血液HBV、HCV和HIV核酸检测在临床输血中的应用

　　自⒛世纪80年代初报道艾滋病可经输血传播以来,血液安全日益受到国内外医学界的关江,其中HⅣ、HBV和HCV三种病毒感染危害尤其严重,被世界各国列为献血者及临床供应血液的必检项目。1993年卫生部颁布的《血站基本标准》规定,血站使用酶联免疫(ELISA)法检测HBsAg。随着试剂盒质量的不断提高,输血感染病毒的风险已降到非常低的程度,但由于EI'ISA检测病毒抗原或抗体,其“窗口期”、病毒变异、非典型性血清转阳过程等因素造成的漏检往往在所难免,这就给输血安全带来较大的隐患。　　为缩短血液感染病毒的检测“窗口期”,降低经输血途径传播病毒的风险,国内外越来越多的采供血机构开始在血液筛选中引人核酸扩增技术(Nuc1cicacidamplificationtesting,NAT)检测∶同时临床工作中,输血常规检查虽然已由原来的酶联免疫(Enzym←linkedimmunosorbentassay)法检测,逐步改进为化学发光法为主,但是技术的进步仍然不能完全避免输血风险的发生,因此在有条件的大型综合医院开展灵敏度更高的病毒核酸检测已经显得尤为重要。　　1材料与方法　　1.1仪器设各与试剂ChcmagicMagneticSeparationModuleI核酸自动提取系统,ABI7500实时荧光定量PCR仪,罗氏E170电化学发光分析仪,-70C低温冰箱,罗氏HBSAG、HCVAB禾口HIVAB检测试剂盒(试剂批号:HBsAG0016427⒈00167912,HCVAB00163,430-00166980,HIVABOO16o958-00167479),达安基因HBV、HCV、HIV1病毒核酸检测试剂盒(PC艮荧光探针法)。　　1.2样本来源我院输血科2010-05-2011-05收到的武汉市血液中心来源血液制品3027份，以及2012-O1-2012-07的输血常规检测中化学发光法检测HBSAG,HCVAB和HIVAP均为阴性的血液2810例1.3血清学筛查武汉市血液中心来源血液制品的检测由血液中心完成，按卫生部要求作HBV,HCV,HIV、梅毒、A工T检测.用2种试剂检测2次.筛查均为阴性。湖北省中山医院输血常规检测标本电化学发光法检测HBSAG,HC:V:AB和HIVAB均为阴胜。　　1.4应用核酸扩增技术对上述样本分别进行检测.　　1.4.1检测原理采用电脑控制程序实现核酸检测标本的混合加样与磁珠法提取病毒核酸，利用已知阳性、阴性对照和卫生部临床检验中心发放的室内质控物同步操作提取病毒核酸进行内部质量控制，利用荧光PCR技术进行病毒核酸检测，并同时采用内标技术进行质量控制.　　1.4.2检测技术路线将各项血清学筛查均合格的血清以16人份混合后作HBVDNA,HCVRNA和HIVRNA联合检测.混合血样阳性时再作单人份拆分检测。　　1.5复检试验　　对于NAT阳性而血清学筛查为阴性的样本，用备用管作联合NAT复检，以排除原检测管交叉污染可能造成的NAT假阳性，并使用ABI700。实时荧光定量PCR仪(核酸检测试剂由达安基因提供)进行单人份复检，以排除非特异性NAT结果;同时使用罗氏El%0电化学发光分析仪复检血清学结果。　　2结果　　武汉血液中心302%例血液制品运用EI_ISA法和NAT法未检出HvV,HCV和HIV阳性我院内输血常规检测患者检出HBVDNA阳性病例4份1400，均为低拷贝阳性.HCVRNA和HIVRNA核酸阳性病例均未检出。医院内输血常规检测2810患者，血清学筛查均为阴性.HBVD-NA检测阳性4例.二种方法比较差异有统计学意义。核酸阳性标本复检血清学检测结果见表1。　　3讨论　　目前，我国采供血机构采用ELISA进行检测病毒抗原或抗体，使用两种不同试剂平行检测,以提高检测结果的可靠性。虽一直在不断地改进和提高检测的灵敏度和特异性.但每年仍有输血后并发肝炎病例的报道据美国研究证实，输注每单位血液制品传播HBV,HCV和HIV的残留冈险分别为1:66000,1:10300。