HBeAg与乙型肝炎病毒宫内感染的关系

作者:马丽娟

作者单位：山东大学齐鲁医院妇产科， 济南 250012

    【摘要】  目的 探讨乙肝病毒e抗原（HBeAg）对胎儿免疫机制的影响及引起乙肝病毒（HBV）宫内垂直传播和免疫耐受的机制。方法 将50例HBsAg阳性孕妇分娩的新生儿分为HBeAg阳性组和HBeAg阴性组，对母血和脐血进行HBV血清学标志物和HBV DNA的检查，并检测脐血中白细胞介素2（IL2）、干扰素γ（IFNγ）、白细胞介素4（IL4）和白细胞介素6（IL6）水平，同时设立正常对照组。结果 孕妇HBeAg阳性和阴性者分别为27例和23例，其新生儿脐血HBeAg阳性者分别为22例和1例，差异具有统计学意义(P＜0.05)；与新生儿HBeAg阴性组（27例）和正常对照组相比，新生儿HBeAg阳性组（23例）脐血IL2、IFNγ水平明显降低，而IL4、IL6水平明显升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)，新生儿HBeAg阴性组（27例）和正常对照组间四种细胞因子水平差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 胎儿体内的HBeAg可由母体传播而来，并可能通过Th1/Th2细胞亚群失衡引起胎儿机体对HBV的免疫耐受及宫内感染的发生。

【关键词】  肝炎e抗原，乙型；垂直传播；免疫耐受

    transmission of hepatitis B virus

    MA Lijuan, MA Yuyan, WANG Leiyi, TIAN Meirong, GAO Lingxue,   LIU Zhenping

    (Department of Obstetrics and Gynecology, Qilu Hospital of Shandong University, Jinan 250012, China)

    To investigate the effect of HBeAg on immunologic state of neonates and the mechanisms of intrauterine infection and immunotolerance of hepatitis B virus. Methods  50 neonates delivered by positive HBsAg mothers were divided into the positive HBeAg group and the negative HBeAg group. The serum HBV M and HBV DNA were determined in pregnant women and neonates, also the levels of IFNγ, IL2, IL4 and IL6 in these neonates and another 20 normal neonates were determined. Results  27 pregnant women had positive HBeAg  and 23 had negative HBeAg, and of them 22 and 1 neonate had positive HBeAg(P＜0.05) . Compared with the negative HBeAg group (27cases) and the control group，the IL2 and IFNγ levels of the positive HBeAg group (23cases) were significantly decreased while the IL4 and IL6 levels were significantly increased(P＜0.05)，　but the cytokine levels were not significantly different between the negative HBeAg group and the control group (P＞0.05). Conclusion  Neonate HBeAg can be transmitted from positive HBsAg pregnant woman, which may cause an unbalance of the Th1/Th2 cell subset and bring on the immunotolerance of hepatitis B virus, and finally causes intrauterine infection of HBV.

    Key words: Hepatitis B e Antigen(HBeAg)；  vertical transmission； Immune Tolerance    我国人群中HBsAg阳性率约为10%，宫内垂直传播是感染HBV的重要途径之一［1］。目前，在宫内垂直传播发生机制的研究中，机体的免疫状态越来越被关注，它决定了人体接触HBV后病毒能否被清除以及病情发展的方向［2］。多项研究表明，HBeAg是病毒传染性的重要标志和HBV宫内感染的重 要危险因素，可以自由通过胎盘进入胎儿体内干扰机体的细胞免疫与体液免疫，从而导致免疫耐受的发生［3］247。胎儿期是最容易被诱导产生免疫失衡和免疫耐受的时期，一旦发生，会造成病毒清除障碍而导致感染并引起HBV感染慢性化。本研究对新生儿不同类型细胞因子IL2、IFNγ、IL4、IL6的水平进行检测，以探讨HBeAg对胎儿Th1/Th2细胞亚群失衡即免疫失衡的影响而推断其对于HBV宫内垂直传播及免疫耐受发生的作用。

1  资料与方法

    1.1  一般资料  2007年3月至2007年11月于山东大学齐鲁医院产前检查及足月分娩的50例HBsAg阳性孕妇及其新生儿作为研究组，选取同期20例HBsAg阴性孕妇分娩的足月新生儿作为对照。所选孕妇符合以下标准：① 血清肝炎病毒系列检查呈阴性；② 无先兆流产、先兆早产、妊娠期高血压疾病和明显感染性疾病史；③ 肝肾功能正常；④ 孕期未使用研究药物、抗病毒药物、免疫调节剂、细胞毒性药物或皮质类固醇激素类药物；⑤ 胎儿无畸形，其丈夫非HBV携带者；⑥ 孕妇年龄、孕次、产式、分娩时胎龄、分娩方式均无明显差异。

    1.2  研究方法

    1.2.1  标本的采集和处理  产前采集孕妇肘静脉血4?mL进行HBV血清学标志物和HBV DNA的检测；分娩时于无菌条件下抽取新生儿脐静脉血5?mL于普通试管中，取2?mL进行HBV血清学标志物和HBV DNA定量检测，其余离心处理后将血清以每管150?μL分装于EP管中，-70?℃冻存留用检测IL2、IFNγ、IL4、IL6。

