HC-2检测技术在宫颈病变筛查中的应用
发表时间：2012-03-31 浏览次数：464次
作者：周琦 张蔚 易跃雄 郭婉茹 钟亚娟 张文婷 李兰玉 作者单位：430060 武汉大学人民医院妇1科
【关键词】 HC-2检测技术 宫颈病变 筛查
宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，并且其发病率呈逐年上升的趋势。目前国内外的研究普遍认为人乳头瘤病毒(HPV)的持续感染是引起宫颈癌前病变和宫颈癌的必要条件[1-2]。因此，及早检测出HPV病毒的感染并及早治疗对降低宫颈癌的发生有重要的作用。目前常用的HPV检测的方法有PCR、杂交捕获法、原位杂交及斑点印记法等[3]。本研究采用HC-2的方法检测宫颈病变患者高危型HPV感染的情况，并且探讨其在宫颈病变中筛查的价值。
一、资料与方法
1. 一般资料：收集2009年5月来武汉大学人民医院妇产科门诊进行健康体检，因妇科检查时发现宫颈糜烂、宫颈肥大、接触性出血等原因而行液基细胞学检查(TCT)的287例患者，年龄20～55岁，平均(38±3.4)岁，受检者无子宫切除和宫颈手术史、无盆腔放射治疗史且目前无妊娠。
2. 细胞学检查：采用宫颈细胞学TBS分级系统进行细胞学的诊断[4]：保存完好的上皮细胞覆盖率>10%为满意涂片。诊断包括：正常或良性反应改变(WNL);未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS);低度鳞状上皮内病变(LSIL);高度鳞状上皮内病变(HSIL);鳞状细胞癌(SCC);腺癌(AC)。TBS报告正常或炎症为细胞学阴性，ASCUS及以上病变为细胞学阳性。
3. 阴道镜及病理学检查：在阴道镜下使用碘染色的方法取宫颈病变部位的组织，用4%多聚甲醛固定标本，石蜡包埋后切片，切片的厚度为3 μm。病理诊断由至少两位病理科的医师镜下观察确定，结果为炎症、宫颈癌前病变(CIN)、宫颈癌，见到挖空细胞诊断为HPV感染。
4. HC-2检测方法：首先将宫颈口的分泌物擦拭干净，然后采用配套的宫颈采样器在宫颈口沿同一方向旋转3～5圈，立即放入保存液中保存。之后的操作步骤严格按照美国Digene公司的HC-2检测技术进行，主要步骤有细胞裂解、杂交、捕获、信号放大及检测。HC-2可一次性检测13种型别的高危型HPV(16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68)。
5. 统计学分析：采用SPSS 13.0软件进行数据处理和统计分析。率的比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
二、结果
1. HC-2检测结果：287例患者检测出有HPV-DNA者150例(52.26%)。其中在宫颈癌患者中HPV感染率为93.33%，明显高于慢性宫颈炎(32.18%)、CIN(81.63%)，比较三者之间差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。表1 HC-2检测13种高危型HPV感染情况
2. 病理学检测结果：287例标本中，113例(39.37%)标本有挖空细胞的出现。其中在宫颈癌患者中HPV感染率为86.67%，明显高于慢性宫颈炎(21.26%)、CIN(64.29%)，比较三者之间差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。宫颈组织HE染色病理学检测结果见图1～3。
3. 比较病理学和HC-2检测中HPV阳性率的差别：使用χ2检验，二者之间差异有统计学意义(χ2=4.803，P<0.05)，见表3。 表2 病理学检测HPV感染情况表3 HC-2检测结果与病理学检测结果的比较
三、讨论
新近的研究结果证实HPV为宫颈癌的主要危险因素[1]，且病毒的载量和型别不同与宫颈癌发生有关，尤其是高危型HPV 感染者[5-6]。HPV-DNA 的出现先于病理学上组织的改变，而且HPV 感染后一般在12～18 个月会自行消除，但这个时候病毒可能只是处在一个静息期，另外之前感染过HPV 会再次感染，所以HPV-DNA检测作为宫颈病变筛查的一种重要手段受到肿瘤工作者的重视而应用于临床。HC-2 良好的阴阳性预测值对于及早发现并治疗宫颈癌有着极其重要的临床意义。该技术采用杂交捕获信号放大的原理，可一次检测13种高危型HPV，具有操作简便、稳定可靠、灵敏度高、干扰因素少等优点，适用于大范围人群的筛查[7]。
病理学诊断HPV感染是根据显微镜下见到挖空细胞，主要表现为：在棘层上中部可观察到散在或者是成片状的细胞质呈空泡状，细胞核可表现为正常、增大或不典型。有些还可伴鳞状上皮角延伸、乳头瘤样增生、表皮细胞的角化或过度角化等[8]。这种方法受到检查者主观意识的影响，而且在取材和制片的过程中，可能存在漏诊的情况，降低检出率。另外，此方法诊断不能判定是哪种亚型的HPV感染。
本实验使用两种方法检测HPV感染，结果均显示，随着病变的加重，HPV的感染率呈上升趋势，并且各组之间差异均有统计学意义(P<0.05)，表明HPV的感染与宫颈病变的程度是密切相关的，与之前的研究结论是一致的。采用HC-2法检测287例宫颈病变的患者高危型HPV的感染率，其阳性检出率为52.26%，病理学检测结果为39.37%，比较二者之间差异有统计学意义(P<0.05)，说明HC-2法在HPV感染的诊断中具有较高的阳性率，而且其容易操作，稳定且不易受到主观意识的影响，是宫颈病变筛查的有效手段。
(本文图片见光盘)
【参考文献】
[1] 张晓金，归绥琪.宫颈癌发病机制的研究进展.中国妇幼健康研究，2008,19(1)：56-59.
[2] Walboomers JM，Jacobs MV，Manos MM，et al.Human papillomavims is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide.J Pathol,1999,189(1)：12-19.10451482
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