宫颈癌组织中hMLM 1及hMSH 2表达的研究

作者：李素文 朱宝申 郝惠英    作者单位：050021 河北省石家庄市第五医院妇产科 【摘要】  目的 探讨hMLM 1及hMSH 2在宫颈癌组织中的表达、相互关系及临床意义。方法 49例宫颈癌为试验组,慢性宫颈炎及正常宫颈组织共20例为对照组。采用免疫组化SP法分别检测hMLM 1及hMSH 2在各组中的表达情况。结果 宫颈癌组织中hMLH 1、hMSH 2的阳性表达率分别为55.1% (27/49)、63.27%(31/49)，显著高于正常宫颈上皮组织中的表达，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 hMLM 1及hMSH 2与宫颈癌的发生、发展密切相关。

【关键词】  宫颈癌;免疫组化;hMLM 1;hMSH 2

The expression of hMLM1 and hMSH2 in patients with cervical cancer LI Suwen, ZHU Baoshen,HAO Huiying. Department of Genecology and Obstetrics, The Fifth Hospital of Shijiazhuang City, Shijiazhuang 050021,China

　　【Abstract】 Objective To analyze the expression and correlation between hMLH1 and hMSH2 in patients with cervical cancer. Methods The expressions of hMLH1 and hMSH2 were detected by immunohistochemistry staining in 49 specimens of cervical cancer and 20 specimens of normal cervical tissue. Results The positive rates of hMLH1 and hMSH2 in cervical cancer were 55.1% (27/49) and 63.27% (31/49) respectively. The expressions of hMLH1 and hMSH2 were significantly higher in tissue of cervical cancer than those in normal cervical tissue(P<0.05).The hMLH1 was positively correlated with hMSH2 (P<0.05). Conclusion The hMLH1 and hMSH2 are related to the occurrence and development of cervical cancer, and they may play an important role in the invasion and metastasis of cervical cancer.

　　【Key words】 cervical cancer; immunohistochemistry; hMLH1; hMSH2

　　错配修复(mismatchrepair,MMR)基因是一高度保守的看家基因,人类已发现至少有6种：hMSH 2、hMLH 1、hPMS 1、hPMS 2、hMSH 3和GTBP。近年来分子生物学研究显示,MMR缺陷的个体或细胞,易发生癌变,已有研究表明:MMR基因的表达在人类各种肿瘤如结肠癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌等是不同的并且与肿瘤预后的关系也不一致[1]。我们采用免疫组织化学的方法研究在宫颈癌中MMR基因hMLM 1及hMSH 2蛋白表达，以探讨在宫颈癌发生、发展过程中的作用。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 收集我院2006年10月至2008年10月手术切除的宫颈癌石蜡包埋组织块49例，术前均未接受放疗、化疗等，所有标本均经过病理证实。按FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期23例，Ⅲ～Ⅳ期26例。20例对照均为同期因良性子宫疾病行子宫切除术时切除的正常宫颈和宫颈炎组织。

　　1.2 方法 采用免疫组织化学SP法，hMLM 1单克隆抗体购自美国PharmacⅠa公司;hMSH 2单克隆抗体购自深圳晶美生物工程有限公司;SP试剂盒及DAB显色系统均购自北京中杉试剂公司。所有新鲜标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续4 μm厚度切片,脱蜡、脱水,采用SP法，操作步骤严格按试剂盒说明书进行。以磷酸缓冲液(PBS)代替一抗作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。

　　1.3 结果判定 hMLM 1、hMSH 2阳性产物定位于细胞核内。阳性表达呈棕褐色颗粒，定位于细胞核。每张切片均取5个高倍视野,每个视野随机计数100个细胞:阳性细胞百分率<10%为阴性;≥10%阳性。

　　1.4 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件,阳性率之间比较用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 hMLM 1在宫颈组织中的表达 hMLM 1阳性表达呈棕褐色颗粒，定位于细胞核。hMLM 1在正常宫颈黏膜、宫颈癌组织中的阳性表达率分别为25.0% (5/20) 和55.1% (27/49)，后者明显高于前者,差异有统计学意义(χ2=5.175，P<0.05)。不同临床病理特征宫颈癌组织中hMLM1的表达见表 1。

　　2.2 hMSH 2在宫颈组织中的表达 hMSH 2阳性表达呈棕褐色颗粒，定位于细胞核。hMSH 2在正常宫颈黏膜、宫颈癌组织中的表达率分别为20.0%(4/20)和63.27%(31/49)，后者明显高于前者,差异有统计学意义(χ2=10.637，P<0.05)。不同临床病理特征宫颈癌组织中hMS 2的表达见表1。表1 不同临床病理特征宫颈癌组织中hMLM 1及hMSH 2的表达例

