子宫内膜腺癌DNA结合抑制因子1的表达及与雌激素受体(ER)α的相关性

　　作者：黄玉秀 郑 秀 林爱武 郭阿芹 作者单位：(福建医科大学附属第一医院妇产科，福建 福州 350005)

　　【摘要】 目的 探讨DNA结合抑制因子1(Id1)在子宫内膜腺癌组织中的表达状态及与雌激素受体(ER)α之间的关系。方法 免疫组化法检测56例子宫内膜腺癌、18例子宫内膜不典型增生、20例正常子宫内膜组织中Id1及ERα蛋白表达。结果 在正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生及子宫内膜癌中Id1表达逐渐增强(P<0.05)，ERα表达则逐渐减少(P<0.05)。Id1蛋白阳性表达与组织分化程度及浸润肌层深度、手术病理分期有关(P<0.05)。ERα阳性表达与浸润肌层深度有关(P<0.05)。Id1高表达患者的5年生存率低，但两组生存率差别无显著性意义(P>0.05)。Id1与ERα表达之间呈正相关(r=0.284 ，P =0.034 )。结论 Id1在子宫内膜癌中存在着过表达,并且可能与ERα协同参与了子宫内膜腺癌的发生发展。

　　【关键词】 DNA结合抑制因子1;子宫内膜肿瘤;雌激素受体;免疫组织化学

　　【Abstract】 Objective To study the expression of inhibitors of DNA binding1 (Id1) in endometrial adenocarcinoma and its correlation with ERα. Methods Id1 and ERα proteins were analyzed using immunohistochemistry in 56 patients with endometrial adenocarcinoma, 20 patients with normal endometria and 18 patients with atypia hyperplasia. Results The level of Id1 expression was found in an increased order, while ERα was decreased from normal endometria to atypia hyperplasia, and then to endometrial adenocarcinoma(all P<0.05).The expression of Id1 was significantly correlated with the histological grade, clinica1 stage and depth of myometrial invasion (P<0.05). ERα expression was significantly correlated with the depth of myometrial invasion (P<0.05). There was no association between the expression of Id1 and survival time (P>0.05). Id1 expression was positively correlated with ERα in endometrial adenocarcinomas(r=0.284, P=0.034).Conclusions The expression of Id1 is upregulated in endometrial adenocarcinoma, and Id1 coexpression with ERαmay take part in the progression of endometrial adenocarcinoma.

　　【Key words】 Inhibitors of DNA binding1;Endometrial adenocarcinoma;Estrogen receptor;Immunohistochemistry

　　DNA结合抑制因子1(inhibitors of DNA binding1，Id1)是上世纪90年代发现的一种分化抑制因子，目前在动物及一些人体标本实验发现其可促进细胞增殖,参与肿瘤血管的生成,促进肿瘤的生长及转移。子宫内膜癌是雌激素依赖性疾病，雌激素的刺激作用主要是通过雌激素受体(ER) 起作用。有关其在子宫内膜癌中的表达尤其是Id1和ERα表达的关系很少报道，两者的关系尚不清楚。本实验检测了子宫内膜腺癌、子宫内膜不典型增生、正常子宫内膜组织中Id1和ERα的表达，初步探讨Id1在子宫内膜癌的发生发展中的意义及与ER之间的作用，为ER家族成员与肿瘤之间关系的研究提供了一个新的切入点及临床治疗提供理论依据。

　　1 资料与方法

　　1.1 临床资料

　　收集本院1999年1月1日至2006年10月31日经手术获取的子宫内膜腺癌标本56例，年龄20～76〔平均(55±12)〕岁。对照组选取同时期手术的子宫内膜不典型增生标本18例，年龄42～68〔平均(51±8)〕岁，因子宫肌瘤行子宫切除术的正常子宫内膜20例，年龄38～59(47±6)岁。所有病例均经病理确诊，均未行放疗、化疗及激素治疗。按照国际妇产科联盟(FIGO)2000年子宫内膜癌手术病理分期。56例子宫内膜腺癌共随访到47例，随访率83.9%，随访时间2～90个月(平均30.2个月)，死亡9例，5年生存率80.9%。

