葡萄糖-6-磷酸异构酶、抗环瓜氨酸肽抗体诊断类风湿关节炎的临床意义

类风湿关节炎(RA)是一种常见的自身免疫病，不及时诊断和系统治疗，可导致关节破坏、关节功能障碍，严重影响生活质量。RA发病机制尚不完全明了，RA患者体内存在多种自身抗体，如类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)等，在RA的发生发展中起重要作用。除了自身抗体外，近些年GPI抗原受到较多关注，国内的一些研究表明GPI抗原在部分RA患者尤其是活动的RA患者血清中异常升高，具有诊断和评估疾病的意义[1]。笔者收集了近几年在我院诊治的RA患者、非RA患者及健康体检的正常人临床资料，回顾分析GPI抗原、抗CCP抗体对RA的诊断意义。

1资料与方法

1.1研究对象

1.1.1　RA患者组：选择2010年1月～2014年2月在我院门诊和住院的患者122例，其中男22例，女100例，年龄32～88岁，平均(53.23±11.76)岁，病程6周～20年，以上患者均符合2009年ACR与EULAR制定的RA分类(诊断)标准[2]。

1.1.2非RA组：选择同期门诊及住院的其他风湿性疾病198例，男63例，女135例，年龄19～88岁，平均(58.73±13.67)岁，包括SLE、PM/DM、pSS、UCTD 2例、MCTD、BD、AS、OA、反应性关节炎等，均符合国内或国际相应诊断(分类)标准。

1.1.3健康组：本院健康体检者177例，男61例，女116例，年龄20～88岁，平均(53.03±11.94)岁。

1.1.4检测内容：所有患者和健康人均检测了GPI、抗CCP抗体，RA组患者还做了血沉、C-反应蛋白，进行临床DAS28评分计算。

1.2实验方法

1.2.1GPI抗原测定：采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)的GPI。实验步骤：患者血清加入样品液中，检测时加阳性对照、阴性对照和GPI标准品(0、0.16、0.33、1.0、2.0、20.0μg/ml)各100μl，37℃1 h，弃样本后PBS洗板3次，再加入酶标记抗GPI抗体，37℃1h，再次PBS洗板3次，加入OPD显色液100μl显色10 mit后，2 mol/L硫酸50μl终止显色，酶标仪490 nm读板，参比波长630 nm。GPI的浓度临界值为0.2μg/ml。

1.2.2抗CCP抗体的测定：应用ELISA法，抗CCP抗体>25Ru/ml被认为阳性。

1.3统计学处理：采用SPSS12.0软件，计数资料以例数和百分比表示，采用卡方检验，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，采用t检验。

2结果

2.1各组GPI抗原、抗CCP抗体检测结果：见表1。GPI在RA与非RA两组间比较P=0.07，统计学无明显差异;GPI在RA与健康组比较，差异有统计学意义(P<0.01)，RA组GPI浓度明显高于健康组。抗CCP抗体在RA与非RA两组间比较，差异有统计学意义(P<0.01);抗CCP抗体在RA与健康组两组间较，差异有统计学意义(P<0.01)，RA组抗CCP抗体明显高于非RA和健康组。

2.2　RA组中各亚组患者的GPI抗原、抗CCP抗体检测指标和DAS28评分：见表2。在诊断RA的122例中，仅GPI阳性的有7例，仅抗CCP抗体阳性的有85例，GPI和抗CCP抗体两者均阳性者有11例，其他19例为GPI和抗CCP抗体两者均阴性。DAS28评分显示大部分患者处于疾病活动状态，提示GPI、抗CCP抗体都和疾病活动有关。

