CD82/KAI1基因蛋白在62例胃癌中的表达
发表时间：2009-10-19 浏览次数：542次
CD82/KAI1基因蛋白在62例胃癌中的表达作者：夏亚斌,张帆,史良会,徐国祥,赵国海 作者单位：皖南医学院附属弋矶山医院，安徽 芜湖 241001 【摘要】 ［目的］ 探讨胃癌组织中抑癌基因CD82/KAI1蛋白的表达与胃癌临床生物学行为及预后的关系。［方法］ 采用免疫组织化学方法检测62例胃癌原发灶、阴性组织切缘中CD82/KAI1基因蛋白产物的表达。［结果］ 胃癌组织中KAI1蛋白阳性表达率为72.5%，显著低于阴性组织切缘的95.2%（P<0.01）。KAI1蛋白在浸润深度的T3+T4组(65.1%)较T1+T2组(89.5%)；低分化组(20.5%)较高、中分化组(88.9%)；淋巴结转移组（59.1%）较无淋巴结转移组(94.4%)；TNM分期中的Ⅲ～Ⅳ期组(63.4%)较Ⅰ～Ⅱ期组表达(90.5%)均降低（P<0.05）。胃癌组织中的KAI1蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、Lauren分型无关，胃癌患者生存期5年以下组的胃癌组织中KAI1蛋白的表达水平明显低于生存期5年以上组（P<0.05）。［结论］ 胃癌组织中KAI1基因蛋白表达降低与胃癌的侵袭、转移及临床病理进展有关。 【关键词】 胃肿瘤 An Analysis of CD82/KAI1 Expression in 62 Cases with Gastric Cancer XIA Ya-bin, ZHAN Fan, SHI Liang-hui, et al. (Yijishan Hospital, Wannan Medical College, Wuhu 241001, China) Abstract: ［Purpose］ To explore the relationship of CD82/KAI1 expression with clinical biological behavior and prognosis of gastric cancer. ［Method］ The specimens from 62 cases with gastric caner and their CD82/KAI1 expression both in primary gastric cancer focus and in negative tissue margin were detected by S-P immunohistochemical technique. ［Results］ The positive expression rate of KAI1 was 72.5% in gastric cancer tissue, which was significantly lower than that in negative tissue margin (95.2%, P<0.01). The KAI1 expression was lower in group of T3+T4 (TNM staging system) than that in group of T1+T2 (65.1% vs. 89.5%); in poor differentiation group than that in moderate or well differentiation group(20.5% vs. 88.9%); in lymph node metastasis group than that in without lymph node metastasis group(59.1% vs. 94.4%); Ⅲ~Ⅳ group(TNM stage) than that Ⅰ~Ⅱ group(63.4% vs. 90.5%) （P＜0.05）. It also showed that the KAI1 expression in gastric cancer tissue had no relationship with sex, age, tumor size or Lauren type. The KAI1 expression in ＜5-year survival group was lower than that