乙酰肝素酶在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

　　作者：薛瑞娟，杨华，薛晓萍，杨婷，刘新玉 作者单位：1. 西安交通大学医学院第二附属医院妇产科，陕西西安 710004;2. 西安财经学院，陕西西安 710061

　　【摘要】目的 研究乙酰肝素酶在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化SP法检测43例子宫内膜癌组织、31例子宫内膜增生症组织及20例正常子宫内膜组织中乙酰肝素酶蛋白的表达。结果 乙酰肝素酶在正常子宫内膜组织、增生症组织及子宫内膜癌中的表达呈上升趋势，3组间表达有显著性差异(P<0.01)。在子宫内膜癌中，乙酰肝素酶表达与手术病理分期(FIGO)(P<0.05)、组织病理学分级(P<0.05)和肌层浸润程度(P<0.01)具有明显相关性。结论 乙酰肝素酶可能与子宫内膜癌的发生发展有关，有望作为判断子宫内膜癌生物学行为和预后的参考指标。

　　【关键词】 子宫内膜癌;免疫组化;乙酰肝素酶

　　Expression of heparanase in endometrial carcinoma

　　and its clinical significance

　　Xue Ruijuan, Yang Hua, Xue Xiaoping, Yang Ting, Liu Xinyu

　　(1. Department of Gynecology and Obstetrics, the Second Affiliated Hospital,Medical School of Xian Jiaotong University, Xian 710004; 2. Xian University of Finance and Economics, Xian 710061, China)

　　ABSTRACT: Objective To study the expression and clinical significance of heparanase in endometrial carcinoma. Methods Altogether 43 cases of endometrial carcinoma, 31 cases of endometrial hyperplasia and 20 cases of normal endometrium were detected for the expression of heparanase by means of immunohistochemical SP. Results The heparanase expression showed an ascending tendency, with significant differences among normal endometrium, endometrial hyperplasia and endometrial carcinoma groups (P<0.01). In endometrial carcinoma, the expression of heparanase was significantly associated with FIGO stage (P<0.05), histological grade (P<0.05), and myometrium invasion (P<0.01). Conclusion Heparanase may play a role in endometrial carcinoma in regulation of tumorigenesis and progression, and may be used as a useful marker of the biological behavior of endometrial carcinoma and as a prognosis factor for patients with endometrial carcinoma.

　　KEY WORDS: endometrial carcinoma; immunohistochemistry; heparanase

　　子宫内膜癌(endometrial carcinoma, EC)是妇女常见的恶性肿瘤之一，占女性生殖道恶性肿瘤20%-30%。近年来其发生呈年轻化趋势[1]。肿瘤细胞与细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的黏附性及向基质侵袭是肿瘤发生转移的首要环节，也是肿瘤转移的重要条件。乙酰肝素酶(heparanase, Hpa)是目前在哺乳动物体内发现的唯一一种能切割细胞外基质和基底膜中硫酸乙酰肝素多聚糖蛋白(heparan sulfate proteoglycans, HSPG)多糖侧链硫酸乙酰肝素(heparan sulfate, HS)的葡萄糖醛酸内切酶[2]，在肿瘤浸润和转移中起重要作用。本实验通过对子宫内膜癌组织中Hpa的表达进行检测和分析，从而初步探讨Hpa在子宫内膜癌发生发展中的作用。

　　1 材料与方法

　　1.1 病例和标本

　　从第四军医大学西京医院2006年1月1日至2006年12月31日存档蜡块标本中，随机抽取43例子宫内膜癌和31例子宫内膜增生症组织，所有患者术前均未行放射治疗、化疗及内分泌药物治疗。手术病理分期采用国际妇产科联盟(FIGO)2000年制订的标准，43例子宫内膜癌中Ⅰ期22例，Ⅱ-Ⅳ期21例。病理分级为G1 20例，G2-G3 23例。按肌层浸润深度分类，无浸润12例，侵及肌层浅部者14例，侵及肌层深部者17例。另选取20例正常子宫内膜组织作为对照，来自西安交通大学医学院第二附属医院妇产科临床取材制作的石蜡切片。3组平均年龄分别为(55.3±11.4)岁、(46.9±10.8)岁和(46.4±6.7)岁。

　　1.2 方法

　　所有标本均经40g/L的甲醛固定，常规石蜡包埋，切片厚度为4μm，贴附于经多聚赖氨酸处理的防脱片上，60℃恒温箱中烘烤过夜。兔抗人Hpa多克隆抗体(A00078)购自美国Gen Script公司，SP试剂盒和DAB显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。Hpa多克隆抗体工作浓度为1∶100。具体操作步骤严格按说明书进行。用已知的阳性切片作阳性对照，磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。

