甘肃省东乡族高血压患者血管紧张素Ⅱ1型受体基因多态性与血脂水平的遗传易感性

甘肃省东乡族高血压患者血管紧张素Ⅱ1型受体基因多态性与血脂水平的遗传易感性作者：方金瑞 马丽雅 黄新梅    作者单位：730000兰州，甘肃省人民医院心内科（方金瑞、马丽雅）；兰州市第一人民医院（黄新梅）    【关键词】  甘肃省 东乡族 高血压 血管紧张素Ⅱ 1型受体 基因多态性 血脂 遗传易感性    血脂异常可导致动脉粥样硬化、高血压等心脑血管病的发生与发展，已成为危害人们健康的重要社会因素。2004年调查显示高TC血症占9%,高低密度脂蛋白血症占7.4%，高三酰甘油（TG）血症占11.9%，血脂异常仍在继续快速上升。本研究通过检测甘肃东乡族（属国内外独有的少数民族）高血压患者与健康对照的血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）基因A1166C多态性，探讨该基因多态性与血脂水平的关系，以期从分子水平探讨高血压的发病机制，为高血压的早期防治提供帮助。1  对象和方法    1.1  研究对象    东乡族高血压组115例，其中男性73例，女性42例，平均年龄（52.2±14.7）岁，病例来自我省特有的少数民族——东乡族。血压的测量及诊断符合《2007中国高血压指南》的标准，确诊为原发性高血压，均排除了其他原因引起的继发性高血压，无冠心病、糖尿病等其他疾病。对照组为东乡族健康人102名，男性60名，女性42名，平均年龄（52.2±14.7）岁。    1.2  研究方法    血脂异常的诊断符合《2006WHO/ISH血脂指南》，分别为血清TG>1.70 mmol/L，总胆固醇（TC）>5.72 mmol/L，高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)<1.04 mmol/L，低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)>3.64 mmol/L。    1.3  检测方法    1.3.1  血脂和脂蛋白测定  受试者均禁食8 h 以上,于早晨6～7时取卧位肘静脉血,置于干燥管,采用标准酶联法测定TC、TG、HDLC和LDLC。    1.3.2  白细胞基因组DNA的提取  空腹抽取肘静脉血约3 ml，用2%EDTA抗凝管抗凝，分离白细胞，用酚/氯仿常规方法提取基因组DNA。    1.3.3  基因检测用PCR扩增及RFLP方法［1］  AT1R基因的PCR引物：正向引物F:5′ATAATGTAAGCTCATCCACC3′，负向引物R:5′GAGATTGCATTTCTGTCGGT3′。PCR扩增：在25 μl PCR混合反应液中，分别含有1.0 mmol/L MgCl2, 4种dNTP各120 μmol/L,各种引物分别为0.12 μmol/L,Taq DNA 1.6 U, 模板DNA 20 ng。PCR条件：94 ℃预变性60 s,94 ℃变性40 s,58 ℃退火40 s，72 ℃延伸50 s，循环30次，再于72 ℃延伸10 min。经1.5％琼脂糖电泳确定有一条274 bp带后，将PCR产物用限制酶DdeI(fermentas life science)1.5 U 37 ℃水浴酶切8 h，A等位基因含DdeI限制位点，Taq DNA聚合酶扩增，5 U DdeI酶切，酶切后产生165 bp和109 bp两条带；C等位基因不能被DdeI消化，只有274 bp 1条带。2.5%琼脂糖凝胶（EB染色）电泳分析。AA=274 bp, CC=165 bp+109 bp, AC=274 bp+165 bp+109 bp。结果如图1。    1.4  统计学分析    应用SPSS 11.0统计软件，所有计量资料以均数±标准差表示，计数资料采用χ2检验，计量资料用t检验，以P<0.05，差异有统计学意义。2  结果    2.1  原发性高血压组与对照组血脂水平的比较注：与对照组比较注：高血压组与对照组比较，aP<0.051：AA型；2：AC型；3：CC型；M：DNA标准参照物    图1  AT1R基因酶切产物A1166C多态性    东乡族高血压组的TC、TG明显高于对照组（P<0.05），见表1。    