NESI基因及其在卵巢癌中的研究进展

　　作者：刘云春1 岳天孚2 作者单位：.河北北方学院附属第一医院妇产科，河北 张家口 075000;2.天津医科大学总医院，天津 300000

　　【关键词】 NESI基因 卵巢癌

　　正常上皮细胞特异性1(normal epithelial cellspecific1，NESI)基因是1996年Liu等[1]用差异杂交法从正常乳腺细胞株76N及经放射照射变异细胞株76R3中分离出的新基因。基因在RNA水平表达丢失，有别于经典的抑癌基因。最新研究表明，NESI基因在卵巢癌中具有标志物的作用，本文综述如下。

　　1 基因定位及结构

　　NESI基因[2]位于染色19q133，长55kb，有6个外显子(其中1个未被翻译)和位于编码外显子之间的5个完全保守的内含子，其方式为ⅠⅡⅠ0。由于其基因产物序列与人类激肽释放酶家族的其他成员如PSA(前列腺特异抗原)、胰蛋白酶原、组织纤维蛋白溶酶原激活物有着50%~60%的同源性,它又位于19号染色体q133激肽释放酶位点内，因此NESI属于人激肽释放酶家族的成员，又被命名为人激肽释放酶10(human kallikrein10)[3,4]。NESI基因编码276个氨基酸，分子量约为3014kD，NESI保留了丝氨酸蛋白酶的重要结构特征，并且其重要催化位点的氨基酸残基与丝氨酸蛋白酶有95%的一致性[1]。

　　2 分布及功能

　　NESI分布广泛,在大多数正常组织中有其蛋白的表达，无细胞特异性。Petraki等[5]报道，运用免疫组化方法NESI蛋白在许多组织器官中表达，特别是腺体的上皮细胞是其表达的主要位点，具代表性的器官有乳腺、前列腺、甲状腺、睾丸、卵巢、胃肠道、支气管、液腺、胆道、胆囊。在脉络膜丛上皮、周围神经和一些神经内分泌器官也有表达。到目前为止NESI的具体功能还不是很清楚。虽然蛋白序列类似于丝氨酸蛋白酶，但大量实验显示，NESI不具有蛋白酶功能，而具有潜在的分化功能。NESI在乳腺癌及前列腺癌细胞株表达下调，Goyal等[6]将NESI基因转染到恶性程度高的乳腺细胞株MDAMB231后，可降低其恶性表型,将经NESI基因转染后的细胞接种至裸鼠体内，能够明显抑制肿瘤的生长，这些结果表明NESI可能参与了细胞生长调控的某些途径,可能通过产生抑制因子或终止激活因子的方式抑制肿瘤的生长。

　　3 作用机制

　　抑癌基因多数是通过基因及其调控区域的缺失、突变或重排，致其表达失活而致癌。但是目前尚未发现在卵巢癌有体细胞突变导致的NESI基因失活。DNA甲基化在基因表达调控、分化发育、细胞增殖、肿瘤的发生发展等方面都起着重要作用。DNA甲基化[7]通常是指CpG二核苷酸中的胞嘧啶第5位碳原子被甲基化，富含CpG的顺序称为CpG岛，长约05~20kb。CpG岛正常情况下是非甲基化的，位于结构基因的5’端(启动子区域)，有时也可能出现于外显子区。NESI基因在正常乳腺、前列腺、卵巢细胞高表达，然而在癌细胞株的表达下调。Sidiropoulosd等[8]近来研究发现，乳腺、卵巢肿瘤5aza2’Dc后，NESI基因mRNA水平上调和其蛋白浓度增加。亚硫酸钠盐处理DNA后的基因测序表明NESI基因的CpG位点外显子3高度甲基化。外显子3超甲基化在原发性卵巢癌亦被检到。这些研究表明NESI基因的CpG岛超甲基化导致了其肿瘤特异性表达缺失，但不能揭示其在所有细胞株和组织中的表达方式。Li等[7]研究发现NESI外显子3为CpG含量丰富区。NESI表达缺失的肿瘤细胞经去甲基化药物处理可使其重新表达，提示CpG甲基化是NESI肿瘤特异性表达丢失的基础。

　　4 表达调控NESI的表达

　　是在转录和翻译水平受甾体激素的调控。研究表明NESI的表达主要受雌激素、雄激素和孕激素的作用而使表达上调。NESI受激素表达调控是通过相应受体来实现的，激素受体复合物与调控基因启动子或增强子区域的DNA顺式元件直接相互作用调控基因表达。Luo等[9]报道，时序检测研究显示乳腺癌细胞株BT47在受到性激素刺激后1d NESI蛋白表达开始上调，并且可以持续7d，用雌激素和孕激素拮抗ICL181,180RU56,187和米非司酮可分别下调由雌激素和孕激素引起的mRNA高水平。研究表明[7]NESI启动子区域含有AP1、SP1结合位点和cAMP应答因子序列，提示在NESI基因转录调控过程中可能有其他信号转导通路参与。这些结构是NESI基因特殊表达调节的分子基础。

