的。成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1, FGFR1)是最重要的肿瘤血管生成调节因子之一，其生物活性主要是通过与高亲和性配体——bFGF结合而发挥作用[1]。我们本课题组和国外研究已表明FGFR1在肿瘤血管生成中扮演着重要角色[24]。同时，研究还表明，bFGF与肾癌的发生发展、浸润和转移密切相关。因此，本研究采用免疫组化和原位杂交技术观察FGFR1在肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma，RCCC)组织中的表达及其临床意义。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　收集我院病理科2000年1月～2009年12月手术切除肾透明细胞癌标本45例，男性28例，女性17例;年龄在29～75岁之间。所有标本术前均未行放化疗, 术后病理确诊为肾透明细胞癌;另取10例癌旁正常肾组织作对照。按2002年美国癌症联合委员会(AJCC)肾癌临床分期标准[5], 1期21例, 2期12例,3期11例,4期1例。其中20例为肾癌患者手术切除标本，术后立即投入液氮保存备后续原位杂交用。FGFR1兔抗鼠多克隆抗体购自Santa Cruz公司, SP试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供，原位杂交试剂盒购置武汉博士德生物工程有限公司。

　　1.2 实验方法

　　分别采用免疫组化和原位杂交法检测FGFR1蛋白和mRNA的表达，免疫组化及原位杂交染色具体操作方法参照文献[46]并严格按照试剂盒说明进行。用己知阳性片作阳性对照，用磷酸盐缓冲液分别代替一抗作阴性对照。

　　1.3 阳性判断标准

　　FGFR1阳性表达定位于细胞膜或细胞质，综合染色强度和阳性肿瘤细胞的百分比进行分级[4]。将染色强度分为：无着色为0分，浅黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。将阳性肿瘤细胞的百分比分为：<10%为0分，10%～50%为1分，51%～75%为2分，>75%为3分。两项相加后分阴性()和阳性(+)：0～1分为(-)，2分以上为(+)。

　　1.4 统计学处理

　　采用SPSS12.0统计软件进行χ2及Fisher‘s精确概率法检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 FGFR1蛋白在RCCC中的表达

　　45例肾透明细胞癌中有31例FGFR1蛋白呈阳性表达(图1)，阳性率为68.9%(31/45)，癌旁正常肾组织中只有1例FGFR1蛋白弱表达, 两组之间存在极显著性差异 (P<0.01)。FGFR1蛋白的表达与病理组织学分级和临床TNM分期均呈显著正相关(P<0.05)，而与性别、年龄无相关(P>0.05)。

　　2.2 FGFR1mRNA在RCCC中的表达

　　FGFR1 mRNA阳性表达部位在细胞膜或细胞质(图2)。20例肾透明细胞癌冰冻切片中FGFR1 mRNA的阳性率为80.0%(16/20)。同时此20例标本的免疫组化染色结果显示FGFR1的蛋白与mRNA均表达阳性的有15例，组间比较有显著统计学意义(P<0.05)，说明FGFR1的蛋白表达与mRNA的表达趋势是一致的。

　　3 讨论

　　肾透明细胞癌是泌尿系常见恶性肿瘤，约占肾细胞癌(RCC) 的70%～80% ,肿瘤血管形成丰富为其特点, 其发生发展依赖于血管生成。FGFR1是一种跨膜蛋白质，属于酪氨酸激酶受体家族中的一类，由细胞外区、跨膜区和细胞内区组成。其作为配体结合区的胞外段和配体bFGF结合后发生二聚体化导致自身磷酸化，从而诱导肿瘤血管生成，有利于肿瘤细胞的增殖、侵袭，促进肿瘤的转移[1]。有文献报道bFGF与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关。我们前期的研究也表明FGFR1在肿瘤血管生成中发挥着重要作用，阻断FGFR1/bFGF之间的信号通路可以抑制肿瘤血管生成进而达到治疗肿瘤的目的[24]。

　　本实验结果表明，随着病理组织学分级和临床TMN分期的增高，FGFR1在肾透明细胞癌中的表达率明显升高呈正相关，表明肾透明细胞癌的生长、浸润和转移依赖于血管生成，同时提示FGFR1的表达在肾透明细胞癌发生发展和转移中起着重要作用，可能是判断肾透明细胞癌预后的一个重要参数。由于bFGF是肾细胞癌发生发展中最重要血管形成诱导因子之一，而FGFR1依赖结合配体bFGF在肿瘤血管生成中发挥其生物活性，由此可见bFGF/FGFR1信号通路在促进肾透明细胞癌血管生成中扮演着重要的角色，但具体机制尚待深入研究。为了增加实验的科学性和严谨性，本实验还采用原位杂交和免疫组化两种方法从基因和蛋白水平上分别检测FGFR1在肾透明细胞癌中的表达情况，结果显示两种检测方法符合率是75.0%，表明检测结果呈一致性。肿瘤血管生成是一个多步骤多因素调控的复杂过程，本研究结果将为后继以FGFR1为靶点的抗肿瘤血管生成生物治疗提供详实的实验室依据。

　　郭峻莉等.肾透明细胞癌中FGFR1的表达及其临床意义

　　【参考文献】

　　1 Marianne V, Spang AJ, Fisherv GW. Noninvasive dynamic fluorescence imaging of human melanomas reveals that targeted Inhibition of bFGF or FGFR1 in melanoma cells blocks tumor growth by apoptosis [J]. Molecular Medicine,2002,8(2):103111.

　　2 Valesky M, Spang AJ, Fisher GW, et al. Noninvasive dynamic fluorescence imaging of human melanomas reveals that targeted inhibition of bFGF or FGFR1 in melanoma cells blocks tumor growth by apoptosis [J]. Mol Med, 2002, 8(2):103112.

　　3 Zheng SP, Zheng SJ, Wu RL, et al. Enhanced efficacy in antitumour activity by combined therapy of recombinant FGFR1 related angiogenesis and lowdose cytotoxic agent [J]. Eur J Cancer, 2007, 43(14):21342139.

　　4 郭峻莉, 郑少江, 郑少萍, 等. Ag43/FGFR1嵌合蛋白疫苗抗小鼠纤维肉瘤血管生成的实验研究[J]. 海南医学院学报，2009,15(5): 403406.

　　5 AJCC. AJCC cancer staging manual[M]. New York: Springer Verlag, 2002.1120.

　　6 郑少江, 吴焕明,王伟,等. LRP在非小细胞肺癌中的表达及其临床相关性研究[J]. 海南医学院学报, 2004, 10(2):7881.