Brg1基因在宫颈癌中的表达

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王秀明　　芜湖市第二人民医院肿瘤科

何莲芝　　芜湖市第二人民医院肿瘤科

20世纪90年代以来由于实验室技术的发展，目前已被克隆和未被克隆的抑癌基因已达30余种，而且新的抑癌基因还在不断出现。Brg1基因作为一种新发现的抑癌基因，国外有人在研究Brg1与肺癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌等的关系中，发现它是一种重要的抑癌基因。本研究通过免疫组化的方法，观察Brg1基因在宫颈癌、子宫颈上皮内瘤变(CIN)、正常宫颈组织中的表达，探讨Brg1基因在宫颈癌的发生发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料来源

选择弋矶山医院和我院2005年7月至2007年6月的石蜡切片宫颈癌标本共40例，为Ia～IIb期，CIN标本40例，为CINII～CINIII期;正常宫颈40例;宫颈癌标本有淋巴转移11例，无淋巴转移29例。

1.2 Brg1蛋白免疫组化检测技术

选取最佳石蜡组织块，脱蜡至水化后，采用抗原修复处理的链霉素抗生物素蛋白S-P法染色，DAB显色，实验步骤按说明书进行。S-P试剂盒购自北京中杉金桥生物有限公司，Brg1抗体为美国Santa Cruz公司，用已知阳性切片作为阳性对照，以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。结果判断标准：Brg1染色阳性细胞为细胞核呈棕黄色至深褐色，部分细胞质同时为黄色，若只有细胞质着色，可视为阴性。其中阳性细胞<25%为阴性;25%～50%为阳性(+)，51%～75%为中等阳性(++)，>75%为强阳性。

1.3 统计学方法

组间率的比较采用χ2检验，应用SPSS13.0进行统计分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

Brg1在宫颈癌组织及子宫颈癌前病变组织、正常宫颈组织中均表达于细胞核，呈棕黄色至深褐色，部分细胞质同时为黄色。在宫颈癌组织中Brg1蛋白为强阳性表达，在子宫颈癌前病变组织中为中等阳性表达，在正常宫颈中为弱阳性表达或不表达，在正常组织、CIN、癌的发展过程中其表达强度逐渐增加(见封三图1、2、3、4，表1)。Brg1蛋白在癌组织中的阳性表达率为75%，在子宫颈癌前病变组织中的阳性表达率为47.5%，在正常子宫颈组织中阳性表达率为27.5%，三组之间的差异具有统计学意义(χ2=18.20，P<0.05)，两两比较发现，Brg1蛋白的阳性表达在癌组织与CIN组织之间的差异具有统计学意义(χ2=6.37，P<0.05)，癌组织与正常组织相比较，差异也具有统计学意义(χ2=18.06，P<0.05)，而CIN组织与正常组织相比，差异无统计学意义(χ2=3.41，P>0.05)。见表2。表1 Brg1蛋白在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌组织中的表达强度，表2 Brg1蛋白在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌组织中的阳性表达率(略)。

本组40例宫颈癌标本均为Ia-IIb期手术标本，随着临床期别的升高，其阳性率明显升高，但差异无统计学意义(χ2=1.18，P>0.05)，分别比较任意两组之间的差异亦无统计学意义(P>0.05);而在有淋巴结转移的宫颈癌组织中，其阳性率较无淋巴结转移组高，但差异无统计学意义(χ2=0.38，P>0.05)。见表3。表3 Brg1蛋白的表达与宫颈癌临床期别和淋巴结转移的关系(略)

