新生儿缺氧缺血性脑病血清NSE变化与意义的研究

作者单位：哈尔滨医科大学儿科学硕士研究生，现齐齐哈尔医学院第一附属医院儿科 哈尔滨医科大学附属第二医院  【摘要】  目的 探讨新生儿缺氧缺血性脑（HIE）血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）动态变化特征以及在新生儿HIE的意义。方法 选择新生儿病房HIE新生儿41例，其中轻度18例，中度14例，重度9例，并以10例正常足月新生儿做为对照，采用酶联免疫分析法（ELISA），检测41例HIE患儿生后3天内、7天、14天血清NSE水平，及10例正常新生儿生后脐动脉血清NSE水平。结果 轻度HIE组与对照组比较无明显差异（0.250.05）；中度组和重度组血清NSE 3天内、7天、14天比较有显著差异（P<0.001）。结论 血清NSE水平与HIE的病情严重程度相关，可作为早期诊断中、重度新生儿缺氧缺血性脑病及病情发展的客观指标。 【关键词】  缺氧缺血性脑病 神经元特异性烯醇化酶 新生儿    新生儿缺氧缺血性脑病（Hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE）是指各种围产期窒息引起的部分或完全缺氧、脑血流减少或暂停而导致胎儿或新生儿的脑损伤。早产儿发生率明显高于足月儿，但由于足月儿在活产新生儿中占绝大多数，故以足月儿多见。是我国新生儿急性死亡和慢性神经系统损伤的主要原因。故早期诊断及分度对指导治疗、判断预后、早期采取干预措施、降低儿童致残率有着重要的意义。神经特异性烯醇化酶(neuronspecific enolase, NSE) 是神经元损伤的敏感性标志物, 具有较高的特异性, 在中枢神经系统肿瘤、脑梗死、脑缺血、感染性疾病、多发性神经病、蛛网膜下腔出血、脑外伤等神经系统疾病中显著升高，本研究检测不同程度的HIE新生儿血清NSE，观察其在疾病不同时段的变化，研究血清NSE在新生儿HIE的意义。　　1  资料与方法　　1.1  一般资料 　　观察组选择哈医大二院和齐齐哈尔市儿童医院以及齐齐哈尔医学院第一附属医院2007年3～9月新生儿病房HIE新生儿41例，其中轻度18例，中度14例，重度9例，并以齐齐哈尔医学院第一附属医院同期出生的10例正常足月新生儿做为对照，两组新生儿间胎龄、性别、分娩方式、出生体重均无显著性差别（P>0.05）。HIE诊断、临床分度及治疗均按照人民卫生出版社出版的全国高等学校教材《儿科学》第六版中有关章节为标准。　　1.2  方法　　1.2.1  标本采集  　　对照组在生后取脐动脉血2 ml，HIE组在生后3天内、7天、14天股静脉穿刺取血2 ml，溶血标弃之，3 000 rpm/min离心10分钟，分离血清取上清液，置-20 ℃冰箱中保存。　　1.2.2  标本检测 　　NSE采用酶联免疫测定法，由北京北方公司提供的美国ADL公司生产的NSE试剂盒。严格按照试剂盒说明书进行操作。　　1.3  统计学处理 　　数据以（x±s）表示，两组数值的比较用均数分析，t检验，P<0.05有意义；三组数值的比较用方差分析，F检验，P<0.05有意义。　　2  结果　　2.1  轻、中、重度HIE组3天内血清NSE分别与对照组血清NSE比较  轻度HIE组与对照组比较无明显差异（0.25 　　2.2  轻、中、重度HIE组之间3天内血清NSE比较，有显著差别（P<0.001）  见表2。表2  轻、中、重度HIE组之间血清NSE水平（3 d）方差分析（略）　　2.3  新生儿HIE轻、中、重度组3天、7天、14天NSE组内比较，方差分析结果  轻度组3天、7天、14天比较，血清NSE无明显差别（P>0.05）；中度组和重度组血清NSE 3天内 、7天、14天比较有显著差异（P<0.001）。见表3。表3  不同程度HIE患儿血清NSE水平方差分析（略）

　　3  讨论

　　3.1  NSE是糖酵解途径中的关键酶,它催化α-磷酸甘油酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸。其相对分子质量为95 000 ,同工酶有αα、ββ、γγ、αβ、αγ,免疫组化研究表明,这些同工酶均存在于细胞质中,γγ型特异性地存在于神经元和神经内分泌细胞中,故命名为NSE。NSE占脑全部可溶性蛋白的1.5%［1］,在血浆和脑脊液中存在的NSE ,分别称为血液神经特异性烯醇化酶(S-NSE)和脑脊液神经特异性烯醇化酶(CSF-NSE)。脑组织缺氧缺血时神经元细胞可发生变性坏死,同时其血脑屏障通透性增加,NSE 可释放到血和脑脊液中,使S-NSE和CSF-NSE水平升高,因此S-NSE和CSF-NSE可间接判断神经元损伤的程度和对预后的估计［2］。Barone等［3］发现,脑缺血前NSE尚存在于细胞质内,缺血24 h后,梗死区NSE弥散分布到细胞隙中,缺血区一些皱缩及尚未死亡的受损神经元内可见散在的NSE,尤其重要的是不仅在缺血区血管,而且对侧大脑半球的血管内也出现了NSE,提示NSE可从缺血损伤的神经元“漏出”并能透过血脑屏障进入体循环,因而可在外周血中测定S-NSE。动物实验发现，血清中NSE水平在发生氧缺血后明显增高［4］，但受损神经元内NSE水平却明显降低［5］，进一步血清NSE水平增高与受损神经细胞的崩解坏死致NSE从细胞内溢出有关。由于临床上频繁采集脑脊液不方便,也不易被患儿家属所接受,因此找到一个测量血中反映脑损伤的标志来代替脑脊液的标志更重要,因为血样可随时采集,其不受升高的颅内压的影响。陈琼等［6］研究发现，无论是正常健康儿童，还是HIE患儿，血清及脑脊液中NSE的变化是呈正相关，因而完全可以通过检测血清中NSE水平来反映大脑神经元和神经胶质细胞受损的情况。由于血细胞的NSE 水平较脑细胞低得多,至少相差30倍［3］,故S-NSE上升更能反映神经细胞的损伤。

