育龄期功能失调性子宫出血女性子宫内膜组织中MMP9、TIMP1的表达变化与意义

作者:康燕华,张彦芳,任雁林 作者单位：河北北方学院附属第一医院妇产科,河北 张家口 075000

      【摘要】  目的:研究育龄期功能失调性子宫出血患者子宫内膜局部MMP9、TIMP1的表达变化。方法:采用免疫组化SP法检测35例育龄期功能失调性子宫出血患者及20例正常月经健康女性排卵后期（即对照组）子宫内膜MMP9、TIMP1的表达情况。结果:育龄期功血女性以排卵型为主（30/35），其子宫内膜组织中MMP9在出血部位的表达显著高于正常部位及对照组（P<005），TIMP1在出血部位的表达显著低于正常部位及对照组（P<005），有统计学意义。结论:子宫内膜局部MMP9与TIMP1失衡与育龄期功血的发生有关。

【关键词】  功能失调性子宫出血（DUB）;MMP9;TIMP1

     Changes and Significance of MMP9、TIMP1 in Endometria of

    Women with Adult Dysfunctional Uterine Bleeding

    KANG Yanhua, ZHANG Yanfang, REN Yanlin,et al

    Department of Gynecology and Obstetrics, The First Affiliated Hospital,

    Hebei North University, Zhangjiakou, 075000,Hebei,China

    【ABSTRACT】  Objective: To investigate the focal expression of MMP9 and TIMP1 in endometrium of women with dysfunction uterine bleeding. Methods: The expression of MMP9 、TIMP1 in endometrium was detected by immunohistochemisty in 35 cases with adult dysfunction uterine bleeding and 20 normal women as controls. Results: The expression of MMP9 in the focal bleeding position was siginicantly higher than that in normal position of endometrium and the control group. The expression of TIMP1 in the focal bleeding position was significantly lower than that in normal position of endometrium and the control group. Conclusion: The imbalance status of MMP9/TIMP1 in focal endometrium is probably related to adult dysfunction uterine bleeding.

    【KEY WORDS】  Dysfunctional uterine bleeding;MMP9;TIMP1

    功能失调性子宫出血（dysfunctional uterine bleeding,DUB，功血）是指由于调节生殖的神经内分泌机制失常引起的异常子宫出血，发生机制理论上涉及到轴系、卵巢和子宫；其中育龄期的功血在出血量、出血期及出血模式等方面基本具有规律性，子宫内膜局部微环境的改变可能是异常出血的主要原因。研究表明基质金属蛋白酶（MMPS）广泛表达于子宫内膜，参与了子宫内膜的周期性剥脱与重塑；MMPS主要降解基底膜中的胶原成分及弹性蛋白，与血管损伤有关，且在分泌中晚期及月经期高表达[1]，这意味着MMP9可能是发动经期出血的主要因子之一，TIMP1是其特异性的抑制因子。就育龄期功血，我们推测内膜局部MMP9与TIMP1之间失衡参与了不规则出血，本研究通过宫腔镜技术准确取材来研究子宫内膜出血灶局部MMP9、TIMP1表达变化，为研究非激素类药物止血提供理论依据。

    1  资料与方法

    11  一般资料  随机选择20061~20071月就诊于河北北方学院附属第一医院妇产科门诊的年龄25～40岁功能失调性子宫出血患者35例为病例组，以同期因男方因素就诊于我院门诊待人工受精的年龄25～40岁的月经周期规则（28±2d）、卵巢功能正常的健康女性20例为对照组，对照组标本采集时间为排卵后期。所有入选对象均近3个月未使用激素治疗。功能失调性子宫出血的诊断标准按丰有吉主编的七年制《妇产科学》中相关标准，无生殖道器质性病变及内科疾病。

12  取材  所有入选对象均经宫腔镜检查，标本取宫腔后壁功能层，其中病例组取子宫内膜出血部位及正常部位组织，用冷生理盐水洗净内含血块，吸干水分，4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，连续4μm厚切片3张，备HE及免疫组化染色用。

    13  实验方法①组织切片1张常规苏木素—伊红（HE）染色后，作组织学诊断，即分为增生期或分泌期。②余2张采用免疫组化SP法检测MMP9、TIMP1表达情况，具体步骤按说明书操作，MMP9免去抗原修复步骤，TIMP1采用柠檬酸缓冲液高压热力修复抗原。DAB显色，用已知阳性片作阳性对照，用磷酸缓冲液代替一抗作为阴性对照。

    14  结果判定  免疫组化染色结果由两位医师独立进行定量评分，以胞浆内出现深于背景的棕黄色颗粒为阳性，参照马正中[2]评分法，结合显色强度和阳性细胞百分率判读结果，随机选取5个高倍视野计数阳性细胞百分率，再根据染色强度进行评分，强阳性3分，弱阳性1分，介于两者之间为2分，每例组织学分数=∑（3×强阳性百分率＋2×中等阳性百分率＋1×弱阳性百分率）/5。

