survivin与PTEN、PCNA在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

作者:徐楗荧,曲仕浩,李英勇

 作者单位：广东医学院05级硕士研究生，广东湛江 524023；广东医学院附属医院，广东湛江 524001

      【摘要】  　　目的 观察survivin、PTEN、增殖细胞核抗原（PCNA）在子宫内膜癌(EMC)中的表达及临床意义。方法 运用免疫组化SP法检测survivin、PTEN、PCNA蛋白在48例EMC、19例子宫内膜不典型增生、23例正常子宫内膜组织中表达情况，及其在EMC不同临床分期、组织学分级、肌层浸润程度表达。结果 survivin、PCNA和PTEN在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生及EMC中的表达不同，不典型增生组、EMC组与正常子宫内膜组比较，差异有统计学意义(P＜0.05或0.01 )，不典型增生组与EMC组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。EMC临床Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期 survivin表达与Ⅰ期有不同，Ⅲ～Ⅳ期 PTEN、PCNA表达与Ⅰ期有不同，差异均有统计学意义（P＜0.05）。不同组织学G2、G3 survivin、PTEN、PCNA表达与 G1有不同，差异有统计学意义（P＜0.05或0.01）。无肌层浸润或浸润程度≤1/2组PTEN、PCNA表达与浸润程度＞1/2组不同，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 检测survivin、PTEN、PCNA三者的表达水平对判断EMC的恶性程度及预测预后具有一定的临床参考价值。

   【关键词】  survivin ；PTEN ；增殖细胞核抗原；子宫内膜癌

　　Expression of survivin, PTEN and PCNA protein in endometrial carcinoma and its clinical significance

　　XU Jianying,  QU Shihao，LI Yingyong

　　（Master Degree Student, Grade 2005, Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023, China. Department of Gynecology and Obstetrics, Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Zhanjiang 524001, China）   　　Abstract: Objective  To investigate the expression of survivin, PTEN and PCNA protein in endometrial carcinoma and its clinical significance. Methods Immunohistochemical SP method was performed to detect the expression of survivin, PTEN and PCNA protein in 48 cases of endometrial carcinoma, 19 cases of endometrial atypical hyperplasia and 23 cases of normal endometrium. The expression of survivin, PTEN and PCNA protein was detected in different clinical stage, histological grade, myometrial invasion of endometrial carcinoma.  Results   The expression of survivin, PCNA and PTEN protein in normal endometrium, endometrial atypical hyperplasia and endometrial carcinoma were significantly different (endometrial atypical hyperplasia vs normal endometrium with P＜0.05, and endometrial carcinoma vs normal endometrium with P＜0.01, while endometrial carcinoma vs endometrial atypical hyperplasia with P＞0.05).  In endometrial carcinoma, the expression of survivin in clinical stage Ⅱgroup and Ⅲ～Ⅳgroup was different from in the stageⅠgroup （P＜0.05 ); the expression of PTEN and PCNA in clinical stage Ⅲ～Ⅳgroup was different from in stageⅠgroup（P＜0.05）. The expression of survivin, PTEN and PCNA in histological G2,G3 grade groups of endometrial carcinoma was different from in G1 grade group（P＜0.05 or 0.01）.  Conclusion   Detection of the expression of surviving, PTEN and PCNA could supply some clues for the malignant degree of endometrial carcinoma and the prognosis of patients.Key words: survivin; PTEN; proliferating cell nuclear antigen; endometrial carcinoma    　　肿瘤的发生是多基因、多步骤的复杂过程，癌基因的激活、抑癌基因的失活、细胞周期调节紊乱均可导致正常子宫内膜细胞的恶性转化及子宫内膜癌(EMC)的发生、发展［1］。为了解凋亡抑制基因survivin、抑癌基因PTEN、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）与EMC发生、发展的关系，本文用免疫组织化学SP法检测了3者在EMC、子宫内膜不典型增生、正常子宫内膜组织中的表达，现将结果报道如下。    　　1  资料与方法    　　1.1  一般资料      　　选择广东医学院附属医院妇产科2004－2006年子宫内膜存档蜡块90例，其中正常子宫内膜23例，不典型增生19例，EMC48例。48例EMC按国际妇产科联盟1988年标准进行手术病理分期：Ⅰ期21例、Ⅱ期16例、Ⅲ～Ⅳ期11例；组织学分级：G1 7例、G2 19例、G3 12例；无肌层浸润或≤1/2肌层浸润28例，＞1/2肌层浸润20例。EMC患者年龄33～75岁，平均56.5岁，术前均未行放、化疗及激素治疗，切片经病理医师复查证实。    　　1.2  方法    　　采用免疫组化SP法。survivin、PTEN、PCNA鼠抗人单克隆抗体，SP试剂盒，DAB显色剂均购自北京中杉公司。均参照试剂盒说明书进行操作。     　　1.3  染色特征及结果判定

