不同电针对抑郁模型大鼠结肠黏膜脑肠肽GAS、NPY、CGRP含量的影响

目前,抑郁症的发病率越来越高,伴胃肠功能紊乱者更是占极高的比例,严重影响患者的生活质量。有研究发现在人的肠肌间神经丛内存在着神经系统,它分泌的神经递质叫做“脑肠肽”,也同时存在于大脑皮层一神经系统内。这种神经递质是一种肽类激素,它具有神经递质和内分泌激素的双重身份,并通过脑一肠轴的调控作用对胃肠运动功能进行调节[13]。脑肠轴概念的提出及脑肠肽的研究,阐明了应用抗抑郁药物可以治疗胃肠疾病的机制,为进一步认识精神心理因素对胃肠道病理生理的影响提供了理论基础[4]。

目前临床使用的各种抗抑郁药物都存在一定的局限性,而针灸治疗本病能够很好的克服这一缺陷[5J。本研究观察了不同电针对抑郁模型大鼠下丘脑和结肠黏膜组织中胃泌素(GAS)、神经肽Y(NPY)、降钙素基因相关肽(CGRP)三种脑肠肽含量的变化,探讨电针改善抑郁症相关胃肠道躯体症状的作用机制,并比较不同电针对上述指标影响的综合疗效.

材料与方法

1 .动物与分组:健康雄性SD大鼠[购于北京维通利华实验动物技术有限公司,实验动物许可证号:SCⅩΚ(京)2009~⒛12,饲养于北京中医药大学实验动物中心国家标准实验室],体质量(I80±9O)g。除了实验期间的特殊要求外,其余时间动物均饲养于温度(I8~笏℃)和湿度(35±2%)相对较为恒定的动物饲养室,动物在自然光线下,自由进食和饮水。购进后饲养7d以适应环境,每笼5只,开始实验后,除对照组仍群养外,其余改为每笼1只孤养。通过开野实验将水平运动次数加垂直运动次数不足30次或超过120次的大鼠剔除,选取符合条件大鼠ω只按体重随机分为空白组、模型组、百优解组、脉冲电针组、音乐电针组共5组,每组⒓只。

2.主要试剂及仪器:(1)药品及试剂:百优解(PATHEONFRANCE,礼来苏州制药有限公司分装)、GAS放免试剂盒(北京华英生物技术研究所)、NPY放免试剂盒(北京华英生物技术研究所)、CGRP放免试剂盒(北京华英生物技术研究所)。(2)仪器与设备:AB-160型电子分析天平(瑞士Mettler公司)、ZK-380型低温高速离心机(德国)、182型γ计数器(日本)、LH202型韩氏电针仪(南京济生医疗科技有限公司)、ZJ-12H音乐电针治疗仪(哈尔滨致厚医疗器械有限公司)、华佗牌针灸针(0.25×25mm,苏州医疗器械有限公司)。

3.造模方法:参照文献[6]的方法,采用慢性不可预见的温和刺激结合孤养方法制各抑郁模型,空白组每笼5只,其余各组动物全部孤养,每笼1只,21d内按随机方法接受7种不同的应激刺激,包括冷水游泳(10℃,51111n)、夹尾(距尾尖50px,180s)、禁水(24h)、禁食(24h)、潮湿环境(24h),昼夜颠倒(24h)、摇晃(频率1次·s1,30min)c每日给予一种刺激,于电针或药物治疗后进行,平均每种刺激累计使用3次,共计21d,顺序随机,使动物不能预料刺激的发生。用旷场实验和糖水消耗确定模型成功与否。

4.各组处理方法:(1)模型组:不予任何治疗。(2)百忧解组:将百优解以生理盐水配制成1mg·mL1,按照2mg·炖l体重,灌胃给药,每天1次,共21d。(3)脉冲电针组:参照全国针灸学会实验针灸研究会制定的“实验动物针灸穴位图谱”选取相当于人体解剖部位的印堂穴和百会穴,用0.25mm×乃mm毫针进行针刺,针柄接韩氏电针仪,于每日进行应激刺激前1h给予电针治疗,平刺进针,百会针尖向前头部,印堂针尖向下(两针柄间放置消毒脱脂棉球隔离以避免短路),进针深度为8~10mm,电针频率为2Hz,电流强度为0,6mA,针刺强度以大鼠头部及脚趾微颤为宜,使动物不挣扎嘶叫保持安静为度,每次⒛min,每天1次,连续治疗21d。(4)音乐电针组:选穴及针刺方法同上,针柄接ZJ-12H音乐电针治疗仪,音乐选取抗抑郁处方,调节强度以使动物不挣扎嘶叫保持安静为度,每次⒛血n,每天1次,连续治疗21d。

5.观察指标及检测方法:放射免疫法测定结肠黏膜GAS、NPY、CGRP含量,最后一次应激处理结束次日,大鼠快速断头取脑,在冰浴上迅速剥离大脑,分离出下丘脑,打开腹腔,剪取结肠50px,称重后分别投人4%的多聚甲醛固定液中待测。按照试剂盒要求步骤加样操作。

