细胞凋亡与子宫内膜异位症的相关研究
发表时间：2011-03-25 浏览次数：416次
作者：郭慧芳 作者单位：(山西省人民医院，山西 太原 030012)
【摘要】目的：通过检测正常子宫内膜和子宫内膜异位症的细胞凋亡率，以探讨细胞凋亡在子宫内膜异位症发生发展中的作用，为临床诊治提供实验数据和理论依据。方法：应用TUNEL法测细胞凋亡率。结果：内异症(EM)各组的凋亡率明显低于正常子宫内膜(P<0.01;P<0.01),EM异位组内膜凋亡率明显低于在位内膜(P<0.05). 结论：患者子宫内膜中凋亡率的改变,在子宫内膜异位症的发生发展中起重要作用,为内异症的治疗提供了新思路,改变内膜的抵制凋亡状态,将成为临床治疗该病的新途径。
【关键词】 子宫内膜异位症;细胞凋亡;相关研究
子宫内膜异位症(Endometriosis，EM)是指具有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔被覆黏膜以外的身体其他部位(不包括子宫肌层)，在卵巢内分泌影响下，这些异位的子宫内膜组织呈周期性改变，引起所在部位的一系列病变[1]。
细胞凋亡(Apoptosis)又称程序性细胞死亡，是指有核细胞在一定条件下通过启动内部机制，经过一系列的细胞变性，最终发生死亡的过程[2]。正常子宫内膜同样存在凋亡的调节，本实验通过对子宫内膜凋亡率的测定探讨细胞凋亡与内异症的关系，为内异症的临床诊断和治疗提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 病例选择
选自2005年10月至2007年12月间就诊于太原市中心医院，太原市第二人民医院，山西省人民医院的进行腹腔镜治疗或开腹治疗者共165例。其中子宫内膜异位症患者105例，均经术后病理诊断证实。对照组60例为同期患子宫肌瘤等其他良性疾病行腹腔镜检查，证实盆腔无异常者。术前三个月无激素用药史。
1.2 标本采集与处理
取上述患者的子宫内膜组织，用中性福尔马林固定后，经脱水透明最终制成蜡块于4℃保存。
1.3 试剂
细胞凋亡检测盒(TUNEL法)购武汉博士德公司。
1.4 实验方法
TUNEL法测子宫内膜细胞的凋亡率：将蜡块制成厚7 um的切片,然后按照试剂盒说明进行染色。结果判断：细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，即凋亡的细胞。计数5个高倍视野内膜组织中的细胞总数和凋亡阳性标记的细胞数，计算百分率。
2 结果
镜下观察：有部分子宫内膜细胞呈现凋亡,其特征是:核固缩,细胞核被黄染，2/3以上为密度较高的棕黄色颗粒。TUNEL法测得的各组子宫内膜的凋亡率(见表1)。表1 各组子宫内膜的凋亡率(略)注：*与正常对照组相比差异有显著性(P<0.01)，#与EM异位组相比差异有显著 (P<0.05)。
结果显示：内异症(EM)各组的凋亡率明显低于正常子宫内膜(P<0.01;P<0.01),EM异位组内膜凋亡率明显低于在位内膜(P<0.05)。
镜下观察：有部分子宫内膜细胞呈现凋亡,其特征是:核固缩,细胞核被黄染，2/3以上为密度较高的棕黄色颗粒。
3 讨论
子宫内膜异位症是一种常见良性却有恶性行为的妇科疾病，该病呈上升趋势而病因不明。Sampson提出经血逆流的学说，经过多年的临床观察研究，认为经血逆流这一现象在育龄妇女非常普遍，但是内异症发病只占其中一小部分。可见，经血逆流只是内异症发病的一种诱因，脱落并逆流入腹腔盆腔的内膜细胞必须克服程序性细胞凋亡这一自我监视作用，才有可能在其他部位存活并继续生长。
3.1 异位内膜细胞凋亡指数降低的意义
细胞凋亡是真核生物有核细胞死亡的一种方式，是受高度调节的生理性死亡过程[3]。细胞以凋亡方式自杀，对机体自身稳定起积极作用，若此环节发生异常，则会出现细胞堆积而引起疾病甚至肿瘤的发生[4]。细胞的检测方法很多，本次实验所用的TUNEL法(原位末端标记法)是对凋亡早期形成的DNA断端的3-OH末端进行标记，此方法的优点是可在原位对凋亡细胞进行检测，既有较高的敏感性，又可了解凋亡细胞与周围组织的关系，maclaren[5]等推测异位内膜细胞在盆腔内得以继续存活及种植，很可能与其对凋亡的抵抗力增强有关。Gebel等通过对16例内异症病人正位及异位内膜悬浮液中单个细胞的凋亡进行检测，异位内膜凋亡率显著低于正位内膜。本实验研究结果也表明，异位内膜凋亡率较在位内膜凋亡率低，这与geble的研究报道相符，同时本研究还比较了在位内膜与正常妇女的子宫内膜凋亡率，得出在位内膜凋亡率低于正常子宫内膜。由此可以认为，由于异位内膜的抗凋亡性较强，使其在腹腔及盆腔内的生存时间延长，加之异位细胞又具有粘附性强及侵袭性生长的特点[9]促成其在腹腔内及盆腔内种植与存活，并具有肿瘤样增殖特性，使内异症得以发生发展。
3.2 凋亡基因的改变对内异症治疗的意义
临床上应用很多药物来治疗内异症，主要包括：孕激素周期疗法、假孕疗法、假绝经疗法、内美通疗法、米非司酮疗法、促性腺激素释放激素激动剂疗法等。目前最新的一类药物是GnRH-a(促性腺激素释放激素类似物)，如：曲谱瑞林、戈舍瑞林、醋酸亮内瑞林等。Meresman等将醋酸亮内瑞林(100ng/ml)与内异症和正常妇女的子宫内膜细胞共同培养，可提高内膜细胞的凋亡指数，降低细胞增殖;Imai A[5]等研究也证明GnRH-a可以逆转这种细胞凋亡的异常。子宫内膜异位症患者的异位和在位内膜抗凋亡基因表达增强，促凋亡基因表达明显降低，致使内异症患者子宫内膜的凋亡率下降，抗凋亡能力增强，故通过促性腺激素释放激素类似物来诱导异位内膜细胞的凋亡，降低子宫内膜的抗凋亡能力，使脱落的子宫内膜细胞在异位的生存能力减弱，从而治疗内异症。
【参考文献】
[1]李梅生,谭布珍.子宫内膜异位症现代治疗[M].人民军医出版社, 2003.
[2]江静,吴瑞芳,张以文,等.子宫内膜异位症患者在位子宫内膜的研究[M].中华妇产科杂志,2000,35(6):374-375.
[3]谢胜兰,韩 萍.细胞凋亡与子宫内膜异位症关系的研究进展[M].中国煤炭工业医学杂志,2007(7).
[4]宋影,刘雨生. 细胞凋亡与子宫内膜异位症[M].国外医学(计划生育分册),2006(5).
[5]Mclaren J,prentice A,chamock-jones DS,et al.immunolocalization of the apoptosis regulating protein bcl-2 and bax in human endometrium and isolated peritoneal fluid macrophages in endometrium[J].human repro,1997,12:146-152.
