中西药结合治疗对创伤患者细胞免疫功能的影响

作者                  作者单位

淡利军 陕西省榆林市星元医院急诊科，陕西 榆林　719000

[ABSTRACT] Objective： To investigate the Influence of combined TCM and Western medicine therapy on the cellular immune function of natural killer (NK) and T cells levels in patients with trauma. Methods： Sixty patients with severe trauma were randomly divided into observation group and control group with 30 cases in each group. Both groups were given routine western medicine， the observation group was also given extra herbs for strengthening health and dispelling evil qi. Before and 2,4,6 days after treatment， plasma IL-6 and CRP levels， count of natural killer (NK) and T cells of both groups were observed and compared. Results： Both groups showed significant changes in the plasma IL-6 and CRP levels 2,4，and 6 days after the treatment (P<0.05) comparing with that before the treatment. Specifically， the observation group showed significant lower IL-6 and CRP levels comparing with the control group (P both <0.05). After 2 days of treatment， both groups showed significant decrease in CD3+、CD4+、CD4+/CD8+ and NK counts， which achieved the lowest level on day 4， and came back on day 6， and were all significantly different from the levels before treatment (P<0.05). On day 2， 4， and 6， the observation group showed obvious decrease of CD3+、CD4+、CD4+/CD8+ and NK counts， but significance was only shown on day 4 (P<0.05). Conclusions： Combined TCM and Western medicine therapy can activate the immune function of natural killer (NK) and T cells levels in patients with trauma.

[KEY WORDS] Cellular immunity; Trauma; Herbs for strengthening health and dispelling evil

创伤患者容易并发感染，免疫功能受损，从而引起更多、更严重的并发症[1,2]。扶正祛邪汤是常见治疗创伤的中药方，对各种虚弱性疾病有很好的临床疗效，对免疫功能有一定影响[3]。本文观察严重创伤患者治疗前、后白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、T淋巴细胞亚群的变化，以探讨中西药结合治疗对创伤患者细胞免疫功能的影响，现报道如下。

1　资料与方法

1.1　一般资料

选择2009年1月～2011年5月我院普外科、急救中心、神经外科、ICU收治的严重创伤患者60例，入组条件为：接诊后3次血糖值均>9 mmol/L;创伤严重程度评分>20分;患者同意。其中男性40例，女性20例;年龄13～78岁，平均45.5岁;体重45～85 kg，平均56.2 kg。采用随机配对原则分为观察组与对照组，每组各30例。两组性别、年龄、体重等一般资料对比无明显差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2　治疗方法

两组首先都采用常规西药治疗方法：入院后建立中心静脉通路，连接内含生理盐水50 mL和胰岛素50 U的微量泵以及25%葡萄糖溶液输液泵，根据血糖监测值的变化随时调节胰岛素泵入量，均接受热卡相同的胃肠道营养或(和)静脉营养支持。观察组在此治疗基础上加用扶正祛邪汤口服，组成：甘草20 g，生晒参7 g，白术6 g，川芍6 g，干地黄10 g，当归10 g，白芍6 g，山药30 g，阿胶7 g，防风6 g，干姜3 g，桔梗5 g，柴胡5 g，麦冬6 g，按常法水煎200 mL口服，每日1次。两组共治疗1个月。

1.3　观察指标

1.3.1　IL-6和CRP

治疗前与治疗后2、4、6 d分别采集静脉血2 mL，离心后分离出血清并移入2个0.5 mL eppendorf管内，每管0.5 mL，-70 ℃冻存。采用ELISA法检测血清IL-6和CRP水平，严格按照说明书操作。

1.3.2　淋巴细胞和NK细胞

(1)外周血T细胞亚群检测：治疗前与治疗后2、4、6 d，采用流式100 μL全血反相抽吸入TruCount管，加20 μL荧光抗体，室温避光孵育20 min;50 μL溶血素及450 μL蒸馏水分别与标本孵育8～10 min。采用CellQuestPro软件分析T淋巴细胞亚群百分含量，收集测定细胞10 000个。(3)NK细胞检测：取抗凝全血100 μL，加入10 μLl CD3-FITC/CD16+56-PE，室温避光反应20 min，每管加入预冷的溶血剂1.5 mL，室温避光反应10 min，取出后1 500 r/min离心5 min,1.5 mLPBS洗2次，然后加入500 μL PBS缓冲液重悬细胞。采用CellQuestPro软件获取数据，分析CD3+CD16+CD56+细胞所占比例，收集测定细胞10 000个。

1.4　统计学处理

数据以均值±标准差(x-±s)表示，采用SPSS19.0统计软件进行统计分析，计量资料比较采用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2　结果