　　2.3 hMLM 1、hMSH 2在宫颈癌组织中表达的相关性 宫颈癌组织中hMLM 1阳性表达的27例中，hMSH 2阳性22例，5例阴性; hMLM 1阴性表达的22例中, hMSH 2阳性9例，13例阴性;两者表达差异有统计学意义(χ2=8.586，P<0.05)。见表2。表2 hMLM 1、hMSH 2在宫颈癌组织中表达的相关性例

　　3 讨论

　　研究表明,DNA MMR基因的突变或缺陷将导致复制后MMR功能的丧失,增加细胞自发突变的频率,随着基因突变的不断放大积累,使大量错误信息遍布于整个基因组,最终导致肿瘤的发生[2]。其中hMLH 1和hMSH 2基因是MMR基因中最为重要的2个,它们担负着对错配位点的识别和切除的功能,与消化道肿瘤的发生关系密切。目前研究表明[3],hMLH 1及hMSH 2基因启动子的甲基化可以导致MMR基因不表达,从而导致肿瘤发生。Shin等[4]研究也发现,在非典型遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)患者中发现hMSH 2基因启动子的种系突变,该突变能导致hMSH 2基因不表达,从而导致肿瘤发生。与其他学者在子宫内膜癌、卵巢癌、胃癌、直肠癌研究结果一致,支持在散发性肿瘤中MMR缺陷主要为错配修复基因启动子甲基化的假说[5，6]。

　　本研究中发现宫颈癌组hMLH 1和hMSH 2蛋白表达为55.1%(27/49)和63.27%(31/49)，明显高于慢性宫颈炎组25.0%(5/20)和20.0% (4/20) (P<0.05),这一结果与Klinger[7]等的研究一致。其增高原因可能是失去机体调控的宫颈癌细胞在恶性增殖过程中出现了基因的多点突变和DNA复制错误，碱基错配也随之不断增加，反馈细胞MMR系统使hMLH 1和hMSH 2蛋白代偿性表达增高,以加强MMR功能，这些可能间接反映了肿瘤的存在情况。但也不能排除这种蛋白的高表达是由于hMLH 1和hMSH 2基因突变,转录翻译出无功能蛋白蓄积所致，两者共同参与了宫颈癌的发生发展。免疫组化方法可以作为识别具有MMR基因功能缺陷的肿瘤的一种可用的方法，检测得出的蛋白表达结果将为下一步的研究方向，如应用逆转录PCR(RTPCR)对基因进行测序检测基因突变;应用甲基化特异性PCRf(Methy1ation specific PCR，MSP)分析基因的甲基化等。

　　在蛋白水平和DNA水平上，hMLH 1、hMSH 2在癌组织与非癌组织中的表达存在明显差异。因此，我们可以试探性地利用这种差异作为突破口，将其广泛运用于宫颈癌的早期诊断和治疗。

【参考文献】  　　1 魏永志，周琰，陈瑞敏，等.错配hMSH2在宫颈癌变过程中的表达及意义.河北医药，2009，31：139141.

　　2 Studamire B,Quach T,Alani E.Saccharomyces cerevisⅠae Msh2P and Msh6 PATPase activities are both required during mismatchre pair.Mol Cell Biol,1998,18:75907601.

　　3 金黑鹰,崔龙,高军,等.hMLH1/hMSH2基因启动子变异在遗传性非息肉病性结直肠癌发生中的作用.中华胃肠外科杂志,2003,6:243246.

　　4 Shin KH,Shin JH,Kim JH,et al.Mutation alanalysis of promotersofmismatch repair genes hMSH2 and hMLH1in hereditarynonpolyp osiscolorectal cancer and early on setcolorectal cancer patients:identification of three novel germline mutations in promoter of the hMSH2 gene.Cancer Res,2002,62:3842.

　　5 张大军,彭芝兰.错配修复基因hMSH2蛋白在人卵巢恶性肿瘤组织中的表达及临床意义.中华妇产科杂志,2000,35:291293.

　　6 Staebler A,Lax SF,Ellenson LH.Altered expression of hMLH1 and hMSH2 protein in endometrⅠal carcinomas with microsatellite instability.HumPathol,2000,31:354358.

　　7 Klinger H,Hemmerle C,Bannwart F,et al.Expression of the hMSH6 mismatchrepair protein in colon cancer and HeLa cells.Swiss Med Wkly,2002,132:5763.