IL-6 启动子-174G/C基因多态性与冠心病关系研究

　　作者：王静， 曾 敬， 詹中群， 王 玮 作者单位：郧阳医学院1预防医学教研室;2附属人民医院中医科 ;3附属太和医院心内科，湖北 十堰 442000

　　【摘要】 目的：在湖北汉族人群中研究IL-6基因启动子-174G/C多态性与冠心病的关系。方法：应用聚合酶链-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测50例冠心病患者和60名非冠心病对照人群IL-6 启动子-174G/C多态性。结果： 研究人群IL-6基因启动子-174只有GG和GC基因型，未见CC基因型，且基因型以GG为主(98.12%)。结论： IL-6启动子-174C等位基因在湖北汉族人群中的分布频率极低，对该类人群的冠心病易感性影响不大。

　　【关键词】 冠状动脉疾病

　　Association between interleukin-6 promoter-174G/C polymorphism and coronary heart disease in Hubei Han population WANG Jing1,ZENG Jing2,ZHAN Zhong-qun3,et al.(1Department of Preventive Medicine;2Department of Traditional Chinese Medicine,Renmin Hospital;3Department of Cardiology, Taihe Hospital,Yunyang Medical College,Shiyan,Hubei 442000,China)

　　Abstract: Objective To investigate the relationship between interleukin-6 promoter-174G/C polymorphism and coronary heart disease in Chinese Hubei Han population. Methods Population based case-control study was conducted using PCR-RFLP techniques to explore the relationship between interleukin-6 promoter-174G/C polymorphism and coronary heart disease in 50 patients and 60 controls.Results There were only IL-6 gene-174G/G and G/C genotypes in the study population.-174G/G was the major genotype.Conclusion The IL-6-174 C allele was rare in Hubei Han population. -174G/C polymorphism is not associated with the susceptibility to CHD in Hubei Han population.

　　Key Words: coronary heart disease;interleukin-6;polymorphism

　　冠心病是一种炎症性疾病，在其发病的各个阶段都有炎症的参与[1]，其发生是环境因素和遗传因素相互作用的结果。IL-6是炎症反应中的一种重要的细胞因子，与冠心病发病密切相关;IL-6基因也是多种冠心病发病候选基因中的一种[2]。有很多报道认为IL-6基因启动子-174G/C多态性与冠心病相关，这些报道涉及的人群均为高加索种白人。由于基因多态性有很强的种族差异，本研究旨在探讨湖北省汉族人群中是否存在炎症细胞因子IL-6基因启动子-174G/C的多态性及其与冠心病的关系。

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象

　　所有受检者均为无血缘关系的中国湖北汉族人。60例病例来源于2002年7月至2003年3月在武汉市三大医院心内科住院确诊或经冠状动脉造影检查确诊的冠心病患者，50个对照来源于武汉市城区体检的非冠心病人群。冠心病组平均年龄为64.14岁，对照组平均年龄为62.52 岁。采用Inter-heart调查表收集研究对象的一般情况、家族史、职业史、既往史、生活环境、营养情况、生活史，调查前取得研究对象的知情同意。

　　1.2 研究方法

　　1.2.1 基因组DNA抽提：抽取研究对象肘静脉血6ml，肝素抗凝。取300μl全血按PUREGENE DNA 提取试剂盒说明书进行DNA抽提。

　　1.2.2 IL-6启动子-174基因型测定：聚合酶链反应(PCR)：以基因组DNA为模板进行DNA扩增。扩增的引物序列为：上游引物：5，-TGACTTCAGCTTTACTCTTGT-3，下游引物5，-CTGATTGGAAACCTTATTAAG-3[3](北京奥科生物技术有限公司合成) 。25μlPCR反应体系：1μg基因组DNA，4×dNTP 0.5μl(10mmol/L)，10×Buffer 2.5μl，引物各1μl(10pmol/μl)，Taq酶0.5U(晶美公司)，补充去离子水至25μl。扩增条件为：预变性94℃ 10min，变性94℃ 1min，复性51℃ 45s，延伸72℃ 1min，共34个循环，最后72℃ 10min延伸。

　　1.2.3 限制性片段长度多态性检测：PCR产物10μl，HSP92II 5U(Promega公司)，10×Buffer 2μl，BSA 0.2μl，补充去离子水至20μl，37℃ 4小时，加Loading Buffer 1μl 终止反应。

　　1.2.4 电 泳：酶切产物在2%的琼脂糖凝胶上80V电压电泳45 min。在2%的琼脂糖胶经溴化乙锭(EB)显色，法国VL公司全自动凝胶成像系统照相后，保存结果。

　　1.3 统计学处理

　　采用SPSS 11.5统计软件，计量资料两组间比较经正态性检验为正态分布者，采用 t 检验，不符合正态分布采用非参数检验中的Wilcoxon秩和检验。计数资料的两组间比较采用χ2检验。显著性水平为双侧P<0.05。

　　2 结果

　　2.1 冠心病组和对照组临床特征的比较

　　表1可见，年龄、高血压史、饮酒史、血浆甘油三酯、血糖在两组间比较差异无显著性。性别、吸烟史及TC、IL-6水平在两组中差异显著。表1 冠心病组和对照组临床特征的比较

