奥扎格雷在急性冠脉综合征中抗血小板作用的研究

　　作者：王琳,袁铭,李成祥　　作者单位：第四军医大学西京医院心内科,陕西 西安 710033

　　【摘要】目的通过对血小板活化指标血小板颗粒膜糖蛋白(CD62p)及血小板脂膜蛋白(CD61)与血浆假性血友病因子(vWF)的观测，探讨抗血小板药物奥扎格雷(Ozagrel)对急性冠脉综合征(ACS)患者血小板功能的影响。方法： 应用流式细胞术(FCM)和酶联免疫吸附试验(ELISA)测定60例ACS患者应用奥扎格雷治疗前后静脉血CD62p,CD61和血浆vWF的表达水平,对两者在ACS时的水平进行对比分析。同时设20例健康体检者做对照组。结果：CD62p值：ACS患者的为(85.02 ±7.22)%, 明显高于对照组(32.56 ±6.39)%(P<0.05),药物治疗后ACS组下降至(65.20±8.17)%(P<0.05),其水平变化与vWF、心绞痛和缺血ST-T改善一致;CD61表达量为(89.38 ±7.13)%, 与正常组比较差异无显著性(P>0.05),药物干预治疗前、后比较,差异亦无显著性(P>0.05)。结论：CD62p是血小板活化的敏感指标,且与vWF和临床症状改变一致。推测急性冠脉综合症患者应用奥扎格雷有进一步增强抗血小板的作用。

　　【关键词】 流式细胞术,血小板膜糖蛋白类,冠状动脉疾病

　　Abstract：Objective:To observe the anti-platelet effects of Ozagrel in patients with acute coronary syndrome (ACS) .Methods:CD62p,CD61 used as platelet marks from whole blood samples were measured by FCM and vWF was measured by ELISA method in 60 patients with ACS and 20 healthy peoples taken as control group.Results:The amount of expression of CD62p was(85.02±7.22) % in ACS patients group and (32.56±6.39) % in control group, there was significant difference between ACS group and control group(P<0.05) . The amount of CD62p declined to(65.20±8.17) % after treated with Ozagrel(P<0.05) . There was also significant difference of CD62p in ACS group between before and after intervention of Ozagrel(P<0.05). The amount change of CD62p in patients with ACS was relative to the improvement of angina pectoris and the changes of ST segments. However there was no difference of CD61 expression between ACS group and control group(P>0.05) . There was also no difference of CD61 before and after treatment of Ozagrel(P>0.05).Conclusion:CD62p is a sensitive index of platelet activation in ACS patients and there is excellent relationship among CD62p and vWF and clinical symptoms.

　　Key words： Flow cytometry;Platelet membrane glycoproteins;Coronary artery disease

　　急性冠脉综合症(ACS)的病理生理基础通常认为是冠状动脉斑块破裂所致。血小板参与动脉粥样硬化的形成，而血小板活化状态改变和血管内皮细胞损伤是引起冠状动脉闭塞的重要因素之一。血管假性血友病因子(von Willebran factor,vWF)是反映内皮功能的重要因子[1];除此之外，血小板颗粒膜糖蛋白能够反映血小板活化功能,而两者在ACS是否具有相关性仍不清楚。奥扎格雷(Ozagrel)作为咪唑衍生物，具有高度选择性抑制血栓素合成酶的作用，并且其显著性抑制作用基于血栓素A2对血管平滑肌的收缩及对血小板的聚集，而其对血管假性血友病因子及血小板颗粒膜糖蛋白水平的影响尚未见报道。本研究测定ACS患者被给予奥扎格雷干预前、后外周血中血小板颗粒膜糖蛋白(CD62p)和血小板质膜蛋白(CD61)的表达水平, 并与血浆vWF水平做对比分析研究，旨在探讨CD62p，CD61与vWF的关系及药物奥扎格雷治疗ACS过程中增强抗血小板的作用如何。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　入选研究对象为2005年10月至2006年12月在我院心内科住院治疗的ACS患者，共60例，年龄41～70，平均(63.5±6.5)岁,其中男35例,女25例,冠心病诊断依据2000年世界卫生组织(WHO)标准。ST段抬高性心肌梗死30例,非ST段抬高性心肌梗死5例,不稳定型心绞痛25例。正常对照组20例来自于体检的健康人群,年龄35～71，平均(53±7.1)岁,其中男11例,女9例。ACS对照组对象为2005年10月至2006年12月在我院心内科住院治疗的ACS患者，共20例，年龄41～70，平均(63.5±6.5)岁,其中男15例,女5例。两组研究对象在年龄、性别、冠心病家族史、高血压病、糖尿病、高脂血症、吸烟史等方面均无显著差异(P>0.05)，具有可比性。

　　1.2 方法

　　所有患者均服用阿司匹林、氯吡格雷等常规抗血小板治疗。治疗组在上述治疗基础上加用奥扎格雷(商品名:晴尔,海南碧凯药业有限公司,国药准字H20000216)160mg/d, 静脉滴注，3d。

