血清钾测定的国际比对

为了保证测量结果的可比性[13]，国际上陆续建立起了血清钾测定的决定性方法和参考方法，美国国家标准和技术研究机构(NIST)建立了同位素稀释热电离质谱法sotopedilutionthermalionizationmassspectrometry，IDTIMS)为测定血清钾的决定性方法，同时建立了同位素稀释电感耦合等离子质谱法otopedilutioninductivelycoupledplasma massspectrometry，IDICP/MS)为测定血清钾的参考方法[4]。为了逐步实现我国的血清钾测定标准化体系与国际接轨，之前在NIST的基础上笔者进行了改进，以59Co替代41K 作为内标，建立了ICPMS测定血清钾的候选参考测量方法。量值溯源是提高检验质量的重要手段[57]，而开展量值溯源工作需要参考系统[89]，即参考测量程序、参考物质和参考测量实验室。2002年检验医学溯源联合委员会(JCTLM)成立，主要负责评审参考测量程序和参考物质及认定参考实验室。为配合其工作，国际临床化学联合委员会(internationalfederationofclinicalchemistry，IFCC)于2003年发起了环形比对试验，每年进行一次，统一向参加比对的各参考实验室运送传递样品，开展比对工作。目的是通过收集不同实验室不同分析系统的测定结果，构建国际比对数据库，考察分析方法的可靠性，验证或确定标准物质的靶值，同时考核各国参与机构的分析检测能力。2010年9月，笔者应用已建立的参考方法参加了该比对。

1　资料与方法

1.1　仪器与试剂　PerkinElmerElanDRCⅡ型电感耦合等离子体质谱仪(美国PerkinElmer公司);MettlerAE240 万分之一天平(Mettler，德国);MilliQ 净化水装置(Millipore，法国);EppendorfReference移液器;钴元素标准溶液(1000μg/mL，国家计量科学院标准物质研究中心);血清电解质标准物质：美国国家标准和技术研究(NIST)提供的SRM956c水平Ⅰ、Ⅱ、 Ⅲ，SRM909b 水平Ⅰ、Ⅱ;69%浓硝酸(北京化学试剂研究所)。

1.2　标准溶液和内标溶液选择、配制　分别称量0.1070、 0.1742、0.2440、0.3137、0.3863 g 的SRM956cI，加入0.1600g浓度为10μg/L 的钴内标溶液，然后加入1%稀硝酸至16.00g，配制钾浓度为0、1.5、2.5、3.5、4.5、5.5μg/g，钴浓度均为0.1μg/L 的标准溶液。

1.3　SRM909b复溶程序　分析时按说明书要求放置平衡至室温，轻敲样品瓶，确保所有冻干物都位于安瓿的底部。小心移去金属封口和橡胶塞，置于天平上调零，用称量法准确加入去离子水，按室内温度去离子水的密度称量后旋动样品瓶3次，静置10min。轻轻旋动混匀内容物，静置30 min，再次旋动，静置10min，最后颠倒10次样品瓶。

1.4　RELA 比对样品复溶程序　放置平衡至室温，小心打开样品瓶，准确加入5mL 去离子水后，盖上瓶盖，于室温避光静置30min。小心摇动样品瓶使血清完全溶解，避免产生泡沫。溶解后待用血清保存在4 ℃ 冰箱中，长期不用的血清于-20 ℃冷藏。

1.5　样本测定程序　将钴元素作为内标加入待测样本，1%硝酸将其稀释100 倍，选择和优化ICPMS 分析条件后进行测定。测定比对样本前先测定SRM909b 以保证测定结果的准确性，测定结果要求在标示值±不确定度之内。比对样本测定3批，每批测定4 次，以考察分析的批内和批间精密度及总不确定度。

1.6　不确定度的评估包括　A 类不确定度即重复测量引起的不确定度;B类不确定度主要包括试剂配制过程(即称量、标准溶液等)中的不确定度等。根据QAUM2012计算扩展不确定度。

