αadducin基因型与低肾素型原发性高血压的关系

αadducin基因型与低肾素型原发性高血压的关系作者：赵利群, 高平进, 朱鼎良, 郑明芳    作者单位：上海市瑞金医院上海市高血压研究所，上海 200025    【摘要】  目的 研究αadducin基因Gly460Trp多态性与低肾素型原发性高血压的关系。方法 聚合酶链反应（PCR）聚丙烯酰胺凝胶电泳检测基因型，采用放射免疫分析法测定样本的血浆肾素活性（PRA）。结果 αadducin基因 Gly460Trp突变没有损伤肾脏钠盐调控，不影响肾素水平，低肾素型原发性高血压与正常肾素型原发性高血压的基因型分布差异无统计学意义。结论 αadducin基因Gly460Trp多态性与低肾素型原发性高血压无相关性。    【关键词】  αadducin； 多态性； 肾素； 原发性高血压    Relationship between Gly460Trp polymorphisms of αadducin gene and low renin hypertension   ZHAO Liqun1，2，GAO Pingjin1，ZHU Dingliang1，ZHENG Mingfang2. 1. Shanghai Ruijin Hospital, Shanghai Hypertension Institute, Shanghai 200080, China; 2. ICU of emergency department, Shanghai No1 People’s Hospital, Shanghai 200025, China    Abstract：Objective  To investigate the relationship between Gly460Trp polymorphisms of αadducin gene and low renin hypertension.   Methods  Genotypes of αadducin was determined by polymerase chain reaction (PCR)polyacrylamide gel electrophoresis. Plasma renin activity（PRA） was detected by radio immunoassay.   Results  Gly460Trp polymorphisms of α adducin gene was not associated with PRA. No significant difference of αadducin genotypes was found between low renin hypertensive patients and normal renin hypertensive patients.   ConclusionsThere is no relationship between Gly460Trp polymorphisms of αadducin gene and low renin hypertension.    Key words：  αadducin;  Polymorphism;  Renin;  Essential hypertension    原发性高血压是一种由遗传因素和环境因素共同作用引起的疾病，一般认为人群中血压变异的30%～50%是由遗传因素决定的，目前与原发性高血压相关的基因大约150多种，1997年Cusi等[1]在意大利和法国人群中证实了αadducin基因Gly460Trp突变，并发现T等位基因与高血压相关（P＜0.05）。自此以后，许多研究都在关注αadducin基因与高血压的相关性，但各家报道不一。1998年Kazuhiko[2]发现在日本人中尽管Gly460Trp突变发生率很高，但是T等位基因与高血压发病机制无关，这个结果在中国、美国、荷兰及其他种族中同样得到了证实[35]。当然还有相反报道，如：Nicola等[6]报道在意大利高血压患者中T等位基因频率较正常人高(P＜0.05)， T等位基因携带者肾素水平低，应用利尿剂治疗血压下降明显，南非、北欧（斯堪的纳维亚人）和日本研究者同样认为αadducin基因Gly460Trp突变与高血压密切相关[79]。    