　　1.2 主要试剂

　　Id1兔抗人多克隆抗体(C20，美国Santa Cruz公司)。ERα鼠抗人单克隆抗体(克隆号SP1，美国Neomarker公司)。二抗及DAB显色剂购自迈新公司。石蜡切片为3 μm连续切片，采用二步法免疫组化染色(EnVision System)测定Id1，工作浓度1∶100。免疫组织化学(SP)法测定ERα，工作浓度1∶400。用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作阴性对照,以已知的子宫内膜癌阳性片作阳性对照。具体步骤按说明书进行。

　　1.3 免疫组化结果判断

　　Id1阳性染色位于子宫内膜腺体细胞胞浆，表达水平以阳性细胞显色强度为标准，进行图像定量分析阳性染色区的光密度值，以平均光密度值的大小来表示Id1表达水平的高低，数值越大阳性表达越强。ERα阳性染色位于胞核,表达水平以细胞染色强度和细胞阳性百分率得分之和进行半定量判定。然后将两种评分结合起来分为4级:无论染色强度如何,细胞阳性率≤10%为阴性;2～3分为弱阳性(+);4～5分为中度阳性();6～7分为强阳性()。

　　1.4 统计学分析

　　应用SPSS11.5统计软件进行分析，定量资料多组间比较采用单因素方差分析(AVONA)，两组间比较采用t检验，计数资料采用χ2检验,指标间相关性分析采用线性相关。生存情况采用Log rank检验。

　　2 结 果

　　2.1 各组组织中Id1、ERα的表达比较

　　Id1从正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生到子宫内膜癌组织中表达逐渐升高。ERα表达阳性率呈逐渐下降趋势。Id1在子宫内膜癌中均明显高于其他两组(F=60.768 1，P<0.05);ERα在子宫内膜癌中均明显低于其他两组(χ2=26.271,P=0.000)。见表1。表1 Id1、ERα蛋白各类子宫内膜组织中的表达

　　2.2 Id1、ERα表达与子宫内膜癌临床病理学特征的关系

　　Id1随着组织学分级(F=23.324)、肌层浸润深度(t=2.296)、手术病理分期(t=3.371 4)增加阳性表达增强(均为P<0.05)。ERα在随着肌层浸润深度、组织学分级、手术病理分期增加阳性表达率逐渐下降,但统计学分析差异无显著性意义(P>0.05)。仅在肌层浸润深度中ERα表达差异有显著性意义(χ2=8.936，P=0.003)。见表2。表2 Id1、 ERα表达与子宫内膜癌临床病理学特征的关系

　　2.3 子宫内膜癌中Id1与ERα蛋白表达的关系

　　Id1在ER阳性组的表达水平高于其在ER阴性组的表达(0.131 6±0.040 00 vs 0.116 0±0.013 16，t=2.155，P=0.036)，Id1与ERα表达呈正相关性(r=0.284，P=0.034)。

　　2.4 子宫内膜癌组织中Id1表达与患者生存时间的关系

　　将子宫内膜癌组织中Id1表达以中位数分高低两组。两组五年生存率分别为83.3%(18/23)、78.3%(20/24)，两者比较差别无统计学意义(P>0.05)。

　　3 讨 论

　　Id1 属于螺旋环螺旋(HLH)转录因子，缺乏DNA结合域，可与一些转录因子(主要是bHLH蛋白)形成非活性异二聚体，使其不能与DNA上的E基序结合，从而负向调控细胞分化，阻止细胞正常分化。在哺乳动物细胞中Id蛋白由Id1～4四个亚型构成，其功能不尽相同。Id基因具有癌基因特性，Id1在前列腺癌、食管鳞状上皮癌和子宫内膜癌等肿瘤中有过表达〔1～4〕。本研究提示Id1与子宫内膜癌的发生发展有联系。研究发现，Id1的表达水平与肿瘤侵袭型程度和不良的临床预后相关〔1，2，4〕，但不是所有的研究结果都是这样，Lee等〔5〕报道Id1表达与胃癌的预后存在无明显相关性。也有报道，只有Id2而非Id1～3三个亚型与生存时间有关〔6〕。本研究中Id1表达与患者生存时间无关，可能与Id蛋白表达存在组织特异性以及Id蛋白在各种组织的发育过程中发挥不同作用有关，需要扩大样本以及延长随访时间进一步观察。