　　所有研究对象采取清晨肘静脉血1.8 ml,加入含有0.2 ml枸橼酸钠抗凝试管中, 3 000 r/min离心5min, 取血浆置-20 ℃冰箱保存,统一测定vWF;同时采静脉血2 ml,加入含有1%依地酸二钾(EDTAK2)塑料试管中送检,2h内完成CD62p和CD61测试。ACS患者给予奥扎格雷160mg加入250 ml液体中,每日1次静滴，3d后重复上述采血过程,测定CD62p、CD61和VWF。CD62p、CD61的测定: 采用流式细胞仪测定。单克隆抗体(McAb)：由Biopool生物公司提供。流式细胞仪采用美国贝克曼-库尔特公司生产的ELITE型进行检测。vWF的测定:采用双抗体夹心固相酶免疫试验方法。冻干抗人vWF单克隆抗体由北京东亚免疫技术研究所提供。采用美国伯勒公司550酶标光度仪检测吸光值。

　　1.3 疗效判定标准

　　心绞痛阈值判断标准以连续攀登居民楼的楼层为标准, 患者连续登上2 层楼发作心绞痛, 阈值记为2, 登上7 层楼不发作心绞痛记为10; 心绞痛发作频率指24 h 内发作心绞痛的总次数, 24 h 内无心绞痛发作则记为0 ;缺血ST-T 数是指12 导联所有缺血ST-T 的改变次数之和。

　　1.4 统计学处理

　　对同一个研究对象,做治疗前后配对资料t检验,采用统计软件SPSS 11.0, 数据用均数±标准差(x±s)表示,对于心绞痛及ST-T 的变化, 治疗前后采用配对资料的秩和检验。 P<0.05为差异有显著性。

　　2 结果

　　CD62p在外周静脉血中的表达较正常对照组明显增高(P<0.05), 与vWF的变化一致;经药物治疗后CD62p和vWF均有程度不同的降低(P<0.05,表2);CD61在外周静脉血中的表达与正常对照组比较虽略有增高,但两者比较差异无显著性(P>0.05);药物治疗后的变化与治疗前比较差异也无显著性(P>0.05),见表2;ACS对照组CD62p,CD61 及vWF在奥扎格雷用药后水平略有增高，但差异无显著性(P>0.05)，见表3。

　　表2 急性冠脉综合征(ACS)两组患者治疗前后CD62p、CD61 及vWF水平的比较(略)

　　注：实验组治疗前、后均为60例。治疗前、后比较*P<0.05;与对健康照组比较△P<0.05。

　　60 例患者经硝酸酯加奥扎格雷钠治疗后心绞痛阈值由95 上升为138 (P<0.05) 、发作频率由115 次下降为26 次(P<0.05) 、心电图ST-T 变化值由118 下降为76 (P<0.05)。

　　表 3 ACS对照组患者CD62p、CD61 及vWF用药前后水平的变化(略)

　　注：用药前、后比较P>0.05。

　　表4 奥扎格雷组与ACS对照组临床疗效分析(略)

　　3 讨论

　　CD62p是血小板活化依赖性颗粒膜蛋白选择素，属于选择素家族粘附分子,当血小板活化时α颗粒迅速与血小板膜融合,在血小板的膜表面表达成为血小板活化的特异标志，介导中性粒细胞和单核细胞对活化血小板和受损内皮细胞的粘附[1]。 vWF是由内皮细胞及平滑肌细胞合成的多聚体糖蛋白,首先作为凝血因子Ⅷ的载体稳定其活性，其次介导血小板粘附、聚集和血栓形成，具有内皮特异性及良好的稳定性,起着血管内皮损伤的识别作用,是反应内皮功能特异性的可靠指标,在心肌缺血发生中有重要作用[2，3]。本研究结果显示,ACS患者CD62p、vWF明显高于正常对照组,表明ACS患者血小板活性增高,在ACS发生及发展过程中同时伴随着内皮功能障碍,是冠心病患者急性血栓形成病理生理基础之一，而血小板合成或释放的血管活性物质参与诱导冠状动脉痉挛[4，5]。

　　本研究中CD62p的增高与血小板数量无关联性,而与vWF的水平相一致,说明两者共同在ACS的发生和发展中发挥着重要的作用,可能是ACS发生的活动性标志物。CD61血小板质膜糖蛋白作为整合素家族的钙依赖性复合物，在本研究中无论药物治疗前后,还是与对照组比较，差异均无显著性,可能与其在血小板活化过程中主要是发生分子构象改变有关。

　　奥扎格雷能抑制TXA2生成及促进PGI2的生成, 具有抗血小板集聚和改善内皮功能的作用[6，7]。本研究采用奥扎格雷治疗ACS患者3 d后,临床心肌缺血的症状明显改善,血小板膜活性蛋白标志CD62p、vWF水平均明显下降,与治疗前比较有明显差异,表明药物干预治疗后临床症状的改善与内皮功能的稳定有关,而内皮功能的稳定避免诱发血小板活化。可以看出，动态观察CD62p、vWF指标的变化,可能对监测ACS患者病情变化、判断预后具有一定的意义;检测血小板活化标志蛋白,可以为选择治疗用药提供依据。但上述参数能否作为冠心病患者病情程度及预后判别的有用指标,尚待今后进行更大规模和更深入的研究。

　　【参考文献】

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　　[2]Saving KL, Mankin PE.Further in vestigation of PLT expression of CD62 and CD63 by flow cytometry might reveal it to be a valuable tool in predicting impending thrombus formation[J]. J Pediatr Hematol Oncol, 2003,25(3):266-269.

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