高效液相法测定二维亚铁颗粒中的维生素C含量
发表时间：2014-06-05 浏览次数：1276次
二维亚铁颗粒[1]是补铁剂，用以纠正缺铁性贫血，其中的维生素C可促进铁的吸收，发挥协同增效作用。有着不可替代的作用。二维亚铁颗粒中的维生素C在国标中采用的是碘滴定法，碘法结果波动较大，分析原因可能是①溶液中存在还原剂，消耗碘液造成误差，②人为影响因素，如终点颜色判断不一致，速度不一样等，③淀粉指示剂需现配，操作繁琐，现采用高效液相法，实验表明，本法简便，快速，准确，灵敏度高，回收率高，适合作维生素C的含量测定方法。1 仪器与试药Waters e2695高效液相色谱仪(包括自动进样器、二元输液泵、柱温箱和2998紫外检测器);色谱柱：Waters C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);UV-2100型紫外分光光度计(日本岛津);维生素C对照品(批号：100425-200301，来源：中国药品生物制品检定所);磷酸二氢钾，乙腈均为色谱纯。2 实验方法与结果2.1 色谱条件的选择采用Waters C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),0.02mol/L醋酸钠-甲醇(90：5)作为流动相。理论板数应达到3000以上，分离度符合要求(均达到药典要求)。2.2 检测波长的选择取维生素C对照品适量，加水溶解，配成浓度为50μg /ml的溶液，按紫外-可见分光光度法在200～400nm波长范围内扫描，结果维生素C在255nm波长处有最大吸收峰。故将检测波长定在255nm。2.3 对照品溶液的配制[2]精密称取维生素C对照品20.11mg，置50ml棕色量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液，精密量取储备液2ml，置50ml棕色量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。2.4 供试品溶液的配制取本品20片，精密称定，精密称取样品0.1523g(相当于维生素C20mg)，置50ml棕色量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置50ml棕色量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。2.5 测定法取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行分析，记录色谱峰面积，按外标法以峰面积计算含量。2.6 线性关系取对照品储备液，精密量取1ml,2.5ml,5ml,7.5ml,10ml分置50ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，依照上述色谱条件和测定法测定其峰面积，以各对照品峰面积为纵坐标(Y)，浓度为横坐标(X)进行线性回归。回归方程：Y=154x+42.1，r=0.998.结果表明，维生素C在8.84～88.4μg/ml范围内，有良好的线性关系。2.7 回收率试验按处方比例精确配制含维生素C80%,100%,120%的横拟样品9份，按上述色谱条件分别测定含量，计算回收率，结果表明，平均回收率为99.1%，RSD为1.1%(n=9)。2.8 重复性试验取同一份样品，按上述测定法测定，重复进样6次，记录色谱图，测定结果见表1。结果表明测定维生素C含量的方法重复性良好。表1 重复性试验结果表2 不同方法测定维生素C含量的比较3 样品的测定选取不同厂家的3批样品按上述色谱条件测定维生素C含量，同时与药典方法比较，证明该方法可作为二维亚铁颗粒中维生素C含量测定方法。结果见表2。4 讨论4.1 本法中维生素C具有还原性，选用溶剂时我们分别考察了甲醇，50%甲醇，乙醇和流动相，最后选择了流动相作为溶剂，是因为作为溶剂，流动相提取率高，放置时间长，其他几种溶剂，放置时间太短，一般2h左右溶液的颜色就会发生改变。4.2 本法操作简便，结果准确，适合作为二维亚铁颗粒中的维生素C含量测定方法。 供试品溶液色谱图对照品溶液色谱图【参考文献】[1] 国家药品监督管理局国家药品标准WWS-10001-(HD-0200)-2002[S].[2] 赵建峰，HPLC法测定维生素C口含片中维生素C的含量[J].上海医药，2006,3(27)：115-116.