　　1.3.1  survivin结果判定  参照文献［2］进行：阳性染色主要定位于子宫内膜腺上皮细胞浆（偶见于胞核），阳性物质呈淡黄色或黄色颗粒状，染色强时可呈棕褐色。⑴根据每张切片中细胞染色强度评分：细胞内无染色为0分；浅黄色为1分；棕黄色为2分；棕褐色为3分；⑵按组织切片中的阳性染色细胞数占全部肿瘤细胞百分比记分(随机取10个高倍镜视野的平均数)：≤5%为0分，～20%为1分，～50%为2分，～75%为3分，＞75%为4分；⑶按上述两项指标的分数乘积高低分为：0～1分为阴性(-)，2～4分为弱阳性(+)，5～8分为中度阳性()，9～12分为强阳性()。

　　1.3.2  PTEN结果判定  PTEN阳性颗粒为棕黄色,主要表达于细胞核,参照Salvesen等［3］的标准,高倍镜(×400)下综合染色强度和阳性细胞所占比例进行半定量测定。⑴染色强度评分标准：不着色0分，黄色1分，棕黄色2分．黄褐色3分；⑵阳性细胞所占比例评分标准：阳性细胞数≤10％者0分，～40％者1分，～70％者2分，＞70％者3分；⑶按上述两者评分之和高低分为：0～1分为(-)，2分为(+)，3～4分为()，5～6分为（）。

　　1.3.3  PCNA蛋白表达判定  PCNA阳性颗粒为棕黄色，定位于细胞核内。阳性强度判断为半定量法［4］，选择切片中背景清晰、对比满意的区域，切片组织中无阳性细胞为()，阳性细胞＜10％为(+)，～50％为()，＞50％为()。    　　1.4  统计学处理      　　应用SAS 9.0统计软件，采用秩和检验，再进行组间两两比较。    　　2  结果

　　2.1  survivin、PTEN、PCNA在不同子宫内膜组织中的表达    　　survivin、PCNA和PTEN在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生及EMC中的表达不同，不典型增生组、EMC组与正常子宫内膜组比较，差异有统计学意义(P＜0.05或0.01 )，不典型增生组与EMC组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），详见表1。      　　表1  survivin、PTEN、PCNA在不同子宫内膜组织中的表达（略）

　　survivin：Hc＝27.347，PTEN：Hc＝13.191，PCNA：Hc＝26.120，均P＜0.01。survivin，PTEN，PCNA：a vs b,P＜0.05；a vs c,P＜0.01；b vs c,P＞0.05。2.2  survivin、PTEN、PCNA蛋白在EMC不同临床、病理分期中的表达    　　EMC临床Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期 survivin表达与Ⅰ期有不同，差异有统计学意义（Ｐ＜0.05）；Ⅲ～Ⅳ期 PTEN、PCNA表达与Ⅰ期有不同，差异有统计学意义（Ｐ＜0.05）。不同组织学G2、G3 survivin、PTEN、PCNA表达与 G1有不同，差异有统计学意义（Ｐ＜0.05或0.01）。无肌层浸润或浸润程度≤1/2组PTEN、PCNA表达与浸润程度＞1/2组不同，差异有统计学意义（Ｐ＜0.05）。详见表2。    　　表2  survivin、PTEN、PCNA蛋白在EMC不同临床、病理分期中的表达（略）

　　survivin：Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期 vsⅠ期，Ｐ＜0.05；G2 vs G1，Ｐ＜0.05；G3 vs G1，Ｐ＜0.01。        　　PTEN：Ⅲ～Ⅳ期 vsⅠ期，Ｐ＜0.05；G2、G3 vs G1，Ｐ＜0.05。        　　PCNA：Ⅲ～Ⅳ期 vsⅠ期，Ｐ＜0.05；G2 vs G1，Ｐ＜0.05；G3 vs G1，Ｐ＜0.01。