2.2  东乡族各基因型与血脂、脂蛋白水平的关系    高血压组AA，AC+CC基因型的TG水平高于对照组，而TC只有AC+CC基因型高于对照组（P<0.05），见表2。3  讨论    AT1R基因已经分离出来，它位于3q22上，全长1000 bp，只有一个外显子，无内含子结构，它能编码359个氨基酸，在AT1R基因的编码区未见功能性改变，只有A1166C在原发性高血压患者中出现频率差异性，即位于3′端非编码区（3′UTR），碱基腺嘌呤（A）转变为胞嘧啶（C）所引起的变异［2］，从而构成了AT1R基因A1166C多态性。国内有新疆哈萨克族、海南黎族等少数民族血脂水平与基因多态性的相关报道，甘肃东乡族的类似研究未见报道［34］。    血脂异常在高血压中的地位日益重要，血脂代谢与高血压关系十分密切［5］，即使是年轻瘦弱、血压正常的受试者，只要伴有高血压家族史也可能引起血脂代谢的异常变化。近年来的研究显示，高血脂的发生与基因的变异有关，它是发病的基础，Morisawa等［6］发现A1166C基因多态性与有TC血症的原发性高血压患者密切相关,认为TC升高是携带有C等位基因的原发性高血压患者的一个非常重要的危险因素。本实验显示，东乡族人群的血脂水平总体低，这可能与东乡族人群生活水平偏低，生活环境艰苦，低脂饮食等有关。我们分析发现，东乡族高血压组的TC、TG明显高于对照组，进一步提示基因在高脂血症、高血压发病中的作用。在高血压组中，AT1R基因AC+CC型与血浆TC、TG水平相关，表现为AC+CC基因型者具有较高的TC、TG水平，显著高于对照组AC+CC型的患者,高血压组的AT1R基因AA型具有较高的LDLC水平。我国学者钟亚等［7］发现，AT1R基因与血浆Lp(a)水平呈正相关，表现为AC基因型者具有较高的Lp(a)水平，也表明AT1R基因多态性与血脂有关。    AT1R基因A1166C多态性与国人高血压患者部分生化指标之间存在一定程度的相关性，本研究进一步了解高血压基因多态性与血脂的关系，有利于更有效的防治高血压及并发症。【参考文献】［1］Ken SUGIMOTO,Tomohiro KATSUYA,Takayoshi OHKUBO, et al. Association between Angiotensin II Type 1 Receptor Gene Polymorphism and Essential Hypertension:the Ohasama Study.Hypertens,2004,27:551556.［2］余惠珍,白玉茹,陈慧,等.血管紧张素Ⅱ1型受体多态性原发性与高血压患者左室肥厚的相关性研究.临床心血管杂志,2002,18:242244.［3］钟江华，云美玲，金水晶，等.海南黎族高血压人群血管紧张素Ⅰ转化酶基因多态性与血脂的关系. 临床心血管病杂志,2007,23 :553554.［4］李涛，李南方，周玲.新疆哈萨克族人群中血脂水平与AT1R基因A1166C多态性的相关研究.心脑血管病防治,2007,7:47.［5］Hamid Nasri, Mohammad Yazdani. The relationship between serum LDLcholesterol,HDLcholesterol and systolic blood pressure in patients with type 2 diabetes. Kardiologia Polska, 2006,64:13641368.［6］Morisawa T, Kishimoto,Kitano M,et al. Influence of angiotensin type 1 receptor polymorphism on hypertension in patients with hypercholesterolemia.Clin Chim Acta,2001,304:9197.［7］钟亚,哈黛文.血管紧张素Ⅱ1型受体基因A1166/C多态性与原发性高血压及血脂水平关系.高血压杂志,2000,8:3538.