白大衣高血压血管紧张素转换酶基因多态性分析

　　作者：周建光　　作者单位：解放军第411医院，上海市 200081;解放军海军医学研究所

　　【摘要】目的研究白大衣高血压与血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme，ACE)基因Ⅰ/D多态性的关系。方法：应用多聚酶链式反应(PCR)方法对白大衣高血压，高血压病Ⅰ级患者和正常血压者各30例进行ACE Ⅰ/ D基因型检测，并分析比较。结果：白大衣高血压和高血压病Ⅰ级组II基因型低于正常组(P<0.01)，白大衣高血压和高血压病Ⅰ级组DD基因型高于正常组(P<0.01)，白大衣高血压ID基因型显著高于高血压病Ⅰ级组和正常组(P<0.01)。高血压病Ⅰ级组ID基因型低于正常组(P<0.01)。结论：白大衣高血压与ACE基因多态性有关，ID基因型者易患白大衣高血压。

　　【关键词】 白大衣高血压,肽基二肽酶A 基因

　　Abstract：Objective:To observe the distribution of angiotensin converting enzyme(ACE) gene I/D polymorphism in patients with white coat hypertension (WCH ).Methods:Polymerase chain reaction (PCR ) technique was used to detect the ACE gene I/D polymorphism in 30 WCH patients,30 patients with essential hypertension (EH ) grade I and 30 normal blood pressure (BP) controls and further restriction analysis was performed.Results:The II genotype in WCH group and EH grade I group was significantly lower than that in control group (P<0.01 ).The DD genotype in WCH group and EH grade l group was significantly higher than that in control group (P<0.01 ).The ID genotype in WCH group was significantly higher than that in control group and EH grade I group (P<0.01 ).The ID genotype in EH grade I group was significantly lower than that in control group (P<0.01 ).Conclusion:The White coat hypertension is associated with ACE I/D polymorphism.The subjects with the character of ID genotype are at higher risk of white coat hypertension.

　　Key words：Hypertension;Peptidyl|dipeptidase A;Gene

　　研究[1,2]报告自大衣高血压(WCH)患者占诊室血压诊断高血压患者的15%～30%，甚至>30%，近年研究[3,4]证明，WCH对心脏功能、左室结构、肾功能和脑血管硬化等均有影响，认为是介于正常血压和高血压之间的一种临界状态。肾素-血管紧张素系统在维持血管张力方面起关键作用，可引起血压的变化，血管紧张素转换酶(ACE)是该系统的关键酶，其基因第16内含子存在287 bp的Alu顺序插入/缺失(I/D)多态性。近年来，ACE基因多态性与高血压病之间关系的研究较多[5，6]，比较一致的结论是ACE基因多态性与高血压靶器官的损伤有关[7]。白大衣高血压与ACE基因多态性的关系如何，尚未见报道。本研究旨在探讨白大衣高血压与ACE基因多态性的关系，为白大衣高血压的防治提供数据。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　WCH组：WCH指诊室血压≥140/90 mmHg(1 mmHg=0.133kPa)，24 h 动态血压(ABP)均值<130/80 mmHg。本组30例中男 19 例，女 11 例，年龄 27～60，平均(41.9±6.4)岁。原发性高血压(EH)I级组：指诊室血压≥140/90 mmHg，24 h ABP均值≥130/80 mmHg，共30例，男14 例，女16 例，年龄31～60，平均(44.3±5.3)岁;正常血压(NBP)组：指诊室血压<140/90 mmHg，24 h ABP均值<130/80 mgHg，30例中男15例，女15 例，年龄23～58，平均(38.6±8.5)岁。所有对象均是1999～2001年我院门诊及住院患者，并排除以下情况：(1)继发性高血压;(2)不能停用抗高血压药物者;(3)严重心脏病和脑血管病者;(4)糖尿病者;(5)严重肝、肾病变者：(6)恶性肿瘤者;(7)不能从事日常活动者;(8)夜班工作者。

　　1.2 方法

　　1.2.1 诊室血压测量：均为白天在门诊或病房安静休息5～10 min，采用水银柱血压计测量坐位右上臂血压，分别取柯氏第一音和消失音时的压力为收缩压与舒张压读数，每次测定2遍，间隔3 min，取其均值为一次血压读数。对诊断白大衣高血压者非同日再测量1次，取2次血压均值为诊室血压值。

　　1.2.2 24 h 动态血压(ABP)监测：采用无创性携带式动态血压监测仪(美国太空公司，90217)，袖带宽度25～35 cm，缚于右上臂，测试时间早上8∶00～9∶00至次日早上8∶00～9∶00，白天(6∶00～22∶00)每隔30 min自动充气测压1次，夜间(22∶00～6∶00)每隔60 min测压1次，当次失败时2 min后重测1次，2次均失败为1次读数失败。要求保持日常工作和正常生活起居，袖带充气时肢体不活动。监测仪设置有效血压读数标准为：收缩压70～260 mmHg，舒张压40～150 mmHg，脉压20～150 mmHg。有效血压读数成功率>80%为合格，<80%则隔日重测。

