2型糖尿病初发患者外周血单核细胞中核因子_kB 表达及超敏C反应蛋白水平研究

　　作者：楼大钧，朱麒钱，斯徐伟 作者单位：绍兴市人民医院内分泌科，浙江绍兴

　　【摘要】 目的 探讨2型糖尿病(T2DM)初发患者外周血单核细胞中核因子kB(NF_kB)的表达及血清超敏C反应蛋白水平(hs-CRP)。方法 颗粒增强免疫沉淀法测定91例初发T2DM患者(G2组)及60例对照组(G1组(血清超敏C反应蛋白水平(hs_CRP)水平;免疫组织化学染色法测定G2、G1组外周血单核细胞NF_kB活性;分析NF_kB活性与hs_CRP浓度相关性。结果 G2组外周血单核细胞中NF_kB活性和血清hs_CRP水平显著高于G1组(P<0.01)，而且外周血单核细胞中NF_kB活性与血清hs_CRP水平显著正相关。结论 2型糖尿病患者处于炎症状态，血单核细胞中核因子NF_kB表达及血清hs_CRP水平升高可能与动脉粥样硬化的形成有关。

　　【关键词】 2型糖尿病,核因子_kB,超敏C反应蛋白

　　Changes of Nuclear Factor_κB Activity in Peripheral Mononuclear Cell and Serum High_Sensitivity C Reactive Protein in Newly Diagnosed Type 2 Diabetes (T2DM). LOU Da_jun, ZHU Qi_qian, SI Xu_wei. Department of Endocrinology, Shaoxing People's Hospital, Zhejiang 312000, China

　　[Abstract] Objective To investigate the changes of Nuclear Factor_κB (NF_κB) in peripheral mononuclear cell and serum High_sensitivity C reactive protein (hs_CRP) in T2DM. Methods Immunohistochemical method was used to measure activity of NF_κB in peripheral blood mononuclear cell and immunolurbidimelric assay was used to measure hs_CRP in 91 T2DM and 60 normal control subjects (control group). At the same time linear correlation analysis was used to analyze the correlation between the level of hs_CRP and the level of NF_κB activity. Results The expression level of NF_κB in peripheral mononuclear cell and serum hs_CRP concentration in T2DM were significantly higher than those in control group(P<0.01). The serum hs_CRP level was positively correlated with NF_κB activity in peripheral blood mononuclear cells. Conclusions Type 2 diabetes had higher inflammation factors level.The increased activity of NF_KB and hs_CRP in T2DM may contribute to atherogenesis.

　　[Key words] Type 2 diabetes; Nuclear factor kappa_B; High_sensitivity C reactive protein

　　近年来认为低度炎症过程与肥胖、2型糖尿病(T2DM)、动脉粥样硬化的发生发展密切相关。严格控制血糖可以明显降低糖尿病患者微血管病变的发生率，但并没有显著降低大血管病变的发生率，其原因之一认为是炎症反应，外周血单核细胞的激活侵入动脉内膜形成泡沫细胞，在动脉粥样硬化形成早期起重要作用[1]。研究发现NF_kB是炎症的核心调节因子，动脉粥样硬化炎证反应过程所涉及的许多炎症因子都是由NF_kB激活的[2]。本研究旨在探讨T2DM初发患者外周血单核细胞中核因子NF_kB的表达水平及血清超敏C反应蛋白水平(hs_CRP)水平的变化，为糖尿病、炎症、动脉粥样硬化之间关系进一步深入研究提供线索。

　　1 资料和方法

　　1.1 一般资料：T2DM初发组(G2)均符合1999年WHO的诊断和分型标准，均为我院内分泌代谢病科住院患者。入选患者共91例(男43，女48)，年龄平均(58.9±7.2)岁，未使用抗高血糖药物及调脂药物，未使用维生素A、E、C、阿司匹林及抗氧化药物，已接受治疗的药物(如降压药)剂量稳定已3个月以上，无糖尿病急性并发症。正常对照组(G1)来自体检健康者，共60名(男32，女28)，年龄平均(60.3±5.9)岁，均无DM及高血压家族史，口服葡萄糖耐量试验(OGTT)排除糖尿病。研究对象均无明确的心、肝、肺及肾病等疾病，急、慢性感染，恶性肿瘤等。

　　1.2 方法

　　1.2.1 一般体检：对所有受试者详细询问病史及进行全身体格检查，检测血常规、尿常规、肝肾功能。所有对象均进行OGTT(75g葡萄糖)。

　　1.2.2 实验室检查：所有研究对象均于入院次日采集空腹肝素抗凝静脉血，采用颗粒增强免疫沉淀法测定血清hs_CRP水平，试剂采用芬兰Orion Diagnostica公司(上海基恩科技有限公司经销);批内CV0.3%，批间CV2.1%，严格按说明书操作。另测NF_kB活性、空腹血溏(FPG)、OGTT2小时血糖(2hPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL_C)、高密度脂蛋白醇(HDL_C)等生化指标由本院检验科使用Hitachi公司的7600型全自动生化仪检测。

　　1.2.3 NF_kB的免疫组织化学染色：采用免疫组织化学染色法检测对所有受试者外周血单核细胞中NF_kB水平。一抗选用兔抗NF_kBp65亚单位的多克隆抗体(美国NeoMarkers公司产品)，用SABC法试剂盒，DAB显色试剂(深圳晶美生物工程公司)进行操作，操作步骤按试剂盒说明书进行。每张石蜡切片随机选取5个高倍视野，共计数500个细胞，计算胞核阳性的细胞数占细胞总数的百分比。