　　5 在卵巢癌中的表达

　　NESI在卵巢高表达，由于NESI是分泌型蛋白，推测在卵巢癌的表达可能发生变化并且能成为新的卵巢癌肿瘤标志物，研究发现，NESI在卵巢癌中明显高表达，并且与预后差相关。Shvartsman等[11]研究显示，35例原发性浆液性卵巢癌患者32例NESI高表达(91.4%)，15例非浆液性卵巢癌患者11例NESI高表达(73.3%)，11例原发性腹膜癌患者8例NESI高表达(72.7%)。总之，848%的上皮性卵巢癌和腹膜癌高度表达NESI。结果表明，NESI在卵巢癌中表达上调与卵巢癌的病情分期和预后具有强相关性，提示NESI可成为卵巢癌诊断和预后监测的血清学指标。Luo等[12]用免疫测定法定量检测97例正常妇女、141里妇科良性疾病和146粒卵巢癌患者血清NESI的浓度。结果显示，正常和良性组的血清浓度相似，但是卵巢癌组术前血清NESI浓度明显升高。当选择700ng/L为临界值时(诊断的特异性90%)，卵巢癌诊断的敏感性为54%。在CA125阴性(CA125<23Ku/L)的卵巢癌患者中，约35%为NESI阳性。研究还表明CA125在妇科良性疾病组和卵巢癌组均升高，而NESI仅在卵巢癌组中升高。在Ⅰ/Ⅱ其卵巢癌中，与单用CA125相比较，将NESI与CA125联合检测，可使卵巢癌诊断的敏感度提高21%、特异度达到90%。卵巢癌患者组织及血清中高浓度NESI也与卵巢癌的组织学类型、临床分期、病理分级、手术满意程度以及化疗敏感程度等明显相关,在单变量回归分析中，高血清NESI浓度与卵巢癌的复发和死亡相关,KaPlanMeier生存曲线表明相似的结果。Luo等[13]也首次对374例不同肿瘤患者血清中的NESI水平进行定性分析，结果显示56%的卵巢癌患者和15%胃肠道肿瘤中的浓度明显升高，但其阈值不同，且其他类型的肿瘤和正常人则不升高。并与CA125的升高无相关性。CA125作为卵巢癌的早期诊断指标，特异性差，敏感性低，且在良性妇科肿瘤肿瘤及其他肿瘤中也有表达。NESI血清浓度与CA125无关，可辅助CA125作为卵巢癌早期诊断的工具[14,15]。

　　6 作为卵巢癌标志物的应用

　　卵巢癌的发生系多因素、多阶段、多基因异常累积的过程。CpG岛异常甲基化在许多肿瘤的发生过程中是一个频发的早期事件，NESI基因甲基化与卵巢癌的发生相关，其异常甲基化可为卵巢癌的早期诊断提供重要的信息。甲基化检测技术具有高敏感性和特异性，作为一种新的分子生物学手段将会广泛应用于临床。NESI作为一种分泌性蛋白，Luo等[16]报道，首次利用免疫荧光测量法在血清、乳汁、精液、脑脊液、羊水等体液检测到NESI，免疫荧光测量法是一种高敏感性和特异性的定量检测法，使其作为一种肿瘤标志物成为可能。在目前的卵巢癌肿瘤标志物研究中，NESI高度特异性及敏感性明显优于其他标志物，在卵巢癌的早期诊断给预后监测的方面有着广阔的前景。

　　7 展望

　　卵巢癌是最致命的妇科恶性肿瘤，由于不能很好的早期诊断，使患者的生存率低下。大多数病人确诊已Ⅲ/Ⅳ期，使患者的5年存活率仅为25%，但若为Ⅰ/Ⅱ期的患者，存活率可以达到90%。CA125于20年前被发现，作为卵巢癌标志物已广泛使用。但其敏感度和特异度较低，因此急需新的卵巢癌肿瘤标志物。NESI作为一种上皮细胞表达的抑癌基因，其在肿瘤发生、发展和治疗方面的作用正不断被发现，对于机体生长的调控作用也开始显露出来。但对NESI作用的机制目还不清楚，NESI基因在卵巢癌的诊断、治疗及预后等方面的作用还有待于进一步的研究。

　　【参考文献】

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