　　1.2.3 去氧核糖核酸(DNA)提取：采取外周血4 ml，用Triton X-100同时破碎红细胞和白细胞，直接得到白细胞核，用NaClO4、十二烷基硫酸钠(SDS)解聚核蛋白，以酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)液抽提，乙醇沉淀。

　　1.2.4 ACE基因多态性测定：多聚酶链式反应(PCR)引物：上游 5′-CTG GAG ACC ACT CCC ATC CTT CT-3;下游5′-GAT GTG GCC ATC ACA TTC GTC AGA T-3′，94℃ 5 min初期变性，继之94℃变性1 min，58℃复性2 min，30个循环后72℃延伸10 min结束。因D等位基因可被优先扩增，导致ID基因型被错配为DD型的可能性，因此，所有被检为DD型的样本均再进行特异性PCR扩增，PCR引物：上游5′-TGG GAC CAC AGC GCC CGC CAC TAC-3′,下游5′-CGC CAG CCC TCC CAT GCC CAT AA-3′，94℃变性1 min，78℃复性及延伸1 min，40个循环后72℃延伸10 min结束。PCR产物应用2%琼脂糖凝胶电泳，DNA经溴化乙锭(EB)染色，紫外灯检测。

　　1.3 统计学处理

　　将获得的数据统计分析以下指标：(1)诊室血压均值和ABP均值;(2)计算各组基因型及等位基因(D和I)频率，确认其符合 Hardy-Weinberg平衡;(3)统计方法采用SPSS 11.0版统计软件，结果进行 t检验和x2检验。

　　2 结果

　　2.1 各组血压均值

　　三组间性别、年龄无显著差异，诊室血压和 ABP均值。

　　2.2 各组基因型

　　ACE基因第16内含子存在287 bp的Alu顺序插入/缺失(I/D)多态性，经PCR扩增，可得到两种长度的片断：490 bp的插入片断(I)和 190 bp的缺失片断(D)。PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，紫外灯下呈现3种带型：纯合子插入型(Ⅱ)、纯合子缺失型(DD)和插入/缺失型(ID)。D等位基因可被优先扩增，导致ID基因型被错配为DD型的可能性，再次进行特异性PCR扩增，本组人群 DD型错配率为 9 %。正常血压组 I、D等位基因分布频率为 60%，40%。各组基因型及频率结果。

　　3 讨论

　　关于WCH的定义，目前国内外尚无统一意见，我们将WCH诊断参考标准定为：诊室血压和/或24 hABP首次手测收缩压>140 mmHg和/或舒张压>90 mmHg，ABP白昼<135/85 mmHg，全天<130/80 mmHg[8]。既往研究[8]结果表明，WCH组的ABP均值、白昼及夜间收缩压和舒张压负荷值，昼夜血压类型比率均介于NBP和EH之间，本研究亦证实WCH组的ABP均值介于NBP和EH组之间(P<0.01)，但诊室血压收缩压及舒张压均高于NBP和EH组。 WCH可引起血管顺应性及弹性下降，继而可发生动脉粥样斑块，并对脑血管，心脏功能、心脏结构和肾小球功能产生影响，故提示WCH对靶器官的危害也较大[3,4]。

　　目前研究认为ACE基因多态性与种族密切相关，中国汉族人群与欧美人群，白种人和黑种人明显不同，其与疾病的关系，研究结果亦不一致，相互间参考价值不大。我国研究结果表明其与原发性高血压的关系存在争议[5-7]。我们近期研究[9]结果表明海军老干部高血压病组II基因型低于正常组，而DD基因型高于正常组，说明D等位基因可能与高血压发病有关。

　　本研究结果白大衣高血压和高血压病组II基因型低于正常组(P<0.01)，白大衣高血压和高血压病组DD基因型高于正常组(P<0.01)，白大衣高血压ID基因型显著高于高血压病组和正常组(P<0.01)。高血压病组ID基因型低于正常组(P<0.01)，说明白大衣高血压与ACE基因多态性有关，ID基因型者易患白大衣高血压。

　　WCH的发病机制尚不清楚，大部分研究发现白大衣高血压与人种，性别，年龄，体重指数，吸烟等有关，目前存在几种观点[8，10]：① 可能与患者的应激反应和警觉反应有关，导致交感神经的过渡活跃;② 与精神压力升高，情绪抑郁有关;③ 也有研究发现与血胆固醇增多呈显著相关。本研究提示白大衣高血压与ACE基因多态性有关，ID基因型易患白大衣高血压，其内在机制尚不清楚，另外本研究为小样本研究，有待大样本研究进一步证实。

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