3.2  最近国内外对缺氧缺血性脑损伤发病机制的研究表明，缺氧缺血使脑血流改变导致脑损伤，慢性和部分缺氧缺血，体内血流出2次重新分配，保证代谢最旺盛部位，大脑皮层失状旁区及其下部分的白质最易受损，而急性完全性缺氧缺血则不发生血流重新分配，脑损伤发生在基底节等代谢旺盛的部位。缺氧和高碳酸血症还可导致脑血管自主调节功能障碍，加重脑损伤。同时脑组织代谢发生改变，脑组织无氧酵解增加，组织中乳酸堆积、能量产生急剧减少，最终因能量衰竭，出现一系列使损害进一步恶化并导致脑细胞死亡的瀑布样反应，钠-钾泵和钙泵功能不足，细胞毒性水肿；钙离子通道开启异常，神经细胞内钙离子超载；自由基生成增多；兴奋性氨基酸产生的毒性作用，以及脑血流调节障碍等，最终导致脑细胞水肿、凋亡和坏死。 当前对缺氧缺血性脑病的诊断主要是根据病史及临床表现并结合CT、经颅多普勒超声等检查，往往有一定的局限性，也不利于动态推测病情变化、提供及时治疗及判断预后。

　　3.3  本研究发现，HIE患儿在3天内血清NSE水平最高，这与刘颖［7］的研究一致。且不同程度HIE患儿3天内血清NSE比较，中度组明显高于轻度组，重度组明显高于中度组，临床分度越重，NSE值越高，这与国内外学者的研究一致［8-12］，提示NSE与脑损伤程度呈正相关，血清NSE能够反映HIE患儿的病情轻重。研究中还发现，随着治疗天数的增加，NSE水平逐渐下降，中度组生后7天降至对照组水平附近，略高于对照组，而比生后3天内显著下降。重度组7天与3天比较也有显著下降，而14天进一步明显下降，14天仍明显高于对照组，提示血清NSE升高持续时间长，疾病程度较重，恢复过程较慢，说明NSE能反映HIE患儿的病情的进展、治疗情况、转归情况。HIE轻度组与正常对照组NSE无差别，其原因是可能轻度HIE患儿神经元多为变性、水肿，坏死较少，NSE释放较少。综上所述，血清NSE水平与HIE的病情严重程度相关，可作为早期诊断中、重度新生儿缺氧缺血性脑病及病情发展的客观指标。

【参考文献】  　　［1］Jacobi C, Reiber H. Clinical relevance of increased neuron- specific enolase concentrain in cerebrospinal fluid［J］. Clin Chim Acta,1988,177(1):49-54

　　［2］Hatfeld R,Mckernan R. CSF neuron- specific enolase as a quantitative marker of neuronal damage in a rat stroke model ［J］.Brain Res,1992,577(2):249-252

　　［3］Barone FC.Nenron-specitic enolase increase in cerebral and systermic circulation follwing focal is chemia ［J］. Brain Res,1993,623(1):77-82

　　［4］Kecskes Z,Dunster KR,Colditz PB.NSE and S-100 after hypoxia in the Newborn pig［J］. Pediatr Res, 2005,58(5):953-957

　　［5］Daval JL,Pourie G,Grojean S, et al.Neonatal hypoxia triggers transient apoptosis followed by neurogenesis in the rat CA1 hippocampus［J］. Pediatr Res,2004,55(4):561-567

　　［6］陈琼，黄志.儿童血清和脑脊液中NSE正常参考值的测定及其临床应用价值［J］.儿科药学杂志，2004，10（2）：14

　　［7］刘颖.新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）血清NSE、NPY水平变化的临床研究［J］.中国妇幼保健，2006，21：2 826

　　［8］Elimian A,Figueroa R,Verma U,et al.Amniotic fluid neuron-specific enolase: a role in predicting neonatal neurologic injury［J］. Obstet gynecol,1998,92(4 Pt 1):546-550

　　［9］Kruger K,Hallerg B,Blennow M, et al.Predictive value of fetal scalp blood lactate concentration and PH as markers of neurologic disability［J］.Am J Obstet Gynecol,1999,181(5 Pt 1):1 072-1 078