Cyclin E与晚期乳腺癌患者紫杉烷敏感性和预后的关系

作者单位：武汉大学人民医院肿瘤中心，湖北 武汉 430060       【摘要】  ［目的］探讨Cyclin E表达与乳腺癌患者含紫杉烷化疗的敏感性和预后的关系。［方法］湖北省肿瘤医院2001~2004年晚期或复发转移的乳腺癌患者56例进行了含紫杉类药物的联合化疗，免疫组化检测Cyclin E表达水平。［结果］ Cyclin E高表达率为34%（19/56），Cyclin E高表达与紫杉烷化疗有效率无明显联系（χ2=0.1，P=0.8）。然而，低表达Cyclin E的患者中位生存时间29.1个月（95%CI：25.7~32.7），明显长于高表达患者的23.4个月（95%CI：19.7~27.2）（Log-Rank=4.1，P=0.04）。 ［结论］ 在乳腺癌患者中，Cyclin E不能准确判断紫杉类药物的近期疗效，但Cyclin E高表达可能是提示长期预后差的生物标志之一。

   【关键词】  乳腺肿瘤

    Impact of Cyclin E on Sensitivity of Taxane-Containing Chemotherapy and Prognosis in the Patients with Advanced Breast Cancer

    SONG Qi-bin, TAO Wei-ping, XU Xiao-tao, et al.

    (Renmin Hospital of Wuhan University Cancer Centre,Wuhan 430060, China)

    Abstract: ［Purpose］ To investigate the impact of Cyclin E expression on sensitivity of taxane-containing chemotherapy in advanced breast cancer. ［Methods］ Fifty-six cases chemotherapy with advanced or recurrent breast cancer patients undergoing taxane-containing were enrolled from 2001 to 2004 in Hubei provincial cancer hospital. The expression of Cyclin E was detected by immunohistochemistry. ［Results］ High expression of Cyclin E was 34%（19/56）. There was no significant relationship between high expression of cyclin E and response rate（χ2=0.1，P=0.8）. However, median overall survival time in patients with high cyclin E expression was 29.1 months（95%CI：25.7~32.7）, it was significantly longer than that in patient with low Cyclin E expression (23.4 months,95%CI：19.7~27.2）(Log Rank=4.1，P=0.04). ［Conclusion］ Cyclin E can not accurately predict short-term response with taxane, however it may be considered as a biomarker to indicate poor prognosis in long-term.

    Key words: Cyclin E; breast neolpasms；taxane; sensitivity

    早期乳腺癌手术后或晚期乳腺癌的辅助化疗、内分泌治疗是减少患者死亡率、延长生存时间的最重要因素。虽然雌激素受体和HER-2状态可以预计激素治疗和抗体治疗的反应，但对于细胞毒药物，临床尚无有效的生物标志进行预判。目前，微阵列研究发现，多个基因标志可以预测乳腺癌患者的治疗反应和生存时间[1，2]，以避免过度或过少辅助治疗。Keyomarsi等[3]对乳腺癌患者组织标本进行基因表达分析发现，Cyclin E水平与乳腺癌患者的生存时间存在明显相关。随后，Jenny等对24例新辅助化疗的乳腺癌患者研究发现，使用参与凋亡、蛋白转远、信号传导、RNA翻译的92个基因标志可以判断多西紫杉醇的化疗敏感性[4]。本课题探讨Cyclin E基因表达模式与紫杉类化疗药物敏感性的关系。

    1   材料与方法

    1.1   病例选择

    收集湖北省肿瘤医院2001~2004年晚期或复发转移的乳腺癌患者56例。入选标准为：患者存在可测量的病灶，年龄大于18岁，化疗前6个月未进行任何细胞毒药物，进行了至少2个周期含紫杉类药物（紫杉醇135mg/m2，或多西紫杉醇75mg/m2，21天1个周期）的联合化疗，一般状态PS评分0~2，预计生存时间大于6个月。排除标准：之前使用过含紫杉烷药物化疗和脑转移的患者。