　　1.3 结果判断

　　以细胞质和(或)细胞膜中出现棕黄色颗粒为阳性细胞。根据染色强度及阳性细胞百分率进行综合评定。染色强度以不着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分;阳性细胞百分率：<5%为1分，5%-25%为2分，26%-50%为3分，>50%为4分。将每张切片染色强度与阳性细胞百分率得分相乘的积为其最后得分。0-1分为阴性(-)，2-3分为弱阳性(+)，4-6分为中等阳性()，>6分为强阳性()，(+)-()均为阳性。

　　1.4 统计学方法

　　采用SPSS11.5统计学软件采用χ2 检验，Fishers确切概率法和非参数KruskalWsllis H检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 不同子宫内膜组织中Hpa蛋白的表达

　　免疫组化结果显示，Hpa蛋白阳性染色主要定位于肿瘤细胞胞质内，部分血管内皮细胞内也有表达，间质中也偶见表达，呈棕黄色或棕褐色(图1)。在正常子宫内膜、增生性子宫内膜与子宫内膜癌组织比较，Hpa蛋白的阳性表达率及表达强度升高，具有显著性差异(P<0.01);正常子宫内膜与增生性子宫内膜间Hpa的表达无显著性差异(P>0.05)，子宫内膜癌组织高于增生性子宫内膜及正常子宫内膜Hpa的表达，均有显著性差异(P<0.01，表1)。表1 Hpa在正常子宫内膜、增生症子宫内膜及子宫内膜癌组织中的表达(略)

　　2.2 Hpa蛋白的表达与各临床病理参数的关系

　　Hpa在Ⅱ-Ⅳ期子宫内膜癌组织中表达明显高于Ⅰ期患者(χ2=4.715, P<0.05);组织病理学分级G2-G3级子宫内膜癌组织中Hpa表达明显高于G1级患者(χ2=6.203, P<0.05);随肌层浸润程度的加深Hpa表达逐渐增强，差异有统计学意义(χ2=15.018, P<0.01)，有深肌层浸润子宫内膜癌组织Hpa的表达明显高于无肌层浸润者(P<0.01，表2)。表2 Hpa表达与不同组织病理学参数的关系(略)

　　3 讨论

　　近年来，在全世界范围内子宫内膜癌的发病率均有上升趋势，近10-20年中子宫内膜癌发生率约为上世纪70年代早期的2倍，并且发病具有年轻化趋势。虽然，在过去10年里，国内外妇科肿瘤学者做了大量的工作，但子宫内膜癌患者总的生存率并未得到改善，即使是早期子宫内膜癌，仍有10%-20%的复发率，并最终死于该病。因此，寻找具有临床意义的预后高危因素，在术前、术中和术后区分出有复发可能的患者，为子宫内膜癌患者提供更为理想化、个体化的治疗，对提高子宫内膜癌患者生存率、改善预后具有重要意义。

　　Hpa与肿瘤细胞生长和转移密切相关，广泛存在于细胞外基质中，它可切断细胞外基质中结合在HSPG上的侧链，使硫酸乙酰肝素降解，并释放活性分子，导致网络状结构分解，基质正常的稳定结构破坏，使肿瘤组织易于扩散和转移[3]。到目前为止，已发现在人类头颈部肿瘤、胰腺肿瘤、肝细胞癌、食道癌等组织及人类培养的肿瘤细胞中Hpa表达上调并且与肿瘤的浸润转移呈明显的正相关[4]。

　　本研究结果显示，在正常子宫内膜、增生性子宫内膜及子宫内膜癌组织中，Hpa蛋白的阳性表达率及表达强度逐渐升高，子宫内膜癌组织中Hpa表达明显高于子宫内膜增生症组织和正常子宫内膜组织，具有显著性差异。Hpa蛋白的表达与子宫内膜癌手术病理分期、组织学分级及肿瘤肌层浸润程度均有明显的相关性。Watanabe等[5]研究发现子宫内膜癌组织的Hpa的mRNA表达水平与其微血管密度和临床病理学分期、病理学分级及淋巴结是否转移有高度的相关性。Hasengaowa等[6]研究也有相同报道，同时发现Hpa强阳性表达的子宫内膜癌患者无瘤生存率和总的生存率明显低于Hpa弱阳性或阴性表达的子宫内膜癌患者。

　　综上所述，乙酰肝素酶可能与子宫内膜癌的发生和发展密切相关，有望作为一项检测指标，用于子宫内膜癌的联合诊断、病情评估、疗效观察和预后预测。Hpa抑制剂也可能为子宫内膜癌的治疗开辟一条新思路。

　　【参考文献】

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　　[4]Simizu S, Ishida K, Osada H. Heparanase as a molecular target of cancer chemotherapy [J]. Cancer Science, 2004, 95(7):553558.

　　[5]Watanabe M, Aoki Y, Kase H, et al. Heparanase expression and angiogenesis in endometial cancer [J]. Gynecol Obstet Invest, 2003, 56(2):7782.

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