2.1　两组IL-6和CRP水平的比较

两组治疗前IL-6和CRP水平无明显差异(P>0.05)，治疗后2、4、6 d均较治疗前有明显差异(P<0.05);治疗后观察组IL-6最高值在2 d测得，而对照组IL-6最高值在4 d测得，治疗后2、4、6 d观察组IL-6、CRP水平均明显低于对照组(P<0.05)，见表1。 表1　两组治疗前、后IL-6和CRP水平的比较

2.2　两组T淋巴细胞亚群的变化

两组患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+值于治疗2 d后显著降低，与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)，治疗后4 d达最低，治疗后6 d开始恢复，但与治疗前相比仍有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后2、4、6 d CD3+、CD4+、CD4+/CD8+值下降均较对照组多，但仅在治疗后4 d 两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。表2　两组患者治疗前、后T淋巴细胞亚群的变化

2.3　两组NK细胞的变化

两组患者NK细胞数量于治疗2 d后显著降低，与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)，于治疗后4 d达最低，治疗后6 d开始恢复，但与治疗前相比仍有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后2、4、6 d NK细胞数量下降均较对照组多，治疗后4 d两组间差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。表3　两组患者治疗前、后NK细胞的变化

3　讨论

创伤后炎症因子的变化可导致患者预后不良[4]，其中IL-6等炎性介质释放、CRP水平的升高是主要的炎症表现[5]。而在创伤患者的免疫功能指标上，T淋巴细胞亚群在免疫应答、免疫调节中担当着重要的角色。其中CD3是T细胞的重要分子，与T细胞的特有标志T细胞受体(TCR)以非共价键结合而形成的TCR-CD3复合物是T细胞识别抗原和转导信号的主要单位[6];CD4为单链跨膜糖蛋白，胞膜外区结构属免疫球蛋白超家族(IgSF)成员，是T细胞TCR-CD3识别抗原的辅助受体，参与信号转导;CD4+与CD8+在体内维持一定比例，共同参与免疫应答过程[7]。NK细胞是一群广谱的杀伤细胞，NK细胞减少可导致手术中游离出的微小癌栓成活，这些细胞在患者体内表达水平就基本代表了患者机体的免疫状态[8]。

扶正祛邪汤中山药、甘草等补益脾胃，其中重用甘草、山药为君，助后天生化之源，以生气血;当归，阿胶、生晒参、川芍补血养阴;干地黄、防风温阳兼解肌;干姜温阳暖中;桔梗、柴胡营活血，补中有通;柴胡、麦冬、白芍宣肺祛风[9]。全方补气养血，滋阴助阳，重在补益脾胃，其免疫调节作用特异性虽不显著，但提示该方作用机制不在于直接对病原的清除和对病理损伤的修复，而是通过整体调节作用，促进机体自我康复。本组结果显示，治疗后2、4、6 d观察组IL-6、CRP水平均明显低于对照组(P<0.05);CD3+、CD4+、CD4+/CD8+值、NK细胞数量下降均较对照组多，但仅在治疗后4 d 两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。总之，中西药结合治疗对创伤患者细胞免疫功能的变化影响显著，能在改善炎症状态的基础上，有效恢复T淋巴细胞亚群和NK细胞的免疫功能，值得临床推广应用。

【参考文献】

1　虞文魁，李维勤，王晓东，等.胰岛素严格控制血糖对脓毒症患者的影响及机理的初步探讨[J].中华外科杂志，2010,43：29-32.

2　李桦，熊叔陶，孙寿熙，等.手术创伤对白介素-2活性及受体表达的影响[J].中华创伤杂志，2008,10(2)：87.

3　梁华平，王正国.创伤后活化T细胞内环核苷酸含量与T细胞功能关系的实验研究 [J].解放军医学杂志，2009,20(5)：323.

4　李磊，王正国，张玉纯，等.创伤家兔血清免疫抑制物的初步分离[J].中华创伤杂志，2010,10(6)：252.

5　周春祥.四逆散改善细胞免疫性肝损伤作用机理研究[J].中国中医基础医学杂志，2009,8(5)：47.

6　Van den Berghe G，Wouters P，Weekers F，et al.Intensive insulin therapy in critically ill patients[J].N Eng J Med,2010,345：1359-1367.

7　Van Den Berghe G，Wouters PJ，Bouillon R， et al.Outcome benefit of intensive insulin therapy in the critically ill：Insulin dose versus glycemic control[J].Crit Care Med,2009,31：359-366.

8　Langouche L，Vanhorebeek I，Vlasselaers D，et al.Intensive insulin therapy protects the endothelium of critically ill patients[J].J Clin Invest,2010,115：2277-2286.

9　Jeschke MG， Klein D，Bolder U，et al.Insulin attenuates the systemic inflammatory response in endotoxemic rats[J].Endocrinology,2008,145：4084-4093.