甘肃省东乡族原发性高血压与AT1R基因多态性及其对降压疗效的观察

　　作者：马丽雅，方金瑞 作者单位：甘肃省人民医院心内科， 甘肃兰州 730000

　　【摘要】 目的 探讨甘肃省东乡族原发性高血压(EH)与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)Ⅰ型受体(AT1R)基因多态性的关系。观察不同基因型的EH患者对AT1R拮抗剂降压治疗的反应。方法 应用聚和酶链反应(PCR)方法检测汉族健康131例、东乡族健康人群102例、汉族EH198例及东乡族EH115例患者的AT1R A1166C基因多态性。随机抽取60例EH患者按基因型分成AA和AC两组，使用缬沙坦药物治疗8周，比较治疗前后的血压情况。结果 汉族EH的AT1RAC基因型明显高于东乡族EH，二者有统计学意义(P=0.046);AA型在东乡族EH组明显高于汉族EH组，二者有统计学意义(P=0.037)。使用缬沙坦治疗8周，同基因型在治疗前后患者血压均下降显著。不同基因型之间比较，降压效果无差异。结论 东乡族EH与AT1R基因AA型有关，AC型与汉族EH有关，C等位基因与EH无关。不同基因型使用相同的药物治疗，降压疗效相同，说明降压疗效与基因型无关。

　　【关键词】 东乡族,原发性高血压,血管紧张素ⅡⅠ型受体基因; 基因多态性;聚和酶链反应;缬沙坦

　　Abstract：Objective To investigate the distribution of the polymorphism of angiotensin ⅡtypeⅠ(AT1)receptor gene in the essential hypertensive population in Dongxiang, Gansu and the impact of the polymorphism on the response of antihypertensive treatment with valsartan. Methods AT1 receptor genotype was detected with polymerase chain reaction (PCR) in 131 normotensive controls of Han people, 102 normotensive controls of Dongxiang people, 198 hypertensive patients of Han people and 115 hypertensive patients of Dongxiang people. Sixty hypertensive subjects treated with valsartan were divided into 2 groups according to their genotypes, and fiftynine patients (AA = 48, AC = 11) of those were followed up for 8 weeks. Results AA genotype of AT1 receptor was significantly more frequent in hypertensive Dongxiang people than in Han people. But no association was found between AT1 receptor genotypes and essential hypertension either in Dongxiang or in Han population. AC genotype of AT1 receptor was significantly more frequent in hypertensive Han people than in Dongxiang people. After 8 weeks of valsartan treatment，the response to valsartan were independent of patients' genotypes. Conclusions AA genotype of the AT1 receptor gene is related to essential hypertension in Dongxiang people in Gansu; while AC genotype of the AT1 receptor gene is associated with essential hypertension in Han people.The effect of valsartan therapy on hypertension was independent of patients’ genotype.

　　Key words：Dongxiang;Essential hypertension;AT1R genotype;Genetic polymorphisma;Polymerae chain reaction; Valsartan

　　原发性高血压(essential hypertension,EH)是一种环境和遗传因素相互作用所致的疾病,肾素血管紧张素系统(reninangiotensin system,RAS)在血压调节中起重要作用，血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensin Ⅱtype 1 receptor，AT1R)基因多态性与EH关系的研究，在不同国家、不同民族和地区之间存在差异性，甘肃省东乡族作为国内外独有的少数民族，有关东乡族AT1R基因多态性与EH发病关系的研究尚未见报道。本研究旨在探讨AT1基因多态性与甘肃省东乡族高血压之间的关系，并观察AT1R拮抗剂缬沙坦对不同基因型EH患者的降压效果。

　　1 资料和方法

　　1.1 研究对象

　　东乡族EH组115例，其中男性73例，女性42例，平均年龄(52.16±14.70)岁，病例采集于我省特有的少数民族-东乡族。汉族EH组198例，男性125例，女性73例，平均年龄(50.08±13.93)岁，病例采集于我院体检中心,根据WHO诊断标准，两组确诊为EH，均排除了其他原因引起的继发性高血压，无其他如冠心病、糖尿病等疾病。对照组分别为东乡族和汉族健康人。

