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软坚护肝片的急性毒性及一般药理学研究

发表时间:2014-08-11  浏览次数:682次

软坚护肝片由山豆根、黄芪、黄芩等⒓味中药组成,运用现代制剂技术研制而成。动物实验表明,软坚护肝片具有减轻四氯化碳(Cα4)和硫代乙酰胺所致小鼠肝损伤、降低小鼠血清谷丙转氨酶活性、抑制HB盐g、HBeAg的作用[1],并可以改善大鼠肝纤维化肝脏胶原纤维面积、纤维化程度和降低血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原水平,对大鼠肝纤维化有很好地预防作用口,临床观察也表明对肝硬化有较好疗效[3]。本文观察软坚护肝片对实验动物的急性毒性,以及对中枢神经系统、心血管系统、呼吸系统的影响,为临床合理用药提供依据。

1材料与方法

1.1实验动物清洁级昆明小鼠,雌雄兼用,体质量18-22g;清洁级SD大鼠,雌雄兼用,体质量200~250g。小鼠、大鼠均由广西医科大学实验动物中心提供,合格证:SCXK桂20⒆o002。动物按性别分笼饲养于有空调的实验动物室内,温度19~”℃,相对湿度40%~gO%,自由饮水并喂标准颗粒饲料。

1.2药物与试剂软坚护肝片由广西医科大学制药厂制备,批号:20111201,0.31g/片,临床成人日用量0.0能g/炖;乌来糖由晶欣生物科技公司生产,批号:201O0219;肝素由北京索莱宝科技有限公司生产,批号:201007冗;戊巴比要钠由北京索莱宝科技有限公司生产,批号:20LO0412。上述药物分别用生理盐水溶解,4℃保存各用。

1.3仪器ZZ‘小鼠自主活动记录仪由成都泰盟科技有限公司生产;YⅡ-10B小鼠转轮式疲劳仪由山东益延科技发展有限公司生产;BL砰20s生物机能实验系统由成都泰盟科技有限公司生产。

1.4方法

1.4.1软坚护肝片对小鼠急性毒性[45]昆明小鼠TO只,采用灌胃给药法,给药前禁食15h9不禁水。软坚护肝片0.“2g/kg为初试剂量,单次给药;每日观察小鼠进食、活动情况,并称量小鼠体质量,观察2周,若无明显毒性反应,进食、活动正常,则进行下一步实验。分别给予0.能g/炖、1。zg/kg、2.鲳g/kg、4.%g/kg9.呢g/kg灌胃给药,方法同上述实验。若某剂量灌胃后实验动物全部死亡,说明该剂量≥100%致死量,则选取该剂量的0,T~s倍剂量进行实验,方法同上。若各组实验动物均无明显毒性反应,进食、活动正常,则按最大给药量法进行实验。最大给药量法:取昆明小鼠碉只,雌雄各半,按随机数字表法分为两组,即最大给药组(19.弘g/kg)和溶媒对照组(按体重给予等体积生理盐水),各zo只。两组灌胃容积均为20ml/kg,给药1d,2沉/d。观察给药后⒕d内小鼠体质量、饮食、外观、行为、分泌物、排泄物、死亡情况和中毒情况。观察期结束,对所有实验动物进行大体解剖,发现器官体积、颜色、质地改变时,进行组织病理学检查。