1.7　统计学处理　采用SPSS13.0软件进行统计学分析。

2　结　　果

2.1　SRM909bⅠ及比对样本的测定结果　主要统计指标有均值(狓)、变异系数、不确定度、SRM909bⅠ测定值与认定值相对偏差及比对样本测定值与总均值的相对偏差，结果见表1。SRM909bⅠ测定值均落在标示值± 不确定度范围内，测定偏差在允许范围。

2.2　国际比对样本测定回报结果　IFCC 将各参考实验室上报的比对样本测定结果汇总，回报给各实验室。各实验室的测定结果、不确定度和分析方法见表2，其中德国共有3 家实验室参加，其他国家各有1家实验室参加。为了更直观比较，笔者将各实验室测定比对样本A、B的结果绘制成比对结果分布图，见图1(见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”)。从IFCC 回报结果Youden图中也可以看到本实验室结果与国际7家参考实验室结果的比较见图3(见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”)。 

3　讨　　论

同位素稀释质谱法同时具有质谱分析的高度特异性和同位素稀释的高度精密性[10]，是临床检验参考方法的最好选择[1112]。同位素稀释质谱法中标准溶液的制备和内标的添加过程是影响结果准确性和不确定度的主要因素，内标的加入用来校正质量歧视效应和信号的漂移。为保证测量结果的准确性，本研究采用重量法配制标准溶液和内标溶液，保持所有容器的洁净，保证操作环境无污染。室内条件控制在温度20～25 ℃，湿度20%～50%。测定前进行仪器参数条件优化的同时考察仪器的稳定性，保证仪器处于最佳工作状态。为了保证漂移及时在线性，每分析3个标本后用校准曲线重新校正一次。冻干品复溶的严格控制也是保证结果准确的前提，因此笔者制定了方法中所描述的详细的复溶程序。本次国际比对中，除德国汉诺威医学院使用电感耦合等离子体发射光谱法(ICPOES)法，德国工程物理研究所使用离子色谱(IC)法以及我国使用ICPMS法[1321]，其他实验室均使用火焰原子发射光谱法(FES)法。根据比对结果，我国和德国工程物理研究所、意大利诊断研究所、日本检查医学标准物质机构以及德国医学实验室的结果相近，德国汉诺威医学院和美国威斯康辛州儿童医院的测定值离群偏高，未计人总均值计算。5家实验室测定比对样本A、B 两水平的平均值分别为4.045mmol/L 和2.86mmol/L。用于准确度测定的SRM909bⅠ 认定值为(3.424±0.025)mmol/L，本室测定值均落在此范围内，比对样本A、B 两水平的测定结果分别为(4.08±0.033)mmol/L，(2.86±0.025)mmol/L，与平均值相比偏倚分别为0.87%和0，在规定的“等效限”±2% 范围内。测量不确定度仅次于德国工程物理研究所和日本检查医学标准物质机构，取得了较好的成绩。总之，根据各国实验室的回报结果，多数实验室的比对结果令人满意，达到了预期的效果。对于德国和美国两家未纳入统计和结果分析中的实验室，需从实验条件等方面分析原因。通过参加国际比对，证明了实验室的分析检测能力，同时进一步验证了建立的血清钾电感耦合等离子体质谱钴内标法准确、可靠，达到国际参考方法的水平。通过建立必要的临床检验参考系统，充分利用好国际比对这个平台，进一步推动我国临床检验标准化工作的顺利发展。

参考文献

[1] ThienpontLM，Van Uytfanghe K，DeLeenheer AP.RererenceMesurementSystemsinClinicalChemistry[J].ClinicalChimicaActa，2002，323(1)：7387.

[2] 江传慧，陈燕.检验结果互认面临的问题与对策[J].国际检验医学杂志，2009，30(12)：12341235.

[3] 蒋胜高.临床化学常规项目检测结果的可比性调查[J].临床检验杂志，2006，24(6)：464465.