3 讨论

Brg1是SWI/SNF家族的重要组成成分，定位于人类染色体19p，其mRNA长约5247 bp，基因编码的蛋白质相对分子量2.05×105。它主要通过ATP水解产生的动力来影响细胞分裂过程中染色质的重排，使一些特异性的基因不能表达和抑制[1]。Murphy等研究发现，Brg1可以E2F非依赖方式抑制c-fos的转录[2-3]，表明它是一种重要的抑癌基因。也有人研究发现，SWI/SNF家族与许多基因的激活有关，也与转录的抑制有关，它主要通过转录的活化和抑制功能来控制肿瘤的生长[4]。不同的研究发现Brg1基因在前列腺癌及胃癌组织中高表达，而在肺癌组织及多种肿瘤细胞系中表达下调或缺失[5-7]。本研究结果表明Brg1蛋白在宫颈鳞癌组织中高表达，其阳性率明显高于宫颈上皮内瘤变组织和正常宫颈组织。在本研究中，我们同时还发现Brg1蛋白在宫颈鳞癌中的表达以强阳性表达为主，而在正常组织和子宫颈上皮内瘤变组织中，其表达以弱阳性为主，这说明Brg1蛋白在癌组织中的表达强度明显高于正常组织和子宫颈上皮内瘤变组织。Brg1作为抑癌基因，其蛋白或mRNA却在宫颈癌等组织中高表达，且表达强度明显高于其他组织，分析其原因，可能与其启动子异常甲基化、基因突变及其转录激活功能异常等因素有关。这时，异常表达的基因产物可能已失去抑癌基因原有的生物学效应，即功能丢失或产生转录激活作用。

国内有人研究在胃癌、前列腺癌中Brg1高表达与肿瘤的分期、有无淋巴结转移及浸润深度等临床病理因素有关[5-6]。本研究结果发现Brg1表达与宫颈癌的临床分期、有无淋巴结转移等因素有一定的相关性，且随着肿瘤分期的增加，Brg1蛋白的表达有逐渐增加的趋势，只不过这种差异没有统计学意义。同时我们发现，在有淋巴结转移的宫颈癌组织中，Brg1蛋白的表达明显较无淋巴结转移组高，但进一步进行统计学分析则无统计学意义，这可能与样本量过小有关。提示Brg1在术前预测宫颈癌分期，判定有无淋巴结转移方面可能有益，也许可以作为评价肿瘤恶性度及进展和预后的一个指标。Brg1蛋白在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变以及宫颈癌组织中其阳性表达率逐渐升高，这表明随着由正常宫颈组织至宫颈上皮内瘤变最后到宫颈鳞癌的发生发展过程中，Brg1基因可能与宫颈癌的上述发展过程有一定的相关性，Brg1基因的这种功能丢失或转录激活作用均可能发挥着一定作用。

总之， Brg1基因作为一种抑癌基因，在子宫颈癌组织却表现为癌基因的活性，究其原因，可能是Brg1基因在宫颈组织中发生了功能丢失或转录激活作用，从而失去了其抑癌作用，进而在宫颈癌的发生发展的过程中可能起着一定的作用，为我们判断宫颈癌的生物学行为和预后提供一个参考。

【参考文献】

[1]Wong AK,Shanahan F,Chen Y, et al.Brg1 a component of the SWI/SNF complex is mutated in multiple human tumor cell lines.Cancer Res, 2000,60(21):6171-6177.

[2]Strobeck MW,Knudsen KE,Fribourg AF, et al.Brg1 is required for Rb-mediated cell cycle arrest.Proc Natl Acad Sci USA,2000,97(14):7748-7753.

[3]Murphy DJ,Hardy S,Enge1 DA.Human SWI-SNF component Brg1 represses transcription of the c-fos gene. Mol Cell Biol,1999,19(4):2724-2733.

[4]Pal S,Yun R,Datta A,et al.mSin3A/histon deacetylase2 and PRMT5-containing Brg1 complex is involved in transcriptional repression of the Myc target gene cad.Mol Cell Biol,2003,23(21),7475-7487.

[5]李燕，石群立，金行藻，等.组织芯片检测前列腺癌中Brg1表达的研究.中华男科杂志, 2006,12(7), 629-632.

[6]李青，周晓军，谢海龙，等.胃癌组织中Brg1基因突变蛋白表达的研究.医学研究生学报，2005,18(10)，875-878.

[7]关勇军，蔡秀梅，李友军，等.肺癌组织和肿瘤细胞系中Brg1的表达分析.生命科学研究，2007，11(1)，84-89.