牙周炎患者龈沟液细菌培养的结果分析
发表时间：2009-07-01 浏览次数：825次
作者：张利侠 刘波 张军 作者单位：西安 陕西省人民医院检验科（张利侠、刘波）；口腔科（张军）【摘要】 目的 对牙周炎患者龈沟液细菌培养的结果进行分析。方法 以无菌操作技术采集80例牙周炎患者的龈沟液于运送培养基中，经充分震荡混匀后定量接种；厌氧环境培养并对细菌鉴定到种，并对药物替硝唑和甲硝唑的抑菌浓度进行检测。结果 不同年龄段人群培养细菌的种类和数量均不同，青年人群及老年人群的感染菌群数量较高，分别为106~1010CFU/ml 和106~1012CFU/ml，而中年人的菌群数量相比稍低一些为106 ~109 CFU/ml。结论 牙周炎患者龈沟液为多种细菌的混合感染，以厌氧菌为主要致病菌。对替硝唑和甲硝唑的作用而言，前者的治疗效果较佳。
【关键词】 龈沟液 细菌培养 结果分析
牙周炎是人类最常见的口腔疾病之一。厌氧菌是引起牙周炎的主要病原微生物。龈沟是牙周生态系最重要的生态区，也是正常口腔微生物最大的滞留区和保护区。龈沟液是龈沟最重要的生态因子，不仅给牙周微生物提供了丰富的营养源，如无机盐、氨基酸、碳水化合物，而且还含有多种抗菌物质，如蛋白酶、吞噬因子和抗菌因子［1］。龈沟菌群是健康口腔中种类最多的菌群，这些菌群包括兼性厌氧菌和专性厌氧菌。在炎症发生时，牙周因生态失调形成病理性改变，龈沟深度增加，较正常龈沟有更大的滞留区。因此，增加了病原微生物定植、生长、感染的机会。与牙周炎发展有密切关系的厌氧菌有产黑色素厌氧杆菌、梭杆菌属、真杆菌、放线菌、厌氧链球菌等［2］。在我国，成人牙周炎患病率达70％。牙周组织的炎症使牙龈充血水肿、出血、溢脓和口臭，还可引起牙周、牙髓联合病变。牙周组织的破坏导致牙齿松动和移位，最终牙齿脱落。炎症扩散可形成牙周脓肿及颌面部的间隙感染。牙周袋内的细菌和毒素进入血液，可造成菌血症和毒血症，引起细菌性心内膜炎、心肌炎、肾炎、关节炎和眼病等。细菌感染尤其是厌氧菌是牙周炎发病的始动因子。为了临床及时合理的治疗由厌氧菌引起的牙周疾病，我们对80例牙周炎患者的龈沟液进行了细菌培养，并对治疗药物替硝唑和甲硝唑的抑菌浓度进行了检测。
1 材料与方法
1．1 标本的采集
以我院口腔科2005~2006年，年龄在18~60岁之间的门诊牙周炎患者为研究对象，共80例，其中女性35例，男性45例。采集标本前让患者用温开水轻轻漱口以去除口内的食物残渣，然后以无菌技术除去取样部位的龈上菌斑、软垢和牙石，在无菌纱托（球）隔湿的情况下，用无菌纸尖插入龈沟中，停留5s后取出，放入盛有1ml改良Cary-Blair培养液中立即加盖送检。
1.2 标本的处理
将采集的标本在漩涡震荡器中震荡20~30s，以分散细菌团块，然后用10倍系列稀释度将已分散的标本稀释成10-1~10-4的浓度备用。
1.3 标本的接种和培养
取浓度在10-2~10-4间的稀释标本20μL接种于哥伦比亚血琼脂和牛心脑浸液培养基（BHIS），用无菌玻棒将稀释后的标本液均匀涂布后置需氧和厌氧环境中培养48h或72h。1.4 细菌的鉴定 需氧菌和微需氧菌以法国梅里埃VITEK-32的GPI或GNI+卡鉴定，经耐氧实验确认为厌氧菌，以VITEK-32的ANI卡鉴定完成。
1.5 厌氧菌的MIC测定
用牛心脑浸液培养基并补充1%的氯化血红素-维生素K1和5%的脱纤维羊血，对替硝唑和甲硝唑以稀释法进行最低抑菌浓度MIC90的测定。
2 结果
2．1 龈沟液细菌培养的种类及数量分布