　　子宫内膜癌的确切病因尚不清楚,多数学者认为,雌激素与子宫内膜癌的发生、发展和临床治疗有密切联系。而雌激素的刺激作用主要是通过ER起作用的。本实验结果表明从正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生到子宫内膜癌并且随着组织恶性程度的增加，ERα蛋白表达逐渐下降,肿瘤逐渐丧失了ERα表达的能力,也丧失了对激素的识别功能,体现了肿瘤细胞的去分化特征，然而ERα的存在说明肿瘤细胞的功能尚未完全丧失，仍存在对性激素的依赖性，为内分泌治疗提供必要的基础和获得疗效的保证。

　　早期Lin等〔7〕在ER阳性的乳腺癌细胞系(MCF7)和(T47D)证明了雌激素可以通过ER诱导Id1的表达,进而促进了细胞的增殖，Id1可能是雌激素作用的下游靶基因。Lee〔8〕在小鼠子宫中发现雌激素诱导Id1 的表达可以被ER拮抗剂ICI 182,780下调,进一步证实雌激素可通过ER途径诱导Id1 表达。但在人体乳腺癌肿瘤标本的研究中认为Id1的表达并不完全依赖于激素受体，与ER的状态无关〔9〕。本研究显示Id1与ERα的表达呈正相关，提示Id1表达可能与ER的存在状态有关,雌激素可能通过ER参与对Id1表达的调控，可能通过Id1介导发挥对细胞的作用，雌激素、ERα、Id1共同影响子宫内膜癌的发生发展和转移。研究结果的不同可能与不同组织的细胞特异性有关。

　　Id1随肿瘤的进展阳性表达率逐渐增加而ERα表达水平下调，可以认为ERα在肿瘤发展中逐渐缺失可能是子宫内膜癌向去分化方向发展的总体表象的一部分，只是肿瘤发展过程中的一个表现。说明ERα表达的缺失是肿瘤发展的早期事件，这时Id1与ERα协同作用促进肿瘤的发生发展，肿瘤发展到一定程度时雌激素或ER就不再发挥作用，随着肿瘤的进展野生型ER逐渐丧失其作用，而变异型ER则以非激素依赖性的形式〔10〕、Id1也通过其癌基因特点促进子宫内膜癌的发展。

　　【参考文献】

　　1 Forootan SS，Wong YC，Dodson A,et al.Increased Id1 expression is significantly associated with poor survival of patients with prostate cancer〔J〕. Hum Pathol，2007;38(19):13219.

　　2 Yuen HF，Chan YP，Chan KK,et al.Id1 and Id2 are markers for metastasis and prognosis in oesophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Br J Cancer，2007;97(10):140915.

　　3 Takai N，Miyazaki T，Fujisawa K,et al.Id1 expression is associated with histological grade and invasive behavior in endometrial carcinoma〔J〕. Cancer Lett，2001;165(2):18593.

　　4 李志雄,林杰成,林文霖，等.Id1 PTEN表达与食管鳞癌血管新生及预后关系的研究〔J〕.中国肿瘤临床,2008;35(22):12815.

　　5 Lee KT，Lee YW，Lee JK,et al.Overexpression of Id1 is significantly associated with tumour angiogenesis in human pancreas cancers〔J〕.Br J Cancer，2004;90(6):1198203.

　　6 Kamalian L，Gosney JR，Forootan SS,et al.Increased expression of Id family proteins in small cell lung cancer and its prognostic significance〔J〕.Clin Cancer Res，2008;14(8):231825.

　　7 Lin CQ，Singh J，Murata K,et al.A role for Id1 in the aggressive phenotype and steroid hormone response of human breast cancer cells〔J〕. Cancer Res，2000;60(5):133240.

　　8 Lee TK，Poon RT，Yuen AP,et al.Regulation of angiogenesis by Id1 through hypoxiainducible factor1alphamediated vascular endothelial growth factor upregulation in hepatocellular carcinoma〔J〕.Clin Cancer Res，2006;12(23):69109.

　　9 Jang KS，Han HX，Paik SS,et al.Id1 overexpression in invasive ductal carcinoma cells is significantly associated with intratumoral microvessel density in ERnegative/nodepositive breast cancer〔J〕.Cancer Lett，2006;244(2):20310.

　　10 李 奎,温宏武,廖秦平.子宫内膜癌中雌激素受体亚型α第五外显子变异体的表达〔J〕.现代妇产科进展,2005;14(6):4514.