2.3　GPI、抗CCP抗体对RA诊断的灵敏度和特异度：见表3。RA诊断的灵敏度和特异度分别为84.43%、57.22%。

3讨论

对类风湿关节炎诊断具有高特异性的抗核周因子(APF)、抗角蛋白抗体(AKA)以及抗聚焦蛋白微丝蛋白抗体(AFA)在化学机构上具有相关性，抗原决定簇中都含有瓜氨酸。2000年荷兰Schellekens等成功地用酶联免疫吸附试验法检测出RA患者血清中的抗CCP抗体[3]。近年来有许多文献表明抗CCP抗体检测对RA诊断、鉴别诊断、预后判断有重要意义。本组RA组抗CCP抗体明显高于非RA组和健康组，差异有统计学意义(P<0.01)。抗CCP抗体对类风湿关节炎诊断的灵敏度和特异度分别94.12%和78.69%，和国内外报道大致相同[4-5]。GPI抗原是一种多免疫活性的酶，广泛存在于细胞内以及细胞外液中，具有多种功能，主要参与糖酵解和糖异生，催化D-葡萄糖-6-磷酸与D-果糖-6-磷酸的相互转化，并可作为一种细胞因子或生长因子促进细胞的增殖与迁移。研究发现，通过注射GPI抗原可诱导小鼠关节炎的产生[6]。

近些年，有许多研究报道：GPI是RA一种自身抗原[7]，关节炎患者血清和关节液内发现了极高的GPI酶活性和浓度[8-9]。本组实验结果GPI在RA组和非RA组中出现低滴度阳性，在健康组检出3例阳性，RA组GPI浓度高于健康组，差异有统计学意义(P<0.01)，与非RA组比较无明显差异(P=0.07)。其对类风湿关节炎诊断的灵敏度(6.08%)和特异度(24.14%)较低，单独检测GPI对诊断类风湿关节炎意义不大，这与国内的某些报道不同[10-11]，分析原因可能与所选患者的个体差异、并发症、样本量不足等有关。若将GPI阳性、抗CCP抗体阳性和GPI、CCP双阳性的RA患者联合统计，其对RA诊断的灵敏度和特异度分别为84.43%、57.22%。虽然特异度低于抗CCP抗体阳性者，但灵敏度显著高于GPI阳性者、GPI和抗CCP双阳性者，也明显高于抗CCP阳性者;在RA组122例患者中，抗CCP抗体阳性而GPI阴性者为85例，抗CCP抗体和GPI均阳性者只有11例，7例患者为抗CCP抗体阴性而GPI阳性，提示GPI可增加RA的检出，对类风湿关节炎的诊断有所帮助。

4参考文献

[1]鲍春德，叶萍，陈晓翔，等.血清中6-磷酸葡萄糖异构酶抗原升高在类风湿关节炎中的意义探讨[J].中华风湿病学杂志，2005，9(5)：277.

[2]栗占国.临床诊疗指南风湿病[J].第2版.，2010，8：.

[3]Schellekens GA，visser H，dejong BAW，et al.The diagnostic properties of rheumatoid arthritis antibodies recognizing a cycliccitrullinated peptide[J].Arthritis Rheum，2000，43(1)：155.

[4]林宁，梁淑慧.抗环瓜氨酸肽抗体在类风湿关节炎发病机制病情进展及治疗检测中的意义[J].中华风湿病学杂志，2008，6：418.

[5]刘喜德，蔡龙，李召东，等.抗环瓜氨酸肽抗体与类风湿关节炎的相关性研究[J].中华风湿病学杂志，2007，6：361.

[6]Kouskoff V，Korganow AS，Duchatelle V，et al.Organ-specific disease provoked by systemic autoimmunity[J].Cell，1996，87(5)：811.

[7]Schaller M，Burtonn DR，Ditzel HJ.Autoantibodies to GPIin rheumatoid arthritis：linkage between an animal model and human disease[J].Nat Immunol，2001，2(8)：746.

[8]Cha HS，Kim TJ，Kim JY，et al.Autoantibodies to glucose-6-phosphate isomerase are elevated in the synovial fliud of rheumatoid arthritis pations[J].Scand J Rheumatol，2004，33(3)：179.

[9]Kassahn D，Kolb C，Solomon S，et al.Few human autoimmune sera detect GPI[J].Nat Immunol，2002，3(5)：411.

[10]卿之驹，贾凯，秦立新.葡萄糖-6-磷酸异构酶在类风湿关节炎中的诊断意义[J].实用预防医学，2005，12(8)：481.

[11]王黎醒，李小峰，赵向聪，等.血清葡萄糖-6-磷酸异构酶与类风湿关节炎的相关性研究[J].中国医药指南，2013，11(16)：631.