原发性高血压患者外周血单核细胞趋化因子1基因表达及意义

　　作者：魏云鸿 刘兴德 作者单位：贵阳医学院附院 心血管科， 贵州 贵阳 550004

　　【摘要】 目的： 观察原发性高血压(EH)患者外周血单核细胞趋化因1(MCP1)基因表达，探讨其与EH的关系及意义。方法: 用酶联免疫吸附(ELISA)法测定62例EH患者和30例正常对照者外周血MCP1蛋白含量，用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法检测外周血单个核细胞中MCP1 mRNA表达。结果： 与对照组比较，EH组外周血MCP1蛋白含量及外周血单个核细胞MCP1 mRNA表达均显著增高(P<0.01)。结论： (1)MCP1可能参与了EH的病理生理过程;(2)外周血单个核细胞的MCP1 mRNA表达上调可能是EH患者外周血MCP1蛋白含量增高的机制之一。

　　【关键词】 高血压 趋化因子 单核细胞 基因表达 逆转录聚合酶链反应 酶联免疫吸附测定

　　原发性高血压(essential hypertension，EH)是常见的心血管疾病，也是导致心脑血管疾病的重要危险因素。近年来，越来越多的学者认为EH是一种与遗传、环境、代谢极为相关的复杂疾病[1～3]，当EH与其他相关危险因素并存时，单纯的血压控制只能使不到60%的患者获益，而危险因素的干预才能获得更大的益处。因此，积极探讨EH的发病机制及其影响因素，对更有效的控制EH，减轻其危害已成为医务工作者的共识。有学者研究发现，炎症可能在EH的发病机制中起着重要的作用[4]，2007年2月～12月实验检测EH患者外周血单核细胞趋化因子1(monocyte chemotactic protein1，MCP1)蛋白水平及单个核细胞MCP1 mRNA的表达，探讨外周血MCP1的变化与EH的关系。

　　1 对象与方法

　　1.1 对象及分组

　　按《中国高血压防治指南(2005年修订版)》[5]制定的标准，选取心血管科住院和门诊新诊断或未经正规降压治疗的EH患者62例，同时选取血压正常的30例健康体检者作为对照组。排除继发性高血压、血栓出血性疾病、糖尿病、高脂血症、感染、严重肝肾疾病、自身免疫性疾病及肿瘤性疾病，排除近期有手术或外伤史等影响MCP1的因素。

　　1.2 方法

　　1.2.1 主要试剂和仪器 人淋巴细胞分离液(上海捷瑞)，Trizol试剂(美国Invitrogen)，焦炭酸二乙酯(瑞兴)，逆转录试剂盒(Promega)，PCR试剂盒(Promega)，100 bp DNA Ladder Marker、D2000 DNA Marker(天根生化)，人MCP1 ELISA 试剂盒(美国R&D公司);ULT13863三洋-80 ℃低温冰箱(日本)，5745台式冷冻离心机(德国)，Eppendorff centrifuge 5810R 高速离心机，Amersham核酸蛋白分析仪，PCR仪(PE geneAmp PCR System 2400)(Perkin Elmer)，DNA成像分析仪(Gel Doc EQ，BioRad)，酶标仪(ELx800，BioTek公司)。MCP1引物设计由上海生工合成，上游引物5' AGGAAGATCTCAGTGCAGAGG 3'，下游引物5' – AGTCTTCGGAGTTTGGGTTTG 3';βaction：上游引物5'AGCGAGCATCCCCCAAAGTT 3'，下游引物5'GGGCACGAAGGCTCATCATT 3'。

　　1.2.2 标本采集 受检者空腹12 h，于次日清晨6∶00～7∶00采集肘正中静脉血8 ml，其中4 ml置普通生化管中，室温静置2 h，自然凝固后予离心10 min，1 000 r/min收集上清液置于-80℃冰箱保存待测;另4 ml置于EDTA抗凝试管中摇匀后即刻置40 ℃冰箱冷存，于6 h内提取RNA用。

　　1.2.3 外周血MCP1蛋白含量测定 用保存待测的血清，依照MCP1 ELISA试剂盒说明书的步骤操作。用酶标仪检测450 nm波长下各孔吸光度，根据吸光度值计算标本中MCP1的浓度。

