HPLC法测定富马酸喹硫平缓释片的含量
发表时间：2014-06-05 浏览次数：1307次
抑郁症是一种高患病率、高复发率、高致残率及高自杀率的严重精神疾患，终身患病率达6%。近年来，随着社会经济文化水平的不断提高，其终身患病率呈逐年增高的趋势。富马酸喹硫平自2001年进入我国以来，在治疗精神分裂症的阳性症状、阴性症状、认知症状和情感障碍，双相抑郁发作和单相抑郁发作等具有较好的疗效，对老年痴呆、谵忘、强迫症等也有一定的疗效[1]。富马酸喹硫平，11-[4-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-1-哌嗪基]二苯并[b，f][1,4]硫氮杂卓半富马酸盐，化学结构见图1。现国内上市的剂型只有普通片剂，为了提高患者使用的顺应性，从一日2次减少为一日一次，降低不良反应，国外已研制上市富马酸喹硫平缓释片。国内在研制富马酸喹硫平缓释片时，质量研究经过选择分析，在已上市的富马酸喹硫平片的质量标准[2]中含量的检测方法是采用紫外-可见分光光度法的基础上，通过研究，建立HPLC方法，操作简便，科学可行，重现性好，可作为富马酸喹硫平缓释片的含量测定方法。图1 富马酸喹硫平化学结构1 仪器与试药高效液相色谱仪：Agilent 1120，自动进样器，UV检测器;色谱柱：Agilent C18(4.6mm×250mm,5μm)。富马酸喹硫平对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号：100815-200501,100mg);反丁烯二酸(富马酸)对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号：111541-200001);富马酸喹硫平缓释片(北京科信必成医药科技发展有限公司哈尔滨分公司，批号20101201、20101202、20110201、20110202，规格：0.2g)。甲醇为色谱纯;三乙胺等为分析纯。2 方法与结果2.1 样品溶液的制备2.1.1 供试品溶液：取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(相当于喹硫平20mg)，置100mL量瓶，加入甲醇60mL，超声使富马酸喹硫平溶解，加入水适量，混匀，冷却至室温，用水定容，摇匀，离心后过滤，续滤液作为供试品溶液。2.1.2 对照品溶液的制备：精密称取富马酸喹硫平对照品适量(约相当于喹硫平20mg)，置100ml量瓶，加入甲醇60ml，超声使富马酸喹硫平溶解，加入水适量，混匀，放冷置室温，用水定容，摇匀，即为对照品溶液。2.1.3 富马酸对照品溶液：精密称取富马酸对照品适量，用流动相溶解并稀释为0.7μg/mL，作为富马酸对照品溶液。2.2 系统适用性试验与方法专属性考察2.2.1 检测波长的选择取含量项下的对照品溶液，在紫外光度计上进行波长扫描，富马酸喹硫平在在289nm处有最大吸收，因此选择289nm作为富马酸喹硫平缓释片含量测定项下的检测波长。2.2.2 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：Agilent C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相：甲醇-水-三乙胺(600：400：4)(磷酸调节pH值为6.8);检测波长：289nm;流速：1.0mL/min;进样量：20μL。理论板数按喹硫平计不低于6000，喹硫平峰与相邻杂质峰的分离度符合要求。图2 方法专属性试验色谱图(A)空白辅料溶液(solution of supplementary materials);(B)富马酸对照品(reference standard of Fumaric acid);(C)富马酸喹硫平对照品(reference standard of quetiapine fumarate);(D)样品(sample solution)由图2可见，富马酸喹硫平缓释片中辅料及其他杂质与喹硫平可完全分离，不干扰样品的测定，方法的专属性良好。喹硫平的理论板数为125 00，系统适用性符合要求。2.3 线性关系试验精密称取富马酸喹硫平对照品适量，用流动溶解作为贮备液，精密移取贮备液适量，用60%甲醇溶液稀释至一系列浓度的供试溶液，按“2.2”项下的色谱条件测定，记录色谱图，分别以喹硫平峰面积和浓度为纵横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：y = 393 528x - 523 868，相关系数r=0.9999，结果表明，喹硫平在80.33μg/mL～281.17μg/mL范围内，色谱峰面积和浓度的线性关系良好。2.4 样品溶液稳定性试验去含量测定项下的供试品溶液，室温放置，于0h,1h,2h,4h,6h分别取样检测，记录色谱图，计算喹硫平峰面积的RSD值为0.10%，结果标明，供试品溶液室温放置6小时稳定性良好。2.5 回收率(准确度)试验精密称取富马酸喹硫平对照品适量(约相当于喹硫平16mg,20mg,24mg)，各3份，加入处方比例的辅料，按照“2.1”项下供试品溶液的制备方法配制，并按“2.2”项下的色谱条件测定，记录喹硫平峰面积，计算喹硫平的平均回收率为100.2%(RSD=0.28%)(n=9)。2.6 方法精密度试验精密量取同一批次的样品6份，按照“2.1”项下的方法操作，喹硫平的平均含量为98.8%，RSD为0.55%。2.7 样品含量测定取不同批号的样品，按照上述色谱条件测定，记录喹硫平峰面积，计算喹硫平的含量，结果见表1。表1 样品含量测定结果3 讨论抗精神病药已由第 1 代传统的典型抗精神病药发展到第 2 代非典型抗精神病药。非典型抗精神病药在改善精神分裂症的阳性、阴性症状及安全性、耐受性、锥体外系反应(EPS)发生率等方面，体现出了临床治疗的极大优势。喹硫平作为第二代抗精神病药物的代表，目前的临床研究支持其对精神分裂症、情感障碍、脑器质性疾病伴发的精神障碍等疾病均有较好的治疗效果，应用广泛，且副反应较少[4]。因此，其制剂的不断开发成为重要的研制趋势。3.1 流动相及其pH的选择富马酸喹硫平属于弱酸弱碱盐，在流动相中加入一定量的三乙胺可改善喹硫平在色谱柱中的分配行为，使喹硫平的拖尾得到明显的改善，富马酸喹硫平的pKa为3.3,6.8[3]，所以流动相的pH值调节为6.8，有利于喹硫平保持单一的离子状态，有利于分离分析的进行。3.2 紫外-可见分光光度法和HPLC法的比较富马酸喹硫平片的国家药品标准[2] 中采用紫外-可见分光光度法测定喹硫平的含量。本文采用HPLC法测定富马酸喹硫平缓释片中喹硫平的含量，与紫外-可见分光光度法相比，提高了专属性，因此，选择HPLC法作为测定法，具有更好的质量可控性。本方法简便、专属性好，重复性好，结果稳定可靠，能有效控制该制剂的质量。【参考文献】[1] 冯志颖，王中刚.喹硫平在国内的临床应用情况[J].精神医学杂志，2010,23(6)：475～477.[2] 国家药品标准[S].标准编号：WS1-(X-453)-2003Z.[3] Seroquel XR(r)Product Information CNS.000-211-958.15.0.