原发性高血压根据肾素水平可分为高肾素型、正常肾素型和低肾素型3种类型[10]，低肾素型高血压就是盐敏感性高血压。αadducin基因是与钠盐代谢相关的基因，T等位基因可能通过激活NaKATP酶促使肾小管重吸收而影响血压[1]，本研究通过肾素中间表型将原发性高血压进一步细分，从而探讨αadducin基因与低肾素型原发性高血压关系。1  对象和方法    1.1  研究对象    病例组278例来自2000年2月至2002年7月上海市瑞金医院高血压科住院患者，入选高血压患者男149例，女129例，平均年龄(56.6±12.6)岁。正常对照组231例来自上海某工厂体检者，男128例，女103例，平均年龄（51.0±5.2）岁。    高血压患者入选标准:收缩压≥140 mm Hg (1 mm Hg＝0.133 kPa)或舒张压≥90 mm Hg，患者未服用抗高血压药物或停用抗高血压药物两周，除外心衰、脑出血和肾脏疾病，排除继发性高血压。    正常肾素标准：基础血浆肾素活性0.1～5.5 ng·ml－1·h－1，激发（立位2 h+速尿20 mg肌注）血浆肾素活性0.73～17.4 ng·ml－1·h－1。2  研究方法    2.1  DNA抽取    抽取外周静脉血4 ml，EDTA抗凝，红细胞清洗液2 ml洗涤，离心3次，取沉淀，再加白细胞裂解液2 ml、蛋白酶K 18 μg，37℃水浴4 h，加酚、氯仿、乙醇提取白细胞基因组。    2.2  αadducin基因型检测    (1)PCR扩增：以基因组DNA作为模板进行PCR扩增，引物根据adducin序列利用Primer3引物设计软件设计，由上海生工合成。    野生型引物序列： 5′GGG GCG ACG AAG CTT CCG AGC TAG3′突变型引物序列：5′GCT GAA CTC TGG CCC AGG CGA CGA AGC TTC CGA GGA TT3′互补引物序列：  5′CCT CCG AAG CCC CAG CTA CCC A3′    30 μl PCR反应体系：模板100 ng，野生型引物和突变型引物序列各15 pmol/L，互补引物20 pmol/L dNTPs和Tag DNA聚合酶2U。扩增条件：94℃预变性，随后94℃变性45 s，退火1 min，72℃延伸1 min，共35个循环，最后置于72℃延伸10 min。    (2) 电泳：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，凝胶浓度8%，将3 μl上样缓冲液（0.2%溴酚蓝，30%甘油）与10 μl PCR产物混匀取8 μl上样。采用垂直电泳槽电泳，在恒压（130V）下电泳5 h，然后将凝胶染色观察，记录结果。MSPCR法αadducin基因分型可见G、T等位基因的扩增片段长度分别为220 bp和234 bp，扩增产物中只含有220 bp片段，基因型为GG纯合型，只含有234 bp片段，基因型为TT纯合型，同时含有220 bp和234 bp片段者，基因型为GT型。    2.3  血浆肾素测定    清晨卧位空腹采肘静脉血2 ml，肝素抗凝，离心分离，去上清液，置－20℃低温冰箱保存待测。采用放射免疫分析法测定样本中肾素各值测定中均选用北京北方所放免试剂盒。    2.4  统计学处理    应用SPSS10.0软件包进行统计分析，各统计指标均以均数±标准差（±s）表示。计量资料的组间比较采用团体t检验和ANOVA，计数资料的组间比较采用χ2检验。血压与基因型的关系用多元线性回归分析，P＜0.05认为差异有统计学意义。3  结果    对高血压组和正常组的基因型分布进行了平衡检验，高血压组χ2=0.257, χ2＜χ20.05=3.841（P＞0.05）; 正常组χ2=0.192, χ2＜χ20.05=3.841（P＞0.05），即各基因型与根据HardyWeinberg遗传平衡定律预测的频率之间无统计学差异。由此可见，两组基因型都符合HardyWeinberg遗传平衡。本研究显示中国人TT基因型频率高于高加索人（11.0% vs.4.1%）[1]，但低于日本人（11.0% vs.28.5%）[11]。原发性高血压与正常血压组基因型分布和等位基因频率差异无统计学意义（表1）。高血压组αudducin不同基因型一般资料见表2。    