神经生长因子早期干预对HIE患儿IL-6影响的研究
发表时间：2010-09-19 浏览次数：405次
作者：夏荣华 陈敬国 黄惠娟 郑铠军 陈简 杨秀芳 叶春华 林蔷
摘要 目的:探讨新生儿HIE外周血清IL-6的动态变化及神经生长因子对新生儿HIE的干预治疗作用以及有关分子机制。方法:分正常对照组,中重度HIE组，神经生长因子干预组。在1 d、3 d及7 d采用ELISA方法检查血清IL-6的水平。结果:IL-6水平(pg/mL):正常对照组,中重度HIE组,神经生长因子干预组:1 d依次为80.2±8.6、40.1±7.2、48.2±7.3;3 d依次为81.6±8.8、52.2±7.6、61.2±7.8;7 d依次为83.2±8.9、75.2±8.2、82.1±8.7。结论:缺氧缺血后,HIE患儿外周血IL-6水平减低,神经生长因子能平衡IL-6的水平,调节免疫功能,保护神经细胞。
关键词 脑缺氧;脑缺血;神经生长因子;白介素-6
新生儿缺氧缺血性脑损伤(neonatal hypoxic-ischemic brain damage , HIBD)是围生期中的胎儿或新生儿由于各种因素引起的缺氧缺血,脑血流减少或暂停而导致的一种疾病,是窒息后的严重并发症,是导致儿童神经系统伤残的常见原因之一。严重的缺氧缺血性脑损害可产生永久性神经系统缺陷,如脑瘫,智力低下,学习障碍,癫痫等[1]。动物实验和临床研究证实新生儿缺氧缺血性脑病患儿血清中多种细胞因子,趋化因子,粘附因子水平发生变化。IL-6是重要的细胞因子,我们利用神经生长因子NGF对HIE患儿进行早期干预,疗效甚佳,并观察到它对IL-6的水平有一定的影响,现报告如下。
1 对象与方法
1.1 研究对象 HIE组:30例,男16例,女14例,均为符合HIE诊断标准[1]的中重度HIE患儿。正常对照组:30例,同期出生的窒息的正常新生儿,男17例,女13例。 神经生长因子早期干预组:30例,男16例,女14例,均为符合HIE诊断标准的中重度HIE患儿,在家属同意下,出生24 h内即开始使用神经生长因子NGF 2 000 U肌注,1次/d,共10 d一个疗程。三组胎龄均为37 W～42 W,出生体重2 500 g～4 000 g。
1.2 实验仪器及试剂来源 常温匀速离心机,37 ℃恒温水温箱,高精度移液器,EP-doof管,酶标仪,IL-6试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司,神经生长因子NGF购自厦门北大之路生物工程有限公司。
1.3 方法 对所送患儿生后1 d、3 d及7 d抽取股静脉血3 mL,静置30 min后,在室温条件下,经离心机以3 000 转/min的速度匀速离心15 min后,留取上清液,存-80 ℃冰箱保存待检,采用ELISA(酶联免疫吸附试验)方法检测血清,最后经酶标仪在450 nm处读取OD值,并在标准曲线上查出每一样的浓度值。
1.4 统计学分析 结果以均数±标准差(x±s)表示,所有数据经SPSS 10.0统计分析软件进行分析处理,各组患儿在性别,胎龄,体重方面的差异采用均衡性检验,各组IL-6的浓度采用方差齐性检验,方差分析,两两之间用q检验。
2 结果
血清IL-6水平:中重度HIE组与正常对照组比较,生后1 d、3 d、7 d IL-6均低于正常水平,但随着时间推移,逐渐恢复正常水平。神经生长因子干预组与中重度HIE组比较,IL-6水平升高,见表1。
表1 各组患儿生后1 d、3 d、7 d IL-6浓度比较(略)
注: a vs b: P<0.05, b vs c:P<0.05
3 讨论
IL-6与新生儿免疫功能密切相关,是一种多功能细胞因子,可促进T、B淋巴细胞成熟与分化及NK细胞和CTL细胞的免疫活性, IL-6水平减低可进一步下调新生儿的免疫功能[2]。缺氧缺血可引起免疫功能紊乱,而免疫功能紊乱又进一步导致和加重新生儿缺氧缺血性脑损伤。
在中枢神经系统内，IL-6主要由胶质细胞产生，包括小胶质细胞和星形胶质细胞。脑缺血及缺血再灌注后小胶质细胞迅速激活，增殖，并聚集于损伤部位。小胶质细胞激活在脑缺血再灌注中的作用具有双重性。①是神经营养作用，可转化为吞噬细胞，吞噬死亡神经细胞残骸和变性的神经突触，合成新的神经结构;分泌IL-6，α-干扰素，转化生长因子(TGF)-β，胰岛素样生长因子-1和碱性成纤维细胞生长因子等神经营养因子，促进组织修复，支持神经元的存活。②是神经细胞毒性作用：通过与神经细胞的直接接触，胞内吞噬神经细胞，另外释放，分泌一系列潜在的神经毒性物质和炎性因子，如氧自由基、超氧化物等而致脑损害[2]。星形胶质细胞具有抗原呈递和分泌细胞因子等作用。IL-6是一种重要的细胞因子。有实验[3]将IL-6直接注射至大鼠脑内，可明显减轻缺血性脑损害的体积，表明IL-6对HIBD脑组织有保护作用。在外周血清中,缺氧缺血时IL-6水平则是减低的。IL-6水平降低可削弱对缺氧缺血脑组织的保护作用。
缺氧缺血后神经营养因子(neurotrophic factors，NTF)分泌不足致神经元细胞受损，外源性神经营养因子可以使受损的神经元细胞得以修复。既往认为神经元细胞无再生能力，一旦受损不可能再生。近年来国内外学者[4，5]发现只要给予受损的神经元细胞适当的生长内环境，即予以神经营养因子，受损的神经元细胞是可以再生的。神经营养因子是由不同类型细胞产生的各种多肽片段，在外伤和炎症等高代谢状态下，它的合成增加，活性增强。此类多肽片段能够促进胚胎神经元的发育和成熟、维持成熟神经元的存活、促进损伤神经元的再生。其中神经生长因子NGF就是一种最重要的神经营养因子。本实验结果显示，神经生长因子能增加外周血清IL-6的水平，有利于缺氧缺血脑损伤的康复。
参考文献
[1] 金汉珍，黄德珉，官希吉.实用新生儿学.第2版.北京：人民卫生出版社，2000：624～631.
[2] 刘 敬，秦振庭.新生儿缺氧缺血性脑病的免疫学机制.国外医学儿科学分册，2001，28(4)：175～178.
[3] Lodhick SA, Tumbull AV, Rothwell NJ. Cerebral interleukin-6 in neuroprotective during permanent focal cerebral ischemia in the rat. J cereb Blood Flow Metab,1998,18(2):176～179.
[4] Aloe L，Iannitelli A. Neurotrophic factors and brain damage in hypoxic-ischemic encephalopathy: a role of nerve growth factor? Ann Ist Super Sanita. 2001，37(4):573～580.
[5] Kim DH，Zhao X，Tu CH，et al.Prevention of apoptotic but not necrotic cell death following neuronal injury by neurotrophins signaling through the tyrosine kinase receptor. J Neurosurg，2004，Jan，100(1):79～87.
作者单位 中山大学附属中山医院(528403)