1.4.2对小鼠中枢神经系统的影响:(1)对小鼠一般行为和自主活动的影响[5]:昆明小鼠40只,雌雄各半,按随机数字表法分为4组,即软坚护肝片低、中、高剂量组(剂量分别为0.31、0.Ω、1.以g/kg)和溶媒对照组(按体重给予等体积生理盐水),每组10只。各组均灌胃给药,灌胃容积为20nll/kg。首先取小鼠置于ZZ小鼠自主活动记录仪的实验箱内,使其适应环境5min,然后开始计算时间,观察并记录小鼠5`min内活动、站立次数,作为给药前的对照值。然后将小鼠取出给药,观察给药后一般行为表现、步态、流涎、肌颤、瞳孔变化等情况。用zZ乇小鼠自主活动记录仪记录小鼠给药后sO、ωmin的活动、站立次数。比较各组给药前后活动、站立次数和差值,评价软坚护肝片对小鼠自发活动影响。(2)对小鼠运动协同能力的影响:筛选合格的(YLs-10B小鼠转轮式疲劳仪适应1次,跑步时间5min,且电击次数大于0小于10O次者合格)昆明小鼠碉只,雌雄各半,按随机数字表法分为4组,即软坚护肝片低、中、高剂量组(剂量分别为0.31、0。Ω、1.以g/kg)和溶媒对照组(按体重给予等体积生理盐水),每组10只。各组均灌胃给药,灌胃容积为20nl/kg。首先取小鼠置于YLS-10B小鼠转轮式疲劳仪中观察记录5min内小鼠电击次数,作为给药前正常值。然后,取出小鼠并给药,ωmin后置于YLs-10B小鼠转轮式疲劳仪中观察记录5min内小鼠电击次数。比较各组给药前后电击次数及差值,评价软坚护肝片对小鼠运动协调的影响。(3)软坚护肝片对小鼠睡眠协同作用的影响[6]:昆明小鼠硐只,雌雄各半,按随机数字表法分为4组,即软坚护肝片低、中、高剂量组(剂量分别为0.53、5,娴、10.55g/吒)和溶媒对照组(按体重给予等体积生IlT艹水),每组10只。各组均灌胃给药,灌胃容积为20ml//kg。各组给药ω耐n后,按ωmg/砣腹腔注射3mg/ml戊巴比妥钠溶液,记录各组动物入睡潜伏期及持续睡眠时间。以背部向下姿势保持20s以上,并且15min内不⒕现翻正反射的小鼠判断为反正反射消失,记录注射戊巴比要钠后至小鼠反正反射消失时间作为入睡潜伏期,反正反射消失至觉醒的时间为持续睡眠时间。比较对照组和给药组之间人睡潜伏期、持续睡眠时间。

1,4。3软坚护肝片对麻醉大鼠心血管、呼吸系统的影响[7]:SD大鼠硐只,雌雄各半,按随机数字表法分为4组:即软坚护肝片低、中、高剂量组(剂量分别为0.免、5.20、10.55g/kg)和溶媒对照组(按体重给予等体积生理盐水),每组10只。首先用20%乌拉坦溶液3ml/kg腹腔注射麻醉,固定于手术台,气管插管连接呼吸换能器记录呼吸频率和振幅;左总动脉插管连接张力换能器记录血压;腹中线切口做十二指肠插管以便给药。术后稳定10min,记录大鼠呼吸、血压作为给药前正常值。然后十二指肠单次给药,给药后10、2O、60、80、120、180min测定大鼠心率、呼吸、血压等指标,记录实验结果,比较各组给药前后大鼠血压、呼吸。

1,5统计学分析采用SPs19,0软件进行统计分析,计量资料以x±s表示,多个样本均数比较采用方差分析,重复测量资料的比较采用重复测量资料的方差分析,以P<0.O5为差异有统计学意义。

2结果

2.1软坚护肝片对小鼠急性毒性软坚护肝片按0.62g/kg、1.24g/kg、2.48g/kg、4,96g/kg、9.92g/kg给予小鼠灌胃,观察2周,均无明显急性毒性反应。小鼠口服最大给药量为19.g/炖,相当于临床成人日用量的320倍,给药后出现短暂性活动减少,2h后恢复;给药后最大给药组排便为黑色,便粒干而硬,给药2d后恢复正常;给药后14d内各组小鼠体质量、饮食、外观、行为、分泌物、排泄物与对照组相比,无明显差别,观察期结束,各组小鼠解剖肉眼未发现器官颜色、大小、质地改变。

2.2软坚护肝片对小鼠自主活动的影响4组小鼠活动次数、站立次数比较,差异无统计学意义(活动次数:F=0.zOT,P=0.g91;站立次数),表明低、中、高剂量软坚护肝片对小鼠自主活动无明显影响。见表1。