in ＞5-year survival group(P<0.05). ［Conclusion］ The decreasing expression of KAI1 may be an important factor influencing prognosis, invasion, metastasis in patients with gastric cancer. Key words: gastric neoplasms; CD82/KAI1 protein; immunohistochemistry] 淋巴结及远处转移是导致胃癌治疗失败及患者死亡的主要原因。KAI1基因与肿瘤转移抑制有关[1]。本研究通过检测胃癌原发灶、阴性组织切缘中抑癌基因CD82/KAI1的表达，研究其在胃癌侵袭转移中的作用，及其与胃癌临床生物学行为和预后的关系。1 材料与方法 1.1 病例与标本 收集2000年6月至2001年6月间弋矶山医院普外科手术切除的胃癌存档蜡块共62份。62例患者中男性36例，女性26例，男女性别比为1.38∶1；年龄22～71岁，中位年龄55岁；有淋巴结转移44例，无淋巴结转移18例；患者的临床病理特征见表1。按全国胃癌协作组指定的有关胃癌大体分型、组织学分型、临床病理分期等规范进行严格病理诊断。全部病例均无临床辅助检查可见的其他脏器转移，术前均未接受过放、化疗。每例病例均选择癌组织、阴性组织切缘的常规石蜡包埋蜡块各一枚，制作成4 μm厚的连续切片供检测用。 1.2 试 剂 CD82/KAI1兔抗人单克隆抗体（美国Santa Cruz产品，工作浓度1∶200）和免疫组化试剂盒均购自北京中杉生物技术有限公司。 1.3 方 法 采用免疫组织化学链霉素—生物素（SP）法，切片经常规脱蜡、水化后，余步骤按试剂盒说明书进行。用3%过氧化氢去除内源性氧化酶，微波抗原修复，苏木精复染，中性树胶封固等。以已知KAI1染色阳性的前列腺增生组织切片为阳性对照[2]，PBS液代替一抗作阴性对照。 1.4 判定标准 CD82/KAI1蛋白免疫染色阳性信号定位于细胞膜/浆，呈棕黄色颗粒。每个标本随机观察5个高倍视野，每个视野计数200个肿瘤细胞，计算其中阳性细胞数，取平均值。阳性细胞数＜5%为阴性（-），5%～24%为弱阳性（+），25%～50%为中度阳性（++），＞50%为强阳性（+++）。 1.5 统计学方法 实验数据经SPSS12.0统计软件包分析处理，计数资料样本率之间的比较采用χ2检验，Kaplan-Meier法绘制生存曲线，并进行Log-Rank检验，P<0.05为差异有显著性。2 结 果 2.1 胃癌组与阴性组织切缘组中CD82/KAI1基因蛋白的表达情况 CD82/KAI1蛋白表达在胃黏膜上皮细胞的细胞膜/浆上呈阳性表达（图1），胃癌组织中CD82/KAI1蛋白表达率为72.5%，显著低于阴性组织切缘的95.2%，两者差异有统计学意义（P<0.01），见表1。 2.2 胃癌组织中CD82/KAI1表达与胃癌临床病理特征的关系 CD82/KAI1蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、Lauren分型无关，T3+T4组较T1+T2组，低分化组较高、中分化组，淋巴结转移组较无淋巴结转移组表达明显降低（P<0.05）。Ⅲ～Ⅳ期患者的KAI1表达较Ⅰ～Ⅱ期患者亦明显降低（P<0.05）。胃癌患者生存期5年以下组的胃癌组织中KAI1的表达水平明显低于生存期5年以上组（P<0.05）(表2)。 2.3 CD82/KAI1表达与患者预后的关系 Kaplan-Meier分析显示，CD82/KAI1阴性患者17例，中位生存期18个月；CD82/KAI1阳性患者45例，中位生存期33个月。经Log-Rank检验两组差异有统计学意义（P<0.01）（图2）。3 讨 论 胃癌原发灶的浸润深度和淋巴结转移是影响患者预后的主要因素，众多学者对胃癌侵袭转移特性及机制进行了广泛的研究。寻找与胃癌转移相关的分子生物学标志物，对胃癌的诊断、转移复发的预测、预后判断、手术中淋巴结的廓清及术后治疗方案的选择具有重要意义。 1995年Dong等[3]采用人特异的Alu元素—PCR方法，从人的11p11.2中分离出了2.4 kb的DNA片段，将其命名为KAI1基因，并证明其是前列腺癌转移抑制基因。