pSer118ERα在乳腺癌组织中的表达及其意义

pSer118ERα在乳腺癌组织中的表达及其意义作者：徐东宏，范忠林， 李云涛    作者单位：050011 石家庄，河北医科大学第四医院外一科     【摘要】  目的 研究乳腺癌组织中丝氨酸118磷酸化的雌激素受体α（pSer118ERα）的表达情况、与ERα、PR表达的关系及临床价值。方法 应用免疫组织化学的方法，检测5年前治疗的70例原发性乳腺癌组织中pSer118ERα、ERα、PR的表达情况，进行相关分析，并用KaplanMeier法分析其与三苯氧胺(TAM)疗效的关系。结果 70例ERα阳性的乳腺癌组织标本中，pSer118ERα的表达与ERα的表达正相关(r=0.348 P=0.003)，pSer118ERα的表达与PR的表达正相关（r=0.241 P=0.044）。pSer118ERα阳性患者的无病生存率高于阴性患者(P=0.013)；PR阳性的患者中，pSer118ERα阳性的患者的无病生存率高于阴性的患者(P=0.021)。结论 pSer118ERα联合PR检测有可能为三苯氧胺疗效的评价提供一个更精确的生物指标。     【关键词】  乳腺肿瘤；雌激素受体α；磷酸化；三苯氧胺；免疫组化     Expression of pSer118ERα in Breast Cancer and Its Significance  XU Donghong,FAN Zhonglin,LI Yuntao  Department of The First General Surgery,Fourth Hospital of Hebei Medical University Shijiazhuang 050011,ChinaAbstract：Objective   To study the expression of pSer118ERα,ERα,PR of tissue in breast cancer by immunohistochemistry and the relationships among them.To explore the relationship between the expression of pSer118ERα and the therapeutic efficacy of tamoxifen.Methods  The expressions of pSer118ERα,ERα,PR in 70 breast cancer tissues were examined by immunohistochemistry.The correlations among them were analyzed and the relationship between the expression of pSer118ERα and the therapeutic efficacys of tamoxifen was analyzed by KaplanMeier.Results  A significant correlation was found between the expression of pSer118ERα and the expression of ERα (Spearman r=0.348,P=0.003).A significant correlation was also found between the expression of pSer118ERα and the expression of PR in breast cancer (Spearman r=0.241 P=0.044).KaplanMeier outcome analysis showed that  patients with positive pSer118ERα had a longer diseasefree survival than those with negative pSer118ERα (P=0.013).And patients with positive pSer118ERα had a longer diseasefree survival than those with negative pSer118 ERα (P=0.021) among the cases with positive PR.Conclusion  The examination of pSer118 ERα and PR maybe a precise biomarker to evaluate the efficacys of tamoxifen.    Key words：Breast neoplasma;Estrogen receptor α;Phosphorylation;Tamoxifen;Immunohistochemistry    内分泌治疗是ERα阳性乳腺癌患者的重要治疗手段之一，三苯氧胺(TAM)仍是目前应用最广泛的选择性雌激素受体调节剂(selective estrogen receptor modulators.SERMs)。研究发现ERα是一类通过磷酸化激活的受体，其中丝氨酸１１８是最重要的磷酸化位点之一[1]。本课题利用免疫组化法回顾性用分析了７0例乳腺癌患者癌组织中pSer118ERα的表达情况，现介绍如下。1  材料与方法    1.1  一般材料    70例乳腺癌患者均为女性，年龄31～83岁，中位年龄48岁；2000年2月～2001年12月住院手术治疗，术后经病理证实为浸润性导管癌50例，浸润性小叶癌16例，黏液腺癌2例，髓样癌2例。