　　1.3 统计学方法：使用SPSS 11.5软件。计量资料表示方法用均数±标准差(x-±s)。两组间均数比较用t检验。相关指标间的相关性采用直线相关分析法，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 初发糖尿病组与正常对照组间HDL_C、LDL_C、TC比较：两组差异无统计学意义(P>0.05);糖尿病组患者的体质量指数、舒张压、收缩压、FPG、2hPG高于正常对照组(P<0.01)，而TG高于正常对照组(P<0.01)。初发糖尿病组外周血单核细胞中NF_kB水平明显高于正常对照组(P<0.01)。初发糖尿病组血清hs_CRP明显高于正常对照组(P<0.01)，见表1。

　　2.2 pearson相关分析：在G2、G1组，外周血单核细胞中NF_kB水平与血清hs_CRP水平显著性相关(r值分别为0.283，0.302，P均<0.01)。 表1 两组临床参数及外周血单核细胞中NF_kB水平和血清hs_CRP浓度变化注：与G1组比较，P<0.05，P<0.01

　　3 讨论

　　近年研究提示炎症因子与T2DM发生发展密切相关。本研究T2DM患者与正常对照组比较，血清炎症因子hs_CRP明显升高，提示T2DM处于炎症状态。前瞻性“冠状动脉危险因素的社区研究”[3]和苏格兰冠心病预防研究[4]提示CRP能预测糖尿病的发生。CRP由肝脏合成，胰岛素可抑制肝脏合成CRP，胰岛素抵抗状态下，胰岛素敏感性降低，对肝脏合成CRP的抑制作用减弱，可能是本组糖尿病患者血清CRP升高的部分原因。有报告认为：T2DM和动脉粥样硬化可能是同一个病理基础上平行发展的两种疾病[5]，糖调节受损的出现意味着导致动脉粥样硬化的危险因素作用增强。

　　NF_kB是一种具有多种多向转录调节作用的蛋白质因子，可能参与了糖尿病动脉粥样硬化的发生和发展[6]。NF_kB与抑制蛋白IkB结合在胞浆中呈非活化状态。在刺激因子作用下，与IkB解离而活化，并迅速核移位，与特异性kB结合而启动靶基因转录，产生急性炎症反应。Ghanim等[7]研究发现，肥胖患者外周血单核细胞处于炎症状态，与对照组相比，NF_kB的活性明显升高。本研究发现T2DM初发患者外周血单核细胞的NF_kB活性明显高于正常对照组(P<0.01)，而且外周血单核细胞中NF_kB活性与血清hs_CRP水平显著正相关，均提示2型糖尿病患者外周血单核细胞处于炎症状态。已有研究表明NF_kB激活后，可促进分泌IL_6、TNF_α、CRP等炎症因子，从而诱导内皮细胞表达一系列粘附分子及趋化因子，又进一步导致外周血单核细胞激活，侵入动脉内膜形成泡沫细胞，加速动脉粥样硬化形成[8]。Das等[9]研究发现糖基化终末产物与其受体结合，可激活c_jun NH2_terminal kinase(c_JNK)，进而激活NF_kB。本研究中糖尿病组患者为新诊断的T2DM患者，未进行任何生活方式及药物的干预，处于慢性高血糖、高甘油三酯状态，其血清炎症因子hs_CRP明显升高，均可能导致外周血单核细胞的NF_kB激活，而升高的NF_kB又导致炎症状态的放大，形成恶性循环。

　　因本文对象中存在一定比例高血压患者，故结果有一定局限性。今后应对初发T2DM患者按血压高低分组，并进一步累积扩大样本量，使结果更为确切。

　　【参考文献】

　　[1]Ross R. Atherosclerosis_an inflammatory disease[J]. N Engl J Med, 1999,340(2):115_126.

　　[2]Pradhan AD, Ridker PM. Do atherosclerosis and type 2 diabetes share a common inflammatory basis[J] Eur Heart J, 2002,23(11):831-834.

　　[3]Duncan BB, Schmidt MI, Pandow JS, et al. Low_grade systemic inflammation and the develoment of type 2 diabetes: the atherosclerosis risk in comunities study[J]. Diabetes, 2003,52(7):1799-1805.

　　[4]Freeman DJ, Norrie J, Caslake MJ, et al. C_reactive protein is an independent predictor of risk for the development of diabetes in the West of Scotland Coronary Prevention Study[J]. Diabetes, 2002,5 1(5):1596-1600.

　　[5]Monaco C Andreakos E. Kiriakidis S, et al. Canonical pathway of nuclear factor kappa B activation selectively regulates proinflammatory and prothrombotic responses in human atherosclerosis[J]. Proc Natl Acad Sci USA,2004,101(15):5634-5639.

　　[6]Peng Q, Wei Z, Lau BH. Pycnogenol inhibits tumor necrosis factor_alpha_induced nuclear factor kappa B activation and adhesion molecule expression in human vascular endothelial cells[J]. Cell Mol Life scj, 2000,57(5):834-841.

　　[7]Ghanim H, Aljada A, Hofmeyer D, et al. Circualting mononuclear cells in the obese are in a proinflammatory state[J]. Circulation, 2004,110(12):1564-1571.

　　[8]Ritchie ME. Nuclear factor_kappaB is selectively and markedly cativated in humans with unstable angina pectoris[J]. Circulation, 1998,98(17):1707-1713.

　　[9]Das KC. c_Jun NH2_terminal kinase_mediated redox_dependent degradation of IkappaB:role of thioredoxin in NF_kappaB activation[J]. J Biol Chem, 2001,276(7):4662_4670.