HLAB27基因及抗原检测在强直性脊柱炎诊断中的意义
发表时间：2014-05-14 浏览次数：581次
症状容易被忽视。目前临床主要是靠病史、体征和X 线对强直性脊柱炎进行诊断。许多研究表明HLAB27 阳性与强直性脊柱炎有强相关[1]。现对2012年7 月至10 月来本院就诊的疑似强直性脊柱炎患者标本用血清学方法和核酸扩增荧光检测法[聚合酶链反应(PCR)染料法]进行检测，结合X 光片的临床诊断，对HLAB27 基因、抗原与AS 的关系进行了分析，报道如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源 2012 年7～10 月107 例于本院进行HLAB27诊断和治疗的患者标本，其中55例进行了X 光片检查。
1.2 试剂与仪器 仪器：PCR 扩增仪(德国MJResearchOpticon2)，倒置显微镜(日本奥林巴斯IMT)，美国Hologic数字化X 线机。试剂：TIANGEN 血液基因组DNA 提取试剂盒(批号：H6514)，晶芯HLAB27 核酸扩增荧光检测试剂盒(PCR 染料法，批号：300051)，HLAB27 分型血清板(批号：1203，由北京圣泰华试剂有限公司提供)。
1.3 方法
1.3.1 HLAB27 基因的检测 采用核酸扩增荧光检测法(PCR 染料法)。
1.3.2 DNA 模板提取 采患者静脉血0.3mL，EDTA 抗凝，TIANGEN 血液基因组DNA 提取试剂盒提取DNA，浓度不低于30ng/mL。
1.3.3 PCR 扩增 PCR 反应总体积为20μL，其中PCR 反应混合液19μL，标本DNA1μL。
1.3.4 扩增条件 检测通道选择FAM GreenⅠ 通道，37 ℃ 10min，96 ℃ 15min;然后96 ℃ 25s，62 ℃ 30s，72 ℃ 30s(检测)，共40个循环;溶解曲线分析程序：72 ℃ 10s，95 ℃ 10s，从72 ℃到95 ℃升温速率不高于0.2 ℃/s。
1.3.5 结果判读 检测结果由HLAB27核酸扩增荧光检测软件进行辅助判读。阳性样本：质控峰与B27 峰在目标温度区间的荧光信号最大值的比值小于等于2.925。
1.3.6 血清学分型 按标准微量淋巴细胞毒试验进行。按照死亡细胞百分数进行计分，计分标准见表1。取腰椎正侧位、骨盆正位片。
2 结 果
2.1 HLAB27血清学方法和PCR 染料法检测结果的比较 107例标本用血清学方法计分，1分68例，2分7例，4分3例，6分2例，8 分27 例。1 和2 分判断为阴性，4、6、8 分者为阳性。两种方法比较结果见表2，HLAB27 血清学方法和PCR染料法检测结果完全一致，符合率100%。
2.2 HLAB27 血清学方法和PCR 染料法的临床灵敏度、特异度及阳性预测值 收集临床资料，其中有55例进行了X 片检测，以X 片结果确诊AS有29例，其中HLAB27基因阳性27例，阳性率93.1%，见表3。两种方法有高度一致的灵敏度、特异度及阳性预测值，它们分别为96.43%、93.10%、96.15%。
2.3 HLAB27抗原与AS的关系 表4中对55例有X 光片结果进行了分析。血清学4分、6分、8分者在各自组中所占的比例均在95%以上，X 光片中均有明显的骶髂关节模糊、小关节模糊等病变;血清学1分的AS患者X 光片中出现“竹节样” 变，由此可见抗原表达强弱与强直性脊柱炎病程的发展并没有强烈的相关性见表4。
3 讨 论
AS的病因至今尚不明确，目前现代医学家普遍认为有三个因素在起作用，遗传因素是其中一个[2]。流行病学调查显示，HLAB27阳性率在AS患者中高达95%以上，而普通健康人群中仅为4%～7%，HLAB27 携带者患AS 的相对危险率达70%[3]。目前HLAB27的检测较多使用两种方法：一种是传统血清学分型技术，即检测细胞表面的B27 抗原;另一种是HLAB27基因的检测。本文107例标本血清学分型和基因检测完全相符，但血清学分型还是存在标本要求高、试剂不易保存、难标准化等缺点，易造成漏检等缺点[4];B27 与B7、B44 等有交叉反应，容易造成结果部分假阳性，影响临床诊断结果。本文采用的HLAB27 核酸扩增荧光检测(PCR 染料法)采用实时荧光定量PCR 原理，在PCR 反应液中加入能与双链DNA 结合而发光的荧光染料，通过实时监测反应体系中荧光信号强度及溶解曲线，对扩增产物进行分析。PCR 染料法弥补了血清学分型的不足，还有特异性强、灵敏度高、快速、可批量进行等优点。综上所述，HLAB27 基因检测更优于抗原的检测。通过对AS患者病例的分析，HLAB27阳性率93.1%，与相关研究结果基本相符合，HLAB27 抗原与强直性脊柱炎高度相关;HLAB27抗原和基因检测有很高的临床灵敏度和特异度，阳性预测值96.43%，这表明HLAB27抗原与基因的检测在强直性脊柱炎的诊断中有很重要的诊断价值和临床意义。但HLAB27抗原表达强弱与强直性脊柱炎病程的发展并非完全一致。所以，HLAB27 抗原和基因的检测都可以作为辅助AS诊断的指标。最近有研究表明AS 的发病机制可能与HLAB27的各亚型的共有序列有关，而不是与各亚型特异序列有关[510]。虽然这些理论有待进一步证实，但也为今后寻找AS的病因及诊断指标提供了新的切入点。
参考文献
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(收稿日期：20131208)