　　2.2 IL-6基因型分析结果

　　PCR产物片段总长度为191bp，-174C等位基因包含两个Hsp92II的酶切位点(CATG^)，消化后被切为30/118/43三种片段， -174G等位基因只有一个酶切位点，产生30/161两种片段。电泳后，出现118bp片段的为C/C基因型，出现161bp片段的为G/G基因型，两种片段都出现的则为G/C杂合子。本实验中仅出现G/G型和G/C型(见图1)。

　　图1 PCR产物酶切后电泳图

　　2.3 冠心病组和对照组IL-6启动子-174基因型比较

　　表2可见，湖北汉族人群IL-6基因启动子-174只有GG和GC基因型，未见CC基因型。GG、GC基因型在冠心病人群为100%、0%，对照人群中为96.7和3.3%。G、C等位基因的频率在病例中为100%、0%;对照中为98.3%、1.7%。 将两组人群合并，则G/G和G/C基因型分别为98.12%和1.82%;G等位基因频率为99.1%，C为0.9%。各基因型及等位基因在病例组和对照组的分布无差异(p>0.05)。表2 冠心病组和对照组IL-6启动子-174基因型比较

　　3 讨论

　　冠心病发病率逐年增加，已成为威胁我国人民健康的主要疾病之一。性别、吸烟史、血浆总胆固醇是冠心病传统的危险因素。在本次研究中，对象均为老年人，女性最小年龄为51岁，全部女性均进入绝经期，因此未显示出性别对冠心病患病的危险性。其他因素如吸烟史、血浆总胆固醇与以往研究结果一致。再次证明提倡戒烟与低脂饮食对人群尤其是中老年人群的冠心病防治有重大意义。冠心病也是一种炎症性疾病[1]，细胞因子、趋化因子、生长因子等众多炎症介质形成网络，与细胞受体共同参与动脉壁上的细胞间信号活化及传递。很多细胞因子(IL-6、CRP、TNF等)已经成为炎症有效的系统标志物。

　　很多文献均报道Il-6的水平是冠心病发病的危险因素[4-5]。IL-6是一种分子量为27kDa 的细胞因子，主要由单核巨噬细胞、血管内皮细胞和T细胞(主要为Th2细胞)产生，是炎症反应的重要因子，可作为急性期反应因子参与炎症过程，导致组织损伤。在冠心病炎症初期，在TNF-α的刺激下IL-6被激活，进而刺激肝脏生成CRP，同时激活巨噬细胞、心肌细胞的一氧化氮合酶，使NO合成增加。IL-6影响急性时相蛋白纤维蛋白原的生成，而纤维蛋白原参与血栓和斑块的形成，是动脉粥样硬化中重要的风险因素。本研究结果表明：冠心病病人中的IL-6水平显著高于对照组水平(P<0.01)，证证IL-6参与了冠心病的发生和发展，是冠心病有效的系统标志物。

　　人群对冠心病的易感性可能与炎症因子在基因水平的表达差异有关[2]。IL-6基因位于第7号染色体，基因启动子区具有4个多态性位点，分别为-174G/C，-373An/Tn，-572G/C，-597G/A。启动子区的改变可能影响IL-6的基因转录。对高加索种白人的流行病学研究表明-174位点多态性与动脉粥样硬化病人的冠心病发病有关[6]：-174位点G/G和G/C基因型者血清IL-6水平显著高于C/C基因型者[3];GG基因型与主动脉壁厚度相关 [7]; G/G和G/C基因型者患冠心病的危险性要大于C/C基因型者[8]。

　　NCBI的dbSNP数据库中，IL-6-174G/C等位基因平均分布频率分别为0.617和0.383，C等位基因在白种人中频率较高。本研究发现研究人群中IL-6 -174G/C多态性分布符合hardy-weinberg 遗传平衡定律，达到遗传平衡，具有群体代表性，可以代表湖北汉族人群。因此该位点在湖北人群中的基因型以G/G为主，G/C基因型少见， C/C基因型更为稀少。国内其他人群[9]和日本人群[10]C等位基因频率为0，本次研究结果与之基本一致。冠心病组和对照组中，各基因型的分布没有发现显著性差异(p>0.05)，未能发现冠心病与该基因位点的关系。由于C等位基因频率很小，不能分析该基因多态性与IL-6水平的关系。因此IL-6-174G/C多态性在湖北汉族人群中的分布与白种人不同，其多态性与湖北汉族人群冠心病的易感性无关。

　　由于IL-6 -174C等位基因在汉族分布稀少，在比较C/C、G/C与G/G基因型与汉族人群冠心病发病关系时，扩大样本不是切实可行的方法。可以借鉴外国人群的相关数据，从细胞学角度进一步研究IL-6 -174C等位基因对IL-6水平的影响机制。考虑汉族人群冠心病发病的危险因素时，则可以忽略该基因的作用。

　　总之，本研究显示湖北汉族人群与白种人相比，IL-6基因-174G/C多态性分布不同，由此导致的两族群对冠心病的易感性也不同。

　　【参考文献】

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