　　3  讨论    　　survivin基因是凋亡抑制蛋白（IAP）基因家族的新成员，选择性的表达于一般的人类肿瘤，正常成人组织中不表达。过度表达的survivin可使细胞失去正常增殖周期中凋亡关卡的限制，通过有丝分裂促进转化细胞的异常增殖。PCNA是细胞DNA合成期必不可少的因子,是细胞增殖状态的理想标记物, 其表达状况可以反映肿瘤细胞的增殖活性。PTEN是具有特异性磷酸酶活性的抑癌基因，它通过催化PIP3 3位脱磷酸而抑制细胞增殖、促进细胞凋亡［5］。该基因的突变、缺失与人类多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关，尤其在子宫内膜癌的基因缺失率最高。    　　本文survivin、PCNA阳性表达和PTEN阴性表达在不典型增生组及EMC组高，与正常子宫内膜组比较，差异均有统计学意义（Ｐ＜0.05或0.01）；但不典型增生组survivin、PCNA阳性表达和PTEN阴性表达与EMC组比较，差异无统计学意义，但这种无差异尚不能排除抽样过少所致。因此推测：survivin蛋白的表达可能是子宫内膜癌变早期的分子事件，而PTEN蛋白表达是正常子宫内膜生长的必要因素之一，PTEN蛋白表达下降或缺失可能使子宫内膜生长失控，最终导致癌变的发生。    　　许多临床病理因素与子宫内膜癌的预后相关，多数学者认为，临床分期、组织学分级、肌层浸润等是绝对的影响因素［6］。本文survivin阳性表达EMCⅠ期高于Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期（Ｐ＜0.05）；PTEN阴性表达和PCNA阳性表达EMCⅠ期高于Ⅲ～Ⅳ期（Ｐ＜0.05）；survivin、PCNA与 PTEN表达G2、G3与G1期不同，差异有统计学意义（Ｐ＜0.05或0.01）；PTEN、PCNA表达肌层浸润＞1/2组与无肌层浸润或基层浸润＜1/2组不同，差异有统计学意义（Ｐ＜0.05），但survivin表达在肌层浸润程度不同的两组比较，差异无统计学意义。这些说明survivin在一定程度上可以反应出EMC的临床分期、组织学分级，但不能反应出肌层浸润程度，PTEN和PCNA则可在一定程度上反应出EMC的组织学分级和肌层浸润程度。因此，检测survivin、PTEN、PCNA三者的表达水平对判断EMC的恶性程度及预测预后具有一定的临床参考价值。    　　Erkanli等［7］研究表明，在EMC的发展过程中，survivin的过度表达与PTEN的功能减弱或消失均具有重要作用，但统计学分析尚未显示survivin与PTEN具有相关性。Pallares等［8］在对95例子宫内膜癌的研究中论证得出：survivin的高表达与PTEN，STAT3信号转导途径有关。survivin的表达上调与PTEN的表达下调有显著相关性(P＝0.001)。Takai等［9］认为survivin的表达与PCNA标记指数有相关性。本文因病例数过少，尚不能对survivin与PTEN和PCNA的相关性作准确的分析和判断，需继续收集病例，进一步研究。

【参考文献】  　　［1］ IOACHIN E. Immunohistochemical tumour markers in endometrial carcinoma［J］. Eur J Gynaecol Oncol, 2005,26(4):363371.

　　［2］ ARONSOHN M S,BROWN H M,HAUPTMAN G, et a1. Expression of focal adhesion kinase and phosphorylated focal adhesion kinase in squamous cell carcinoma of the larynx［J］. Laryngoscope, 2003, 113(11): 19441948.

　　［3］ SALVESEN H B, STEFANSSON I,KALVENS M B, et a1. Loss of PTEN expression is associated with metastatic disease in patients with endometrial carcinoma ［J］. Cancer, 2002, 94(6):21582191.

　　［4］ GALAND P,DEGRAEF C. Cyclin/PCNA immunostaining as an alternative to tritiated thymidine pulse labelling for marking S phase cells in paraffin sections from animal and human tissues［J］. Cell Tissue Kinet,1989,22(5):383392.

　　［5］ DOWNES C P,PERERA N,ROSS S, et al. Substrate specificity and acute regulation of the tumour suppressor phosphatase, PTEN［J］. Biochem Soc Symp, 2007,74(1):6980.

　　［6］ 沈铿,浪景和.妇科肿瘤面临的问题与挑战［M］.北京:人民卫生出版社,2002:6364.

　　［7］ ERKANLI S,KAYASELCUK F,KUSCU E, et al. Expression of survivin, PTEN and p27 in normal, hyperplastic,and carcinomatous endometrium［J］.Int J Gynecol Cancer,2006,16(3):14121418.

　　［8］ PALLARES J,MARTINEZGUITARTE J L, DOLCET X, et al. Survivin expression in endometrial carcinoma: a tissue microarray study with correlation with PTEN and STAT3［J］. Int J Gynecol Pathol,2005,24(3):247253.

　　［9］ TAKAI N,UEDA T,NISHIDA M, et al. The relationship between oncogene expression and clinical outcome in endometrial carcinoma［J］.Curr Cancer Drug Targets,2004,4(6)：511520.