　　1.2.4 人血单个核细胞中RNA提取和逆转录聚合酶链反应(RTPCR) 淋巴细胞分离液提取外周血中单个核细胞后，按照说明书的步骤提取总RNA;按逆转录试剂盒说明书步骤合成cDNA，并用PCR技术扩增目的片段，PCR产物用1.5% 琼脂糖凝胶跑电泳，溴乙锭显色。测定各条带灰度值，以βactin为内参，用MCP1与βactin的灰度比值定量MCP1。

　　1.2.5 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件进行数据分析处理，数据以(x±s)表示，组间比较采用t检验，P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著。

　　2 结果

　　2.1 一般资料

　　EH组及对照组的一般资料见表1。两组研究对象的年龄、性别、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、总胆固醇、空腹血糖和外周血白细胞比较，无统计学差异。表1 EH组及对照组的基本资料注：TC示总胆固醇，TG示甘油三酯，FBG示空腹血糖，LDL示低密度脂蛋白，HDL示高密度脂蛋白，WBC示白细胞。

　　2.2 MCP1水平及MCP1 mRNA表达

　　见表2。与对照组比较，EH组外周血MCP1蛋白水平及单个核细胞MCP1mRNA表达均显著增高(P<0.01)。表2 外周血MCP1水平及单个核细胞MCP1mRNA表达注：(1)与对照组比较, P<0.01。

　　3 讨论

　　EH是最常见的心血管疾病之一。传统观念认为，EH是多种因素引起的血液流变学异常，表现为心搏出量和(或)外周阻力增加，治疗目标也仅限于用药物控制血压。随着对EH发病机制的深入研究，发现在EH发生发展的不同阶段，血管炎症是一个主要的、共同的病理特征，提示EH与炎症关系密切[6]。

　　MCP1为碱性蛋白，属于趋化因子超家族，可由炎症介质刺激的单核-巨噬细胞、淋巴细胞、成纤维细胞、内皮细胞及平滑肌细胞分泌。MCP1在体内及体外均有强大的诱导单核-巨噬细胞聚集、附壁、游走的功能，是炎症的始动因子及标志[7]。研究发现，原发性高血压患者外周血MCP1蛋白含量升高，认为EH可能是一种慢性炎症过程[8]。本研究显示，EH患者外周血MCP1蛋白水平显著升高，提示MCP1可能参与了EH的病理生理过程。因此，积极探索控制炎症的方法可能是高血压乃至冠心病具有前景的治疗策略之一。

　　EH患者外周血MCP1升高的机制尚不十分明了，可能来源于与内皮细胞、血管平滑肌细胞等上调表达MCP1 mRNA有关，但外周血MCP1蛋白的升高是否与外周血单个核细胞中MCP1 mRNA表达上调有关尚未见报道。本研究显示，与对照组比较，单纯EH组外周血单个核细胞中MCP1 mRNA表达显著增高，提示外周血单个核细胞的MCP1 mRNA表达上调可能是导致EH患者外周血MCP1蛋白含量升高的一个因素，但是否与内皮细胞等其它因素有关，需进一步实验证实。由于MCP1蛋白可能进一步激活CCR2趋化因子受体，介导趋化活性，使单核细胞和巨噬细胞发生移行，黏附于血管内皮细胞，进一步损伤血管内皮[9]，使其产生更多的炎症因子，加速血管重构，使血管壁顺应性下降，从而使血压升高。因此，针对炎症的治疗，或许对控制血压有一定意义。

　　【参考文献】

　　[1]Lillie EO,Daniel T,Connor O.Early phenotypic changes in hypertension: a Role for the autonomic nervous system and heredity[J].Hypertension,2006(3): 331 - 333.

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　　[3]Schillaci,M. Pirro,G. Vaudo, M, et al.Metabolic Syndrome Is Associated With Aortic Stiffness in Untreated Essential Hypertension[J].Hypertension,2005(6): 1078 - 1082.

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　　[8]Madej A, Okopien B,Kowalski J,et al.Plasma concentrations of adhesion molecules and chemokines in patients with essential hypertension [J]. Pharmacol Rep, 2005(6):878-881.

　　[9]Ridker PM,Buring JE,Rifai N.Soluble Pselectin and the risk of future cardiovascular events[J]. Circulation, 2001(103):491-495.