[4] MurphyKE，LongSE，RearickMS，etal.Theaccuratedeterminationofpotassium andcalcium usingisotopedilutioninductivelycoupled “cold”plasma massspectrometry[J].J AnalAtSpectrom，2002，17(1)：469477.

[5] Koumantakis G.Traceabilityof measurementresults [J].ClinBiochem Rev，2008，29：6166.

[6] VesperHW，ThienpontLM.Traceabilityinlaboratory medicine[J].ClinChem，2009，55(6)：10671075.[7] WhiteGH.Metrologicaltraceabilityinclinicalbiochemistry[J].AnnClinBiochem，2011，48(5)：393409.

[8] 申子瑜，陈文祥，杨振华.检验医学参考系统研究与应用以及有关问题[J].中华检验医学杂志，2009，32(5)：485488.

[9] 陈文祥，杨振华.临床生化检验参考方法发展历史与现状以及国内研究进展[J].中华检验医学杂志，2009，32(5)：489493.

[10]VoglJ，Pritzkow W.Isotopedilutionmassspectrometryaprimarymethodof measurementanditsroleforRM certification [J].MAPAN，2010，25(3)：135164.

[11]闰颖，申子瑜，陈文祥.同位素稀释电感藕合等离子体质谱分析及其在临床检验中的应用[J].中华检验医学杂志，2007，30(3)：337338.

[12] 赵墨田.同位素稀释质谱法特点[J].质谱学报，2004，25(B10)：167168.

[13] MiyashitaS，Groombridge AS，FujiiS，etal.TimeresolvedICPMS Measurement：aNew MethodforElementaland MultiparametricAnalysisofSingleCells[J].AnalSci，2014，30(2)：219224.

[14] LinAJ，YangT，JiangSY.Arapidandhighprecisionmethodforsulfurisotopeδ(34)Sdeterminationwithamultiplecollectorinductivelycoupledplasmamassspectrometer：matrixeffectcorrectionandapplicationsforwatersampleswithoutchemicalpurification[J].RapidCommun MassSpectrom，2014，28(7)：750756.

[15] ElKhatib AH，EstebanFernándezD，Linscheid MW.Inductivelycoupledplasma massspectrometrybased methodforthespecificquantificationofsulfenicacidinpeptidesandproteins[J].AnalChem，2014，86(4)：19431948.

[16] LiuHC，YouCF，CaiWJ，etal.Precisedeterminationofseawatercalcium usingisotope dilutioninductively coupled plasmamassspectrometry[J].Analyst，2014，139(4)：734741.

[17] LabordaF，BoleaE，JiménezLamanaJ.Singleparticleinductivelycoupledplasma massspectrometry：apowerfultoolfornanoanalysis[J].AnalChem，2014，86(5)：22702278.

[18] KomorowiczI，BarakiewiczD.Arsenicspeciationin waterbyhighperformance liquid chromatography/inductively coupledplasmamassspectrometrymethodvalidationanduncertaintyestimation[J].RapidCommun MassSpectrom，2014 ，28(2)：159168.

[19] AmaisRS，LongSE，NóbregaJA，etal.Determinationoftracesulfurinbiodieselanddieselstandardreferencematerialsbyisotopedilutionsectorfieldinductivelycoupledplasma massspectrometry[J].AnalChim Acta，2014 ，806(1)：9196.

[20] JulshamnK，MaageA，NorliHS，etal.Determinationofarsenic，cadmium，mercury，andleadinfoodsbypressuredigestionandinductivelycoupledplasma/ massspectrometry：firstaction2013.06[J].JAOACInt，2013，96(5)：11011102.

[21] VanhoeH，VandecasteeleC，VersieckJ，etal.Determinationofiron，cobalt，copper，zinc，rubidium，molybdenum，andcesiuminhumanserumbyinductivelycoupledplasmamassspectrometry[J].AnalChem，1989，61(17)：18511857.

(收稿日期：20131126)