2,3软坚护肝片对正常小鼠运动协调能力的影响4组小鼠给药前、给药后电击次数比较,差异无统计学意义(P>0.O5),表明低、中、高剂量软坚护肝片对小鼠运动协调能力无明显影响。见表2。

2.4软坚护肝片对正常小鼠睡眠潜伏期和持续睡眠时间的影响4组小鼠睡眠潜伏期、持续睡眠时间比较,差异无统计学意义(P>0.05),表明低、中、高剂量软坚护肝片没有明显缩短睡眠潜伏期和延长持续睡眠时间的作用,且软坚护肝片与戊巴比妥钠无协同作用。见表3。

2.5软坚护肝片对麻醉大鼠心血管和呼吸系统的影响各组大鼠的心率、血压和呼吸均在正常范围内4组大鼠、收缩压、舒张压、平均动脉压、呼吸频率、呼吸幅度比较,差异无统计学意义(心率:F=2.∞8,P=0.132;收缩压:舒张压:F=0。122,P=0.甄;平均动脉压:F=1.3,P=0.274;呼吸频率:F=1.曳%P=o·220;呼吸幅度:F=1,∝8,P=0.篼1),这提示低、中、高剂量软坚护肝片对麻醉大鼠呼吸、血压无明显影响。见表4。

3讨论

多数中药、天然药物作用相对温和,中药复方制剂通过合理的配伍,也可能使毒性减轻。中药处方来源有些是古方,有些是医院制剂或临床经验方,有一定的临床应用基础[7]。由于给药浓度和给药体积的限制,只能测定最大给药量时,可不必进行其他毒性反应剂量的测定。此时,最大给药量法成为研究中药复方急性毒性的替代研究方法。安全药理学主要研究药物及其代谢产物在治疗剂量或治疗剂量以上的暴露水平时,潜在不期望出现的对生理机能的药物作用,主要观察药物对中枢神经系统、心血管系统和呼吸系统的影响[9]。在新药研究开发过程中,急性毒性、一般药理学和长期毒性是评价药物安全性的重要组成部分。通过一般药理学研究,可以为临床安全用药提供参考信息,也为长期毒性试验的设计提供参考。本研究采用经典的实验方法,如转轮法、睡眠协同法、自主活动记录等,研究软坚护肝片对小鼠的活动次数、站立次数、被电击次数、睡眠潜伏期和持续睡眠时间等的影响,评价软坚护肝片对小鼠自主神经系统的影响。本文结果表明,软坚护肝片对心血管系统、呼吸系统、自主神经系统均无明显影响(P>0.O5)。

参考文献

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[2]郭庆渠,梁水庭,梁雪婧.软坚护肝片预防肝纤维化形成的实验研究[J].广西医科大学学报,2007,(02):261-263.

[3]黎乐群,梁水庭,巫山.小肝癌切除术后复发的监测及复发病灶再治疗的价值[J].实用肿瘤杂志,1994,(01):28-29.

魏伟,吴希美,李元建.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2010.383-393,504-510.0

[4]贾鹰钰,李国辉,张平.黄连及黄连解毒汤对小鼠的急性毒性研究[J].中国药学杂志,2011,(18):1400-1404.

[5]朱慧,张良,喻斌.荆芥内酯的一般药理学研究[J].中国实验方剂学杂志,2011,(06):237-240.

[6]中国食品药品监督管理局.中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则[OL].http://www.cde.org.cn/zdyz.do?Method=largePage&id=2086,2012.

[7]曾晓会,赵自明,陈玉兴.17味超临界CO2萃取中药配方颗粒急性毒性研究[J].今日药学,2012,(01):17-20.

[8]车爱萍,王洁,夏振娜.药物安全药理学研究进展[J].中国新药杂志,2010,(15):1309-1313.

[9]中国食品药品监督管理局.中药、天然药物一般药理学研究技术指导原则[OL].http://www.cde.org.cn/zdyz.do?Method=largePage&id=2091,2012.

 

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