    1.2   临床指标检测

    乳腺癌的诊断和分期由两名临床病理医师确定。标本进行临床常规的ER、PR和HER-2检测。标本为石蜡包埋的组织块，均为手术切除标本。在开始治疗、每2个周期后进行病灶大小的评估，测量两个最大径计算乘积。至少2个周期化疗后，可测量的病灶的直径积缩小25%以上被称为敏感[4]，否则被认为治疗抵抗。

    1.3   免疫组织化学检测

    标本福尔马林固定，石蜡包埋，进行免疫组织化学检测。针对人Cyclin E靶基因的mRNA 序列为5′-TCGGC TCGCT CCAGG AAGAG GAAGG CAAAC-3′，5′-GCTGC TTCGG CCTTG TATCA TTTCT CGTCA-3′，5′-TTGTC TGAAC AAAAT AGGGC TTCTC CTCTC-3′。使用含DEPC的固定液固定后，经过预杂交、杂交、抗体封闭、显色，最后观察结果，含Cyclin E mRNA的细胞胞浆着色呈棕黄色。Cyclin E的表达分为0、1、2、3个等级，低于或相似于正常组织为低表达（0~1级，Ⅰ组），高于正常组织为高表达（2~3级，Ⅱ组）。

    1．4   统计学方法

    数据处理采用SPSS12.0统计软件。计量资料以x±s表示，计数资料的比较采用χ2检验和精确概率法。均数的比较采用 t 检验或ANOVA。风险因素OR值及95%的可信区间采用Logistic回归分析。多参数分析使用Cox回归模型，生存时间使用Kaplan-Meier分析、Log-Rank比较。Cyclin E判断价值的分析使用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线下面积[4]。

    2   结   果

    2.1   一般临床特征

    患者的病理类型主要是导管癌（82%，46/56），转移的部位主要为肺和/或肝。所有患者的辅助化疗为TP或TA或单药T（T=紫杉醇或多西紫杉醇，P=顺铂或卡铂，A=阿霉素），其他资料见表1，两组间差异无显著性。

    2.2   Cyclin E表达与化疗敏感性

    所有患者中，年龄、临床分期、淋巴结转移、HER-2的表达与患者预后存在相关，但化疗方案、周期数与预后无关。Cyclin E的高表达为34%（19/56），Cyclin E表达与肿瘤类型、分期和HER-2表达无显著性相关。但Cyclin E在≤50岁患者的表达率趋向更高，但无统计学差异。在Cyclin E低表达组和高表达组，化疗药物的有效率相似，分别为91.9%，89.5%（χ2=0.1，P=0.8）。计算两组体积缩小的百分比值也无显著性差异。见表2。

为了进一步分析Cyclin E表达判断近期疗效的准确性，将Cyclin E表达的0~3个分级进行使用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）分析，曲线下面积为0.55（95CI%：0.41~0.72），P=0.56，提示用Cyclin E表达判断近期疗效准确性不高。见图1。

    2.3   Cyclin E表达与患者生存时间的关系

    对患者的随访资料（中位时间29个月）进行生存分析发现，低表达Cyclin E的患者（Ⅰ组）中位生存时间29.1个月（95%CI：25.7~32.7），长于高表达患者23.4个月（95%CI：19.7~27.2），Log-Rank=4.1，P=0.04，见图2。

    3   讨   论

    在乳腺癌的研究中，HER-2、p53、p27和EGFR与紫杉烷类药物的敏感性无明显相关性，但在不同的癌症类型中，β微管蛋白异构体的高表达与紫杉烷抵抗有关。Cyclin E是细胞周期调控蛋白激酶CDK的活性亚单位，与催化伴侣结合，诱导细胞从G0、G1期向S期进展，并最终促发有丝分裂。Cyclin E有多种异构体，主要的50kD的异构体称为EL1，存在于正常和肿瘤细胞中；EL4的 2个不同氨基酸端发生清除，形成2个小分子量Cyclin E异构体，EL2/3和EL5/6，仅仅肿瘤细胞能进行此过程[5]。在乳腺癌细胞和原发肿瘤中，Cyclin E异构体具有高度活性，过表达会促进乳腺肿瘤形成[6]。

    Keyomarsi等[3]发现，癌组织中Cyclin E和小分子量Cyclin E（Cyclin异构体）的水平与乳腺癌患者的预后存在明显相关（P<0.001），不论是否存在淋巴结转移，低Cyclin E和小分子量Cyclin E水平的患者生存时间明显长于高水平患者。