龈沟液细菌培养的阳性率为100%，不同年龄段人群培养的细菌种类和数量均不同，青年人群及老年人群的感染菌群数量较高，分别为106~1010CFU/ml 和106 ~1012CFU/ml，而中年人的菌群数量相比稍低一些（为106 ~109 CFU/ml，见表1）。这主要与患者自身的免疫反应有关［3］。表1 龈沟液细菌培养的种类及数量年龄（略）注：CFU：菌落形成单位。
2.2 龈沟液培养的厌氧菌的感染情况 结果显示一种细菌和两种细菌感染率较高，分别为40.0%和47.5%（见表2）。表2 龈沟液培养的厌氧菌的感染情况厌氧菌（略）
2.3 替硝唑和甲硝唑的最低抑菌浓度（MIC90）的测定
见表3。表3 厌氧菌对替硝唑和甲硝唑的MIC90值厌氧菌种类（略）注：MIC90：最低抑菌浓度。
3 讨论
从表1和表2可以看出，牙周炎患者的龈沟液是口腔混合细菌（包括常居菌群和致病菌）感染所致。不同个体感染所引起的细菌、种类及数量均不同。这与个体牙周生态系的平衡有密切关系；牙周生态系的平衡和失调受多种因素的影响，其中主要包括来自宿主和微生物的多种因素的影响。宿主因素主要包括两方面，一是宿主具有的抗力因素，即宿主维持牙周生态平衡的解剖学和生理学特性；二是宿主自身潜在的可能造成伤害的危险因素，如口腔卫生、年龄、饮食习惯、疾病（糖尿病、艾滋病）等。微生物因素则包括可疑牙周病原菌具有与疾病有关的表面结构、毒性产物，以及微生物的相互作用等。导致不同个体感染的菌群和数量有明显的差异。有关牙周病原菌致病的特异性和非特异性学说的讨论虽仍在继续，但病原菌引起个体发病必然具有一定的诱发因素，如：毒性克隆株具有引发疾病的染色体遗传因子、适于定植、局部微环境有助于毒性因子的表达等。
目前，被列入牙周病原菌的包括放线菌、黑色素厌氧杆菌、梭杆菌属、真杆菌、放线菌、厌氧链球菌、密螺旋体等［5］。从表2数据可以看出一种和两种厌氧菌感染者占比例较高，分别为40.0%和47.5%。从表3可以看出80例龈沟液分离的厌氧菌同牙周病原菌是一致的［6］。说明厌氧菌是牙周炎感染的病原菌。替硝唑为硝基咪唑类衍生物，是继目前广泛使用的甲硝唑之后研制出的新一代高效和长效抗厌氧菌新药［4］，药效是甲硝唑的2~4倍，毒副作用比甲硝唑低［3］。从表3的MIC90可看出替硝唑对类杆菌、产黑色素类杆菌、放线菌属、梭杆菌、消化球菌及消化链球菌、韦荣球菌等厌氧菌具有较强抗菌活性。经对80例牙周炎患者进行替硝唑治疗后发现厌氧菌的清除率为84.85%，临床疗效较好。
【参考文献】 ［1］Amano A，Kishima T，Hamad S，et al.Periodontal pathic bacteria in childrenwith Down Syndrome［J］.J Periodontol，2000，71:249-255
［2］Watanabe K，Frommel T.Porphoromonas gingivalis，Actinobacillus actinomycete-mcomitans，and Treponema denticola detection in oral plaque samples using thepolymerase chain reaction［J］.J Clin Periodontol，1996，（23）:212-219 ［3］Paster BJ，Boches SK，Galvin JL，et al.Bacterial diversity in human sub-gingival plaque［J］.J Bacteriol，2001，83(12):3770-3883
［4］杜达耿.替硝唑简介［J］.中国医院药学杂志，2004，14（5）:232
［5］周学东.口腔微生物学［M］.成都：四川大学出版社，2002：260-268
［6］凌均启.牙周炎［M］.北京：人民卫生出版社，1998：199-213