6.统计学处理:数据以均数±标准差(万±s)表示,采用叩SS16.0统计软件进行数据分析处理,组间比较采用单因素方差分析,以P(0OD^为差异有统计学意义。

结果

各组大鼠结肠黏膜GAS、NPY、CGRP含量的变化,结果见表1。

由表1可以看出,造模后大鼠结肠黏膜GAS含量显著降低,与空白组比较差异有统计学意义(P(0,Os);治疗21d后,百忧解组、脉冲电针组、音乐电针组GAS含量显著增加,与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.01或P<0。“);音乐电针组与脉冲电针组比较差异虽无统计学意义(P>0.“),但数值较高。

由表1可以看出,造模后大鼠结肠黏膜NPY含量显著升高,与空白组比较差异有统计学意义(P<0。O~s);治疗21d后,百忧解组、脉冲电针组、音乐电针组GAS含量显著降低,与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.“或P<0.01);音乐电针组与脉冲电针组比较差异虽无统计学意义(P>0。O~s),但数值较高。

由表1可以看出,造模后大鼠结肠黏膜CGRP含量显著升高,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);治疗21d后,百忧解组、脉冲电针组、音乐电针组CGRP含量显著降低,与模型组比较差异均有统计学意义(P(001或P(0.Ob^);音乐电针组与脉冲电针组比较差异有统计学意义(P(0。Os)。

讨论

神经肽/脑肠肽是近来抑郁症发病机制的研究的新热点。现代研究发现,至少有⒛种胃肠多肽存在于大脑组织中,说明神经系统和胃肠道在起源和功能上有密切的关系,它与人的情志活动有关,其在抑郁症发病过程中所起的作用正在引起强烈关注。GAS是研究最早也是研究最多的胃肠激素,也是一种典型的脑肠肽,它能够促进胃肠道的分泌,增加胃肠蠕动,GAS减少会引起胃黏膜萎缩,胃排空障碍[71。NPY是内原性缩血管活性肽之一,其在胃肠道的作用是抑制性的,能够抑制肠液和胰液的分泌,抑制胃肠运动[:9]。cGRP是目前发现的体内最强烈的舒血管神经肽,对全身血管有不同程度的扩张作用,可逆转血管痉挛、改善血液循环。另外,CGRP可抑制胃酸分泌和胃肠运动,在肠道感觉传导和反射中有一定的重要性[10-11]。神经系统、肠神经系统及肠内分泌系统等含有GAS、NPY、CGRP等丰富的肽能神经纤维和细胞,可以感受血液化学、血液动力学及胃肠功能活动的变化刺激,通过神经反射机制,调节胃肠道的功能活动和食欲。因此,它们在调节胄肠运动、改善胃肠功能、维持内环境的相对稳定和自身防病机制上有着十分重要的作用[12]。

大量临床研究已表明[13-14]头针治疗抑郁症具有独特的疗效,中医认为“脑为元神之府”,认识到脑同神志活动关系密切;现代神经生理学、神经影像学、神经递质学等也证明了头针可以通过调节大脑皮质功能来治疗抑郁症。本试验以脑一肠轴的神经一免疫一胃肠道功能之间的内在联系为切入点,以脑肠肽的含量变化为中心,通过不同电针头穴针刺对抑郁模型大鼠结肠黏膜三种主要调节胃肠道的神经肽水平的变化情况,来探讨电针改善抑郁相关胃肠道躯体化症状的可能作用途径,并比较不同电针的作用效果。实验结果发现,大鼠经过21d慢性应激刺激后,结肠黏膜抑制类激素NPY、CGRP水平升高,兴奋性激素GAS含量降低,兴奋性激素与抑制性激素的失平衡,一方面可能引起胃排空障碍,另一方面引起一系列胃肠紊乱症状的出现,如腹胀、早饱、上腹痛、腹泻、便秘、反酸、恶心呕吐。总之,胃肠运动相关脑肠肽分泌失调可能是抑郁后胃肠功能紊乱的重要原因。

电针治疗后抑制类激素NPY、CGRP水平有所降低,兴奋性激素GAS含量升高,兴奋性激素与抑制性激素的失平衡状态得到改善,胃肠功能代谢紊乱得到缓解,提示电针治疗可通过对肠道中脑肠肽含量的影响而调控脑一肠轴,从而调节胃肠运动,而且音乐电针组优于脉冲电针组。脉冲电针在治疗后期由于人体出现适应而疗效衰减,这一直是困扰电针的一大难题。音乐电针将具有音乐频率的电信号作用于人体,每时每刻都形成一种新的刺激,机体还来不及适应立刻又转人另一个新的刺激,因此彻底解决了脉冲刺激周期性重复的问题[15-16]。而且研究表明[17],,音乐治疗在临床治疗中起到了药物治疗所不能起到的作用。这与本实验所显示的,音乐电针在调节抑郁模型大鼠结肠黏膜兴奋性、抑制效果优于脉冫中电针的结果是完全一致的。

参考文献

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