KAI1 cDNA长2.4 kb，编码一个由267个氨基酸组成的分子量为29 610D的蛋白质——KAI1蛋白，研究发现KAI1蛋白与CD82的结构完全相同。CD82为一种白细胞糖蛋白[4]，在不同的实验室又被称为R2[5]、C33[6]、IA4[7]和4F9[8]。KAI1蛋白是4跨膜超家族（transmembrane4 super family，TM4SF）成员之一，具有4个疏水跨膜区和一个大的细胞外亲水区，后者包括3个潜在的N端糖基化位点。KAI1基因抑制肿瘤转移的机制尚不完全清楚，但肯定与其结构有很大关系，且具有特殊的结构——细胞外亲水结构区内有3个潜在的N端糖基化位点，这可能为KAI1蛋白与肿瘤细胞表面黏附受体的结合提供了有利条件，使其可以通过封闭黏附受体、阻断肿瘤细胞黏附这一环节抑制肿瘤转移，而且还提示KAI1蛋白参与细胞与细胞或（和）细胞与细胞外基质间的反应[9]。 到目前为止，人们对消化道肿瘤中CD82/KAI1的研究上还存在很大分歧。Guo等[10]认为KAI1在正常食管和胃组织中的表达与在食管癌、胃癌组织中的表达未见区别，且在转移性和非转移性食管癌、胃癌组织中的表达也未见差异，另外肿瘤分级及肿瘤细胞的分化也与KAI1mRNA无关。同年，Hinoda等[11]报道KAI1表达与胃癌分期有关，KAI1阳性胃癌患者的外周或肝转移率较阴性低。Lee等[12]运用RT-PCR方法发现了一种剪切型KAI1，致鼠结肠腺癌的肺、肝转移较表达野生型KAI1基因组明显增多，细胞黏附性减弱，其与胃癌的生长、转移及不良预后密切相关。跟踪文献我们发现，采用免疫组化法检测都认为CD82/KAI1的表达与胃癌转移有关，而运用分子生物学方法检测得出的结果则认为CD82/KAI1的表达与肿瘤转移无关。推测这可能是由于翻译后修饰所致，而造成这种差异的原因尚不太清楚。因此，对CD82/KAI1与食管癌和胃癌的关系仍需进一步深入研究。 我们采用免疫组化法检测CD82/KAI1蛋白在62例胃癌组织、阴性组织切缘中的表达水平，显示胃癌组织中CD82/KAI1表达率明显低于阴性组织切缘，说明胃癌组织中CD82/KAI1基因蛋白表达下降。同时，有淋巴结转移的胃癌组织中CD82/KAI1蛋白的表达率显著低于无淋巴结转移者，均提示CD82/KAI1与胃癌淋巴结转移的发生发展有关。分析认为CD82/KAI1表达的下调可能促使胃癌细胞获得了恶性转化和侵袭转移的潜能，促使癌细胞扩散以及扩散中的癌细胞在淋巴结内定居，并有效地形成淋巴结转移。此外，也可能CD82/KAI1的表达下调削弱了癌细胞间的黏附能力，从而促进了癌细胞的扩散，说明了CD82/KAI1基因是抑制胃癌淋巴结转移的重要因素。本实验结果还显示，随着胃癌分化程度、浸润深度的增加，CD82/KAI1蛋白的表达明显减少，表明CD82/KAI1基因可能具有抑制胃癌细胞浸润和转移的作用。而在不同病理分级的胃癌组织中，随着分级的升高，CD82/KAI1蛋白的表达逐渐减少，说明CD82/KAI1基因表达减少，癌细胞的恶性程度就越大，越易发生浸润与转移。生存时间少于5年的胃癌患者KAI1的表达水平明显低于生存期大于5年组，说明CD82/KAI1基因与胃癌患者的预后密切相关，是评估癌细胞的转移潜能及判断预后的较好指标。 本实验结果与Hinoda等[11]报道的结论相似，但蛋白表达率相差较大，Hinoda等的报道显示KAI1在胃癌组织中表达总阳性率仅为11%，其中在Ⅰa～Ⅲa期的阳性率为16%，在Ⅲb～Ⅳb期的阳性率为0，本文CD82/KAI1蛋白阳性率普遍较高，胃癌组织CD82/KAI1蛋白表达阳性率为72.5%。分析原因，一是实验条件及实验环境不同所影响，二是选取的病例范围不同以及选取的病例数较少。但本实验结果与Zheng等[13]的报道相似。 综上所述，本实验仅从CD82/KAI1基因蛋白的表达水平分析其与胃癌浸润转移之间的关系，而对于CD82/KAI1 mRNA水平、CD82/KAI1基因启动子甲基化、基因突变与缺失及基因的作用机制等很多问题尚需进一步研究。肿瘤的转移涉及到许多基因，而CD82/KAI1只是众多转移抑制基因中的一员，CD82/KAI1与其它转移抑制基因的协同作用及机制也值得进一步去研究。【参考文献】[1] Dong JT,Isaacs WB,Barrett JC, et al. 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