    本研究发现，Cyclin E的表达不论高低，晚期乳腺癌患者使用紫杉类药物的近期疗效均非常好，约90%。最重要原因可能是乳腺癌本身对化疗药物很敏感，或者紫杉类药物具有很强的抗癌作用，短期内可以有效地缩小肿瘤，因此湮没了Cyclin E对化疗敏感性影响。其次，由于样本例数较少。进一步对Cyclin E判断疗效的准确性进行ROC分析，其曲线下面积仅为0.55（大于0.8才认为特异性和准确性较高）。当然，本研究评估的是单药敏感性，而化疗绝大多数是进行的联合方案，因为在临床工作中，不可能违背伦理进行非医学原因的选择单药治疗。因此本文不否认，涉及其他药物也许导致Cyclin E相关结论的偏倚。但是，许多研究认为，对于复发或晚期乳腺癌，推荐使用含紫杉类药物的联合方案，提示紫杉烷的疗效存在主导地位[7]，说明这种偏倚影响是次要的。

    令人感兴趣的是，高表达患者的中位生存时间为23.4个月，明显短于低表达患者。提示，在晚期乳腺癌患者中，虽然Cyclin E与紫杉类药物治疗近期疗效无关，但可能是判断长期预后的生物标志。不一致的原因可能是：一般化疗仅为4~6个周期，而后续使用最佳支持治疗，使恶性细胞几乎在近似自然的状态下进行侵袭，因此对于Cyclin E高表达的患者，Cyclin E的恶性作用可能就表现出来而导致预后差。而且，有研究发现，在使用内分泌辅助治疗的乳腺癌患者（n=108）中，Cyclin E的表达水平与无复发生存时间下降存在明显相关（P=0.001），是预计内分泌治疗失败的重要生物标志[8]。其原因可能是，内分泌治疗相对温和，可以充分显示Cyclin E的恶性特征；其次，内分泌治疗一般为3~5年甚至更长，该研究结论也可能与本研究在实质上一致的，是判断长期治疗的效果的标志。

    值得提出的是，与HER-2、ER、PR作为药物敏感性、预后判断的生物标志不同，前者已是治疗的靶点[9]，已经得到前瞻性的研究证实，但Cyclin E却仅为回顾性证据。因此，需要降低Cyclin E的表达（如使用单克隆抗体、基因封闭）对照研究，以进一步证实Cyclin E与预后的关系[9]。

【参考文献】  [1] van’t Veer LJ, Dai H, van de Vijver MJ, et al. Gene expression profiling predicts clinical outcome of breast cancer[J]. Nature, 2002, 415 (6871):530-536.

[2] Borg A, Ferno M, Peterson C. Predicting the future of breast cancer[J]. Nat Med, 2003, 9(1):16-18.

[3] Keyomarsi K, Tucker SL, Buchholz TA, et al. Cyclin E and survival in patients with breast cancer[J]. N Engl J Med, 2002, 347(20):1566-1575.

[4] Chang JC, Wooten EC, Tsimalzon A, et al. Gene expression profiling for the prediction of therapeutic response to docetaxel in patients with breast cancer[J]. Lancet, 2003, 362(9369):362-369.

[5] Koepp DM, Schaefer LK, Ye X, et al. Phosphorylation-dependent ubiquitination of cyclin E by the SCFFbw7 ubiquitin ligase[J]. Science, 2001, 294(5540):173-177.

[6] Ransohoff DF. Rules of evidence for cancer molecular-marker discovery and validation[J]. Nat Rev Cancer, 2004, 4(4):309-314.

[7] Ghersi D, Wilcken N, Simes RJ. A systematic review of taxane-containing regimens for metastatic breast cancer[J]. Br J Cancer, 2005, 93(3):293-301.

[8] Span PN, Tjan-Heijnen VC, Manders P, et al. Cyclin-E is a strong predictor of endocrine therapy failure in human breast cancer[J]. Oncogene, 2003, 22（3）:4898-4904.

[9] Ludwig JA, Weinstein JN. Biomarkers in cancer staging, prognosis and treatment selection[J]. Nat Rev Cancer, 2005, 5(11):845-856.