    15  统计学分析各数据用x±s表示，采用t检验，P<005为差异有显著性意义。

    2  结果

    21  35例DUB子宫内膜光镜下病理组织学诊断增生期5例，分泌期30例，显示育龄期DUB绝大多数为排卵型，对照组因取材组织为排卵后期均为分泌期。

    22  MMP9及TIMP1在各组间的表达（见表1）。2007年6月康燕华等：育龄期功能失调性子宫出血女性子宫内膜组织中MMP9、TIMP1的表达变化与意义第3期2007年6月河北北方学院学报（医学版）第3期表1  各组间MMP9及TIMP1的表达注：*与对照组相比P<005

    MMP9、TIMP1表达于子宫内膜的腺上皮及间质细胞。MMP9在腺上皮表达中，DUB组出血部位显著高于正常部位及对照组（P<005）；在间质的表达中，DUB组正常部位及出血部位均显著高于对照组（P<005）。TIMP1在腺上皮表及间质的达中，DUB组出血部位显著低于正常部位及对照组（P<005）。

    3  讨论

　　子宫内膜是卵巢分泌的甾体激素作用的靶器官，卵巢通过自分泌和旁分泌的方式，分泌多种酶类和细胞因子等，调节子宫内膜生长。正常的月经是基于排卵后黄体期的结束，雌激素和孕激素撤退导致子宫内膜皱缩、坏死并脱落而出血。正如临床观察育龄期功血在出血量、出血期和出血模式等诸方面具有规律性，本研究通过病理分析显示绝大多数育龄期功血是排卵型的，也证明了临床表现规律性的本质所在。DUB功血宫腔镜下可见其出血斑和活动性出血灶，我们推测DUB出血必由更微妙的方式发生，异常出血灶的形成必然要涉及到血管的损伤及细胞基质成分的破坏。基质金属蛋白酶是一组降解细胞外基质成分的蛋白水解酶，MMP9主要分解基底膜中的胶原成分和弹性蛋白，TIMP1以组织和底物特异性方式抑制MMP9的活性，MMP9、TIMP1均表达于子宫内膜的腺上皮和间质细胞。它们在生理情况下，参与子宫内膜的重塑、血管的形成和发育等。国外学者已证明了MMPS与异常出血关系密切，Galant[3]的研究表明不规则出血患者子宫内膜局部MMP9、1、3表达升高，活性增强。本研究利用免疫组化技术研究女性发生育龄期功血时MMP9、TIMP1的变化，结果显示MMP9在DUB组子宫内膜的表达显著高于正常对照组，且出血局部表达高于正常部位。表明MMP9局部高表达损伤了细胞外基质成分和血管基底膜，血液外渗造成了子宫内膜水肿及出血的发生。而TIMP1在出血部位的表达显著低于其它各组，Freitas[4]等研究发现在正常月经期TIMP1强烈表达于子宫内膜崩溃区与非崩溃区之间的血管壁周围，这种表达模式表明在这些灶状崩溃区周围TIMP1起着限制MMPS对子宫内膜血管壁的进一步破坏的作用。本研究结果表明，TIMP1表达减少不能限制血管的损伤，从而不能进行有效的创面修复，进而出现不规则出血。本研究结果显示MMP9、TIMP1主要在出血局部的子宫内膜的表达发生了变化，这表明MMP9、TIMP1是以旁分泌或自分泌形成调控的，局部因子发挥着主要作用。Galant[3]利用嗜银染色方法表明异常子宫出血者子宫内膜组织出血局部发生了同月经期相似的间质崩解迹象。就育龄期功血而言，随着对MMPS/TIMPS系统调控的细胞分子机制深入研究，以及对与正常月经发生的相似及不同之处更深了解，新的治疗DUB出血方法如非激素类止血药物将会出现。

【参考文献】  1 Goffin F, Munant C, Frankam F, et al. Expression Pattern of metalloproteinases and tissue in inhibitors of matrixmetalloproteinases in cycling human endometrium[J]. Biol Reprod, 2003,69:976984

2 马正中.诊断细胞病理学[M].第1版.郑州：河南科学技术出版社，2000.824

3 Galant C, Berliere M, Dubois D, et al. Focal expression and final activity of matrix metalloproteinases may explain irregular dysfunctional endometrial bleeding. Am J Pathol, 2004,165(1):8394.

4 Freitas S,Meduri G, Le Nestour F, et al. Expression of metalloproteinases and their inhibitors in blood vessels in human endometrium. Biol Reprod, 1999,61(4):10701082.