全部病例用免疫组化检测癌组织中ERα阳性，术后服用TAM 5年，随访至2007年3月。    1.2  检测方法    取石蜡包埋组织，4μm连续切片，应用过氧化物酶标记的链霉素染色进行免疫组织化学染色（SP法）。一抗为加拿大Cell signaling technology公司产品，二抗均为美国Zymed公司产品。    1.3  结果判断    用PBS代替一抗作阴性对照，用已知的阳性切片作阳性对照。pSer118ERα的判断以肿瘤细胞核中出现棕黄色颗粒为阳性细胞，染色得分（ＩＨＣ得分）为染色强度和高倍视野镜下阳性细胞数分级的乘积。染色强度分级：0分（没有），1分(弱 )，2分(中等)，3分(强)；阳性细胞所占百分比分级：0分（没有），1分（＜1/100  ）,2分（1/100～1/10）,3分（1/10～1/3）,4分（1/3～2/3）,5分（＞2/3）。另外把阳性细胞数＞1/100的定为阳性，≤1/100的定为阴性。    1.4  统计学方法    应用SPSS13.0统计软件进行统计学分析，采用Spearman相关分析，KaplanMeier生存分析等方法，P<0.05为差异有统计学意义。2  结果    70例ERα阳性的乳腺癌组织标本中，pSer118ERα阳性41例(58.6%)，阴性29例(41.4%)，且pSer118ERα的表达与ERα的表达正相关(r=0.348,P=0.003)。pSer118ERα的表达也与PR的表达正相关（r=0.241，P=0.044）。    pSer118ERα阳性和阴性患者5年无病生存率分别为58.5%和48.3%，pSer118ERα阳性患者随访期内各时点的生存率均明显高于阴性组(P=0.013),见图1；PR阳性的患者中，pSer118ERα阳性和阴性患者5年无病生存率分别为56.5%和44.4%,pSer118ERα阳性患者随访期内各时点的生存率均明显高于阴性组(P=0.021),见图2。3  讨论    乳腺癌组织中ERα表达是选择内分泌治疗的金标准，ERα自氨基端到羧基端有AF1、AF2两个激活功能区和A/B、C、C～D、E、F五个功能区，AF1位于A/B区，AF2位于E 区。ERα的AF1区主要是通过几个位点的磷酸化来调节其活性,常见的位点包括Ser104、Ser106 、Ser118、Ser167等，Ser残基磷酸化使ERα介导的转录活性增强[12] 。AF2区主要通过酪氨酸残基的磷酸化增进ERα的转录活性[3]。    Le Goff等[4]报导，在COS1细胞株中，Ser104、Ser106 、Ser118 均为雌二醇诱导的磷酸化位点，并与ER转录激活功能相关，它们 位于A/B区，若ER的A/B区缺失或者A/B区中Ser残基被丙氨酸代替，则雌激素及雌激素拮抗剂均不能刺激其磷酸化,且ERα的转录活性下降30%～40%。另有研究报道，在成纤维细胞和上皮细胞中，Ser118突变成丙氨酸后，其转录活性也降低[5]。说明Ser118的磷酸化可能影响ERα的转录活性。Murphy等[67]用免疫组化法证明pSer118ERα在乳腺癌组织中表达，而在正常乳腺组织中无表达。    PR的合成受ER所调控，因此，PR 的表达反映了ER 的功能性通路,PR阳性常常提示ER的功能活性  [811]。ER阳性，PR阳性的乳腺癌被认为是真性激素依赖性肿瘤，此类患者内分泌治疗有效率为６０％～70%；ER阳性，PR阴性的乳腺癌一般认为ER为非功能性或雌激素的刺激不足以启动PR的合成，此类患者内分泌治疗有效率为20%～30%；ER阴性，PR阴性的乳腺癌对内分泌治疗不敏感，有效率一般不足10%。Murphy等[6]用免疫组化的方法对117名乳腺癌组织进行检测，发现PR的水平、状态和pSer118ERα有正相关性。本实验发现乳腺癌组织中pSer118ERα的表达(IHC得分)与PR表达亦呈明显正相关(r=0.241,P=0.044)。pSer118ERα和PR可能共同反映了完整的、功能性的雌激素受体信号传导通路，同时说明pSer118ERα和PR之间存在调节关系。    一般认为ERα阳性者，三苯氧胺的疗效好，但临床也发现并非所有ERα阳性表达的患者都能从三苯氧胺治疗中获益。Murphy等[6]对此进行研究，用免疫组化的方法对117名腋窝淋巴结阴性乳腺癌患者的癌组织进行检测，其中113名ERα阳性的患者术后规律口服三苯氧胺，发现pSer118ERα阳性的患者无病生存率优于pSer118ERα阴性的患者(P=0.0118)。本实验中对淋巴结阴性和阳性患者的乳腺癌组织进行检测，KaplanMeier分析结果显示pSer118ERα阳性的患者5年无病生存率明显高于pSer118ERα阴性的患者(P=0.013)，说明在ERα阳性的患者中，pSer118ERα阳性的患者能更多的从三苯氧胺治疗中获益；在PR阳性的患者中，KaplanMeier分析结果显示pSer118ERα阳性的患者无病生存率明显高于pSer118ERα阴性的患者(P=0.021)。由此我们认为pSer118ERα与PR联合检测有可能成为预测内分泌治疗效果更好的生物标记物。【参考文献】［1］ Chen D,Washbrook E,Sarwar N,et al.Phosphorylation of humen estrogen receptor alpha at serine 118 by two distinct signal transduction pathways revealed by phosphorylation specific 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