　　AT1R拮抗剂治疗分组：随机(计算机随机抽样法)抽取东乡族EH患者60例，男性45例，女性15例，年龄平均(51.16±11.37)岁，血压水平为Ⅰ～Ⅱ级，其基因型分别为AA和AC型，按AA和AC基因型分成两组，分别给予AT1R拮抗剂缬沙坦80 mg， 1次/d口服，共8周，治疗效果不佳加用双氢克脲塞25 mg，1次/d口服。

　　1.2 研究方法

　　血压的测量及标准根据《2003WHO/ISH高血压治疗指南》。 体重指数(BMI)=体重/身高2(kg/m2)，BMI≥26为肥胖，BMI <24为正常，或BMI≥24且<26为超重。 根据《2003WHO/ISH冠心病治疗指南》，血脂异常的诊断标准分别为血清sanxian甘油三酯(TG)>1.70 mmol/L，总胆固醇(TC)>5.72 mmol/L，高密度脂蛋白(HDL)<1.04 mmol/L，低密度脂蛋白(LDL)>3.64 mmol/L。

　　检测方法：

　　(1)主要仪器: 可变速-可逆转匀浆仪(GlasCol, Terre Haute, USA);低温台式离心机;UV7501紫外分光光度计(上海天美科学仪器有限公司);PCR仪(BioRad iCycler 170870 s. BioRad Laboratories,Inc., USA);电泳仪:1) JYECP 3000，2) JY600(北京市君意机电技术公司);凝胶成像仪(UVP Bioimaging system, UVP, Inc., UK);全自动生化仪(7170S.Automatic Asalyzer,日本)。

　　(2)主要试剂：饱和酚(pH>7.8)、氯仿(天津市天新精细化工开发中心); 异丙醇、无水乙醇, 十二烷基磺酸纳(SDS),溴化乙啶 (均为分析纯)，RNA酶、蛋白酶K (Merck KgaA, Germany)、Taq DNA polymerase(北京鼎国生物技术发展中心)、10mmol/L dNTP mixture、常熔点琼脂糖(北京拜尔迪生物公司)。

　　(3)于清晨空腹抽取肘静脉血约3 ml，用2%EDTA抗凝管抗凝，分离白细胞，用酚/氯仿常规方法提取基因组DNA。 基因检测用PCR扩增及RFLP方法[1]：AT1R基因：正向引物F:5′ATAATGTAAGCTCATCCACC3′，负向引物R:5′GAGATTGCATTTCTGTCGGT3′TaqDNA聚合酶扩增，5U DdeI酶切。PCR扩增：在25 μl PCR在混合反应液中，分别含有1.0 mmol/L MgCI2, 4种dNTP各120 μmol/L, 各种引物分别为0.12 μmol/L, Taq DNA聚合酶1.6 u, 模板DNA 20 ng。PCR条件：94℃预变性60 s, 94℃变性40 s, 58℃退火40 s，72℃延伸50 s，循环30次，再于72℃延伸10 min。经1.5 %琼脂糖电泳确定有一条274 bp带后，将PCR产物用限制酶DdeI (Fermentas Life Science),1.5 U 37℃水浴酶切8 h，A等位基因含DdeI限制位点，酶切后产生165 bp 和 109 bp两条带;C等位基因不能被DdeI消化，只有274 bp一条带。2.5%琼脂糖凝胶(EB染色)电泳分析。AA=274 bp, CC=165 bp+109 bp, AC=274 bp+165 bp+109 bp(图1)。

　　1.3 统计学处理

　　应用SPSS 11.0统计软件，所有计量资料以均数±标准差(±s)表示，计数资料采用χ2检验，计量资料用t检验，P<0.05为有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 EH组与对照组临床参数比较

　　汉族EH组的收缩压、舒张压和LDL明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，汉族EH组的TC、TG、HDL与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。东乡族EH组的收缩压、舒张压显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，其余指标两组差异无统计学意义。汉族EH组的总胆固醇和低密度脂蛋白显著高于东乡族EH组，差异有统计学意义(P<0.01)(表1) 表1 EH组与对照组及生化指标比较(略)注：与对照组比较aP<0.05，bP<0.01