可以看出3种基因型的性别、年龄、IBM、24 h尿钠、尿钾排泄量、PRA差异无统计学意义，但TT型年龄较GT、GG型小（54.57±1.7 vs.57.42±1.09、56.60±1.29），IBM也最小（24.62±0.40 vs. 25.38±0.32、25.76±0.38 ）。GG型、GT型、TT型24 h平均收缩压差异有统计学意义（151.62±1.71、154.32±1.42、146.38±2.37，P=0.013），但舒张压没有差异。通过多元线性回归分析，排除性别、年龄、IBM等因素的影响，3种基因型与24 h收缩压、舒张压不存在相关性［以性别、年龄、IBM及基因型为自变量，收缩压、舒张压为因变量P=0.077(SBP)  P=0.126(DBP）］（表2）。低肾素组和正常肾素组高血压患者的性别、年龄、IBM和血压差异无统计学意义，但低肾素组的年龄较大，收缩压偏高（表3）。将高血压组细分为低肾素和正常肾素两组，两组间3种基因型及等位基因分布差异无统计学意义。低肾素组TT型所占比例为18.6%与正常肾素组相比（20.8%）没有差异（表4）。 表1  高血压与正常组之间αadducin基因型和基因频率比较 表2  高血压组αadducin不同基因型一般资料的比较表3  不同肾素高血压组一般资料的比较表4  低肾素型高血压组和正常肾素型高血压组αadducin基因型和等位基因频率4  讨论    本研究入选的患者为未服用降压药的轻度高血压患者，应用动态血压作为血压指标，与偶测血压相比，可以更好反映患者的真实血压。从表2可以看出3种不同基因型的收缩压不同，TT型收缩压最低，但通过多元线性回归分析，排除年龄、IBM等因素的影响，发现收缩压与基因型之间不存在相关性。收缩压升高与动脉弹性关系密切，动脉硬化程度与年龄相关，年龄越大，动脉硬化程度越高，老年性高血压的特点就是以收缩压升高为主。在这3种基因型中TT型年龄最小，GT型年龄最大，收缩压也最高，所以表1看到的收缩压差异是年龄引起的，与基因突变无关。这个推论在表1和表3中可以进一步得到证实：高血压组和正常血压组基因型分布没有差异，低肾素组的收缩压高于正常肾素组，这个差异与年龄有关。    文献报道,有高血压家族史的人群盐敏感发生率高，即使目前血压正常，将来发生高血压的几率明显高于其他人群[12]。以前一些研究认为盐敏感是由于肾脏自身问题或循环和神经因素影响肾脏功能而造成的。譬如一些盐敏感患者存在胰岛素抵抗[13]，在糖皮质激素可治疗性高醛固酮症（GRA）中，患者的盐皮质激素生成增加导致钠重吸收增多[14]。但Liddle’s综合征和表现盐皮质激素过多综合征是因为单基因突变改变了钠调节而导致盐敏感性高血压[15]。αadducin是细胞膜骨架蛋白，与跨膜离子转运、细胞信号转导有关，那么Gly460Trp突变是否可以改变肾小管重吸收功能，各家报道不一。Kamitani认为Gly460Trp突变与肾小管钠盐调控无关[16]，其他研究显示T等位基因携带者应用利尿剂后平均动脉压下降明显，基础PRA水平低，FENa降低[1]。近来，Frederick 通过检测红细胞钠钾离子相互转运（SLC）进一步证实了TT基因型改变了细胞内外钠交换，损害了钠调控。本研究入选的高血压患者没有肾脏疾病，同时对钠盐摄入进行了严格控制，在排除饮食和肾脏自身病变对钠盐排泄的影响基础上，3种基因型24 h尿钠、尿钾排泄量差异无统计学意义，也就是说Gly460Trp突变对肾小管钠盐调节没有影响。    虽然3种基因型的PRA差异无统计学意义，但TT型PRA最小，GT型最大，这3组当中TT基因型年龄最小，而GT型年龄最大，随着年龄增长，血浆肾素水平下降，尤其年龄大于60岁[10]。从表2结果来看纯合TT型似乎对肾素水平有影响。现将原发性高血压分为低肾素组和正常肾素组，并未发现两组的基因分布差异有统计学意义，也就是说αadducin基因的G/T多态性与低肾素型高血压无关。    综上所述，αadducin Gly460Trp突变没有损伤肾脏钠盐调控，不影响肾素水平，与低肾素型原发性高血压发病无相关性。【参考文献】［1］Cusi D, Barlassina C, Azzani T, et al. 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