    1.2.2  实验方法  HBV血清学标志物测定：采用双抗夹心酶联免疫吸附法(DASELISA)，试剂盒购自厦门泰伦生物工程有限公司，自动酶标洗板机、BIORAD450 型酶标仪为美国DENLEY公司生产；HBV DNA定量检测：采用荧光定量PCR法，试剂盒购自中山医科大学达安基因诊断中心。HBV DNA≥103判定为HBV DNA阳性；IFNγ、IL2、IL4、IL6水平的测定：采用DASELISA，试剂盒为深圳晶美公司出品，CB372酶标仪为美国DYNEX公司生产。

    1.3  新生儿HBV宫内感染诊断标准  脐血HBsAg阳性或HBV DNA阳性即为HBV宫内感染。

    1.4  统计学处理  均数结果以±s表示；组间阳性率的差异性采用χ2检验;多组间均数值的比较使用单因素方差分析；两组间均数值的比较采用t检验或t′检验；所有实验数据采用SPSS13.0软件进行统计分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

    2  结  果

    2.1  新生儿宫内感染情况  50例HBsAg阳性孕妇分娩的新生儿有7例发生HBV宫内垂直传播，新生儿HBeAg阳性与宫内感染的关系密切，见表1、表2。

　　2.2  孕妇及新生儿各指标之间的关系  孕妇HBeAg与新生儿HBeAg、孕妇HBV DNA之间存在着明显相关关系（P＜0.01），见表3。

    2.3  各组新生儿脐血细胞因子的水平  HBeAg阳性组新生儿脐带血中IFNγ、IL2、IL4、IL6水平与HBeAg阴性组和正常对照组新生儿相比有明显差别，差异有统计学意义（P＜0.05），而后两组之间无明显差别（P＞0.05）；对4种细胞因子进行相关性分析，结果显示新生儿IFNγ与IL2之间呈显著正相关，相关系数r=0.62（P＜0.05）；IL4与IL6间呈显著正相关，r=0.73(P＜0.05)；IFNγ与IL4、IL6之间呈显著负相关，r分别为0.59、0.77（P＜0.05）；IL2与IL4、L6之间呈显著负相关，r分别为0.86、0.72（P＜0.01），见表4。

    3  讨  论

    目前认为，HBV感染与机体的免疫机制有关［4］，HBV病毒是细胞内寄生微生物，因此机体对HBV的清除主要依赖细胞免疫。Th1型免疫以细胞免疫为主，主要分泌IL2、IFNγ、TNFβ等细胞因子，是清除HBV的主要免疫机制；Th2型免疫以体液免疫为主，主要分泌IL4、IL5、IL6、IL10等细胞因子，可反馈抑制Th1亚群的功能［5］。

    研究表明，孕妇体内的HBeAg与相应抗体结合后可通过胎盘上IgG受体的介导进入胎儿循环［3］249，本研究结果亦显示了孕妇HBeAg阳性者其新生儿易于表达HBeAg（P＜0.05）。进入胎儿循环内的HBeAg优先诱导Th2型细胞免疫活性、促进Th2型细胞因子产生，同时抑制Th1型细胞免疫活性并且耗竭Th1型细胞因子［6］，导致胎儿发生Th1/Th2免疫失衡并诱导机体发生对HBV的免疫耐受［7］。本研究结果显示，循环中HBeAg阳性的新生儿，无论其是否发生了HBV宫内感染，体内细胞因子IL2和IFNγ的水平均低于HBeAg阴性组和正常对照组新生儿，而IL4和IL6水平则明显升高。IL2、IFNγ水平代表了细胞免疫反应的活性，同时可以促进细胞免疫和增强宿主对病毒和细胞内感染的杀伤防御能力；IL4、IL6水平反映了体液免疫的状态，同时可促进体液免疫，并且导致HBV的持续感染和慢性化［8］。在这种免疫失衡发生的情况下，若胎儿在宫内接触到一定数量的HBV，则不能及时有效地清除而导致宫内感染的发生，即HBeAg的存在直接促进了HBV宫内感染的发生。多项研究表明，HBeAg是HBV宫内垂直传播的发生的危险因素，无论是否使用HBIG进行产前阻断，孕妇和新生儿HBeAg阳性均与宫内感染的发生明显相关［9］，本实验结果也显示，新生儿HBeAg阳性者发生HBV宫内感染的概率远远高于阴性者。

有研究表明，HBVDNA与HBeAg之间存在明显相关关系［10］，即一般存在病毒高复制的HBV携带者体内多表达HBeAg，不存在病毒复制的HBV携带者则很少表达HBeAg，本实验结果也显示出这一趋势。由于母亲体内的HBeAg能够传递给胎儿并引起宫内感染的发生，因此可通过对育龄妇女加强健康教育和健康检查，对其中存在HBV复制的携带者进行积极有效的抗病毒治疗［11］，尽量使其在病毒含量被控制和HBeAg转阴后妊娠，则可能达到减少HBV宫内垂直传播的发生的目的。同时，可考虑通过细胞因子和免疫疗法改善宫内胎儿的的免疫失衡状态而阻止宫内感染的发生。

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