　　2.2 各基因型在不同民族中的分布

　　AT1R基因多态性有AA、AC、CC三个基因型，A和C为等位基因。东乡族EH组AA、AC、CC基因型频率分别为87%，11%，2%，相应的对照组分别为86%，14%，0，二者无统计学差异(P>0.05);东乡族EH组A和C等位基因频率分别为92.5%，7.5%，对照组分别为92.8%，7.2%，两者差异无统计学意义(P>0.05)。汉族EH组AT1R基因型AA、AC、CC分布频率分别为77.8%，20.2%，1%，对照组分别为84%，15.2%，0.7%，两者差异无统计学意义(P>0.05);汉族EH组A和C等位基因频率分别为88.9%，11.1%，相应对照组分别为91.6%，8.4%;两者差异无统计学意义(P>0.05)。

　　2.3 各基因型在EH中的分布

　　AT1R AA型在汉族与东乡族EH组分布频率分别为78.8%，86.7%，东乡EH组高于汉族，二者有统计学差异(P<0.05);AC基因型在汉族EH组中高于东乡族EH组，其分布频率分别为20.2%，11.3%，有统计学差异(P<0.05);CC纯合子在东乡族、汉族EH中的分布频率分别为1%，2%， 统计学上无差异(P>0.05)。

　　2.4 缬沙坦对不同基因型EH患者治疗前后的血压变化

　　缬沙坦治疗组有一例服药后发生不良反应而停止用药，未作统计。AA和AC基因型高血压患者治疗前血压相近，治疗后患者的SBP和DBP分别较治疗前下降9.3 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)，9.7 mm Hg和6.5 mm Hg ，5.4 mm Hg;下降幅度分别为6.85%，7.19%和7.34%，6.04%，均较基础值有明显下降(P<0.05)，但AA和AC型不同基因型之间治疗比较差异无统计学意义(表2)。表2 缬沙坦对不同基因型EH患者治疗前后的血压变化(略)

　　3 讨论

　　AT1R基因已经分离出来，它位于3q22上，全长1 kb，只有一个外显子，无内含子结构，它能编码359个氨基酸，在AT1R基因的编码区未见功能性改变，只有A1166C在EH患者中出现频率差异性，即位于3’端非编码区(3’UTR)，碱基腺嘌呤(A)转变为胞嘧啶(C)所引起的变异[2]。AngⅡ大多数生物作用是通过AT1R介导的，目前关于AT1基因多态性与高血压发病的关系国内外研究结论不一[3]。

　　本研究发现，东乡族、汉族EH患者的A及C等位基因与高血压无关，EH患者与健康人之间A与C等位基因无差异性。日本Ono K 等[4]对1 492例EH患者，2 426例健康人群进行调查，结论认为A和C等位基因与收缩压无关;EH患者与健康人之间C等位基因及其他基因型无差异。这与本研究结论相似。本研究显示东乡族C等位基因频率为7.2%，高于藏族6.1%，彝族3.5%[5]，非洲人2.1%[6];低于日本人10.8%[4]，波兰人20%[7]，意大利人34.6%[8]和澳大利亚人28.6%[9]，东乡族与藏族相近。说明AT1R基因多态性与不同民族有关。

　　本研究提示AT1R基因多态性AC型与汉族EH发生可能有关。AA型可能与东乡族EH发病有关。Liu等[5]研究发现藏族舒张压高的男性人群AA基因型频率为96.3%， 正常人AA基因型频率为87.8%.前者明显高，与本研究结果相一致。说明不同民族EH患者与AT1受体基因有关。

　　根据其发病机制，随机选取60例EH患者使用缬沙坦治疗，实验显示不同基因型的EH患者使用缬沙坦治疗，无论AA基因型还是AC基因型的EH患者降压疗效均显著，但AA与AC基因型之间疗效比较无差异，说明这与是否携带C等位基因无关系，随访期间无心脑血管事件发生，亦安全可靠。孟超等对上海市老年EH患者AT1R基因多态性及AT1受体拮抗剂降压疗效比较，结论与本实验相同。WilkoSpiering等在EH人群进行Ang 输注，发现携带C等位基因患者的肾小球滤过率、肾血管阻力指数可能对更小剂量的外源性AngⅡ敏感性增加，而对AngⅡ的反应性无差别，所以缬沙坦对不同基因型患者的疗效无差别也支持这一观点。

　　【参考文献】

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