和1:676OOO.　　1995-1998年上海市输血后肝炎调查研究发现，L例输血后肝炎病例均是输用”窗口期”感染的血引起二，因此，ELISA的“窗口期”漏检是当前影响血液安全性的重要因素，对于献血者的筛选.单纯检测抗原或抗体不能有效地保障血液安全。本实验中，武汉市血液中心来源的血液制品未检出HhV,HC:V和HIS'核酸阳性.虽然存在样本量较小的缺陷，但是也说明随着无偿献血政策和亲友互助献血政策的有效实施，各地采供血机构对一血液质量的持续重视.以及血液制品检测方法的改进，甚至上海一、北京一、深圳工等地区的采供血机构已经开始采用核酸检测技术对献血员进行筛检.血液制品的质量和安全性已大幅提高.为临床输血安全提供了极大的保障我国为HBV高流行区，在EL工SA检测合格标本中，深圳HBVNA丁阳性检出率为1'114(5人份混合，国产试剂),1:一3724(21人份混合;济南为1/1619枪4人份混合.国产试剂)a-,}.香港地区为1/2599(采用Roche5201MPX6人份混合检测以及(hironProcleixL?ltri。单人份检测尸一;北京血液中心于2007年检测20378份血液HBV/HCVHIV三项联合NAT检测(6人份棍合，少量为单检).共检出N}T阳性血液11份(1/1433户。在本研究中，乙型肝炎病毒的隐匿性感染情况较为突出，占到1/701.可能与本实验标本来源为医院住院患者有关，当然这需要在今后的工作中加大检测样本量来进一步证实。　　临床工作中，大型三甲医院的输血前常规检查基本已由原来的ELISA法检测.逐步替代为化学发光法为主。但由于化学发光法检查的仍然是相应病毒的抗原或抗体，而“‘窗口期”、病毒数量和病毒变异等因素均可导致HEV,HCV和HIV的不能检出，因此技术的进步也不能完全避免漏检的发生.对于献血者的筛选和受血者的输血前常规检查，单纯检测抗原或抗体不能有效地保障输血安全。有研究表明，混合血样NAT检测，可将HBV,HCV和HIV感染的平均“窗口期”分别由56d,70d,22d,缩短为41d,12d和11d。尽管NAT从理论上并不能完全消除感染“窗日期”，但病毒核酸转阳之前的血液传染性极低，可以有效地预防经输血传播病毒性疾病，为临床用血安全提供有力保障。但是临床上仍然可能出现以下情况，由于输血治疗患者抵抗力相对较弱.极易在输血治疗前就接触到了可导致疾病的病毒，在体内形成了低拷贝的病毒复制，但是没有表现出临床症状，常规检测手段也不能有效检出.但随着身体素质和抵抗力的降低，一段时间后就可能会出现感染性疾病的发生，如果该患者接受过输血治疗行为，就有可能导致医疗纠纷的发生。在现有举证倒置体制，以及现有检测方法存在技术性缺陷的前提下，医院往往要承担举证不力的责任，因此医院有必要进一步提高输血前检查的灵敏度和准确度。　　病毒核酸检测技术是目前认为最灵敏和准确的检测方法，临床上应大范围开展。有条件的大型医院在进行输血前检查时采用核酸检测技术，一方面可以及早诊断，及时治疗，另一方面可以有效屏蔽漏检风险，避免医疗纠纷的发生。　　参考文献　　1 王迅,高峰,张钦辉;上海地区输血后丙型肝炎感染的历史与现状[J];中国输血杂志;2001年06期。　　2 王迅,郑岚,张晰,凌冰,许莉萍,黄宇闻,陆萍,莫琴,韩永年,高峰;核酸扩增技术在上海血液筛检中的初步应用[J];中国输血杂志;2003年03期。　　3 刘德春;孙波;徐群;李京;吕红娟;乔文本;;核酸检测技术与酶联免疫检测技术在血液筛检中的初步应用比较[J];中国输血杂志;2007年01期。　　4 任芙蓉;王憬惺;赵海燕;文国新;张远志;姚富柱;高国静;严力行;江朝富;白旭华;美黑丽·铁木尔;涂源泉;朱发明;郑优荣;崔莉;龚晓燕;吕秋霜;刘长利;郑鹏;NESS Paul;SHAN Hua;;我国5城市合格献血者血液HIV及HCV残余风险研究[J];中国输血杂志;2007年06期。　　5 刘强;钱榕;彭继红;后平钦;李国良;;病毒核酸检测在采供血机构血液筛查中的应用[J];实验与检验医学;2010年04期