单核细胞和血小板CD40L高表达及血小板CD62P高含量与急性冠脉综合征的关系
发表时间：2009-11-27 浏览次数：579次
单核细胞和血小板CD40L高表达及血小板CD62P高含量与急性冠脉综合征的关系作者：沈凯，袁国裕，陈国雄，俞晓军，王炎一，方波，王红娜，魏峰涛 作者单位：1.舟山市人民医院心血管科,浙江舟山 316000；2.山东大学第二医院心血管科,山东济南 250033 【摘要】 目的 探讨急性冠脉综合征（ACS）外周血单核细胞和血小板表达CD40L及血小板CD62P含量的变化及意义。方法 应用间接免疫荧光流式细胞仪测定患者与对照组血单核细胞和血小板表达CD40L水平及血小板CD62P含量。结果 发现急性冠脉综合征患者（ACS）单核细胞和血小板表达CD40水平及血小板CD62P含量均显著高于正常对照者（NS）（P＜0.01）和稳定型冠心病患者（SA）（P＜0.05或P＜0.01）。结论 急性冠脉综合征患者外周血单核细胞和血小板表达CD40L及血小板CD62P含量可能与ACS的发生有关，是动脉粥样硬化斑块不稳定的标志。 【关键词】 CD40L；CD62P；急性冠脉综合征 To Investigate the Relationship between High Expression of CD40L and CD62P in Patients with Acute Coronary Syndrome. SHEN Kai，YUAN Guo_yu， CHEN Guo_xiong et al. Department of Cardiology, Zhoushan Hospital, Zhejiang 316000，China ［Abstract］ Objective To investigate the changes and significance of CD40L expression in peripheral blood monocyte and platelet and CD62P expression in platelets in patients with acute coronary syndrome (ACS). Methods The CD40L expression in monocytes and platelets and CD62P expression in platelet were analyzed by indirect immunofluorescence flow cytometry. Results The expression of monocyte and platelet CD40L and platelet CD62P was significantly higher in ACS patients than that in healthy people (P＜0.01) and stable coronary heart disease patients (P＜0.05 or P＜0.01). Conclusions The results showed that the expression of monocyte and platelet CD40L and platelet CD62P was increased in acute coronary syndrome and they might represent a marker of plaque unstability. ［Key words］ CD40L； CD62P ； Acute coronary syndromes 近年来研究发现CD40,CD40L参与了动脉粥样硬化（AS）的发生和发展。两者相互作用参与动脉粥样硬化斑块内主要细胞成分的炎症反应调节，其中CD40L是激活CD40L信号途径的主要配体，激活AS斑块中细胞分泌产生粘附分子、细胞因子、基质金属蛋白酶，组织因子等［1］。本文研究单核细胞和血小板CD40L表达及血小板CD62P含量与急性冠脉综合征的关系，探讨CD40L,CD62P在急性冠脉综合征发生发展中的作用。1 资料与方法 1.1 对象：冠心病患者62例，其中稳定性心绞痛（SA）32例，不稳定性心胶痛（UA）20例，急性心肌梗死（AMI）10例，UA、SA均经冠脉造影证实，AMI有心电图和心酶谱改变，均除外血液病、肝脏病、脑血管病、肾脏病，治疗前二周未服用影响血小板功能药物（如阿斯匹林等）及钙通道阻滞剂，并除外合并感染性疾病，如严重的上呼吸道感染，肺部和胆道感染等。正常对照组45例，心电图、血脂、心肝肾功能、血常规检查均无异常,除外各系统疾病的健康人。 1.2 方法：(1)试剂及仪器：CD40_FITC、CD40L_PE、单抗、PE_CD62P单抗及FACSCalibur流式细胞仪均为美国Becton_Dickinson(B_D)公司产品。(2)流式细胞术测定单核细胞表达CD40L：标本收集和准备：109mmol/L枸橼酸钠1:9抗疑，空腹静脉取血1.8ml，2小时内染色。染色和固定：在试管上对应于每一个样本作好识别标志，分别加入50ul抗凝血及5ul单抗,低速混匀3秒种，室温避光静置20～30min，每管中加入2ml溶血素，立即低速混匀，避光室温静置10～12min，离心（300×g）5min，弃上清液，留大约50ul液体于试管中以免损伤细胞团，每管中加入0.25ml含0.1％的多聚甲醛来固定细胞，低速混匀，固定30min，上机检测。(3)流式细胞术测定血小板表达CD40L:标本收集和准备：109mmol/L枸橼酸钠1:9抗凝，空腹静脉取血1.8ml，低速离心（500×g）5min，吸取PRP50ul,以等量1%多聚甲醛室温固定15min，加3mlPBS混匀，低速离心,弃上清液，留取0.2ml液体混匀，待用，2小时内染色。染色和固定：在试管上对应于每一个样本作好识别标志，加5ul试剂到试管中，用微量移液器小心地将5ul待用PRP加到进样管的底部，低速混匀3秒种，室温避光静置20～30min，加PBS1ml，上机检测。(4)血小板CD62P检测：标本收集和准备：109mmol/L枸橼酸钠1:9抗凝，静脉取血1.8ml，低速离心（500×g）5min，吸取PRP50ul，以等量1%多聚甲醛室温固定15min，加3mlPBS混匀，低速离心，弃取上清液，留取0.2ml液体混匀。染色和固定:在试管上对应于每一个样本作好识别标志，加5ul试剂到试管中，将5ul待用PRP加到进样管底部，加PBS1ml,上机检测。 1.3 统计学处理：用SPSS11.5软件包进行统计处理，计量资料采用均数±标准差(x－±s)表示，组间比较采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。2 结果 UA及AMI血单核细胞和血小板表达CD40L明显较SA、NC高（P＜0.05,P＜0.01），SA与NA组相比无差异（P＞0.05），见表1。表1 各组CD40L表达水平及血小板CD62P含量注：与SA、NC组比较*P＜0.05；**P＜0.013 讨论 CD40L也称gp39、CD154是一种Ⅱ型跨膜蛋白，含261氨基酸残基，其三维结构类似于肿瘤坏死因子a（TNF_α），属于TNF家族细胞因子。CD40L主要表达于成熟的活化CD4＋T细胞，除了T细胞,CD40L也表达于B细胞，自然杀伤细胞，单核/巨噬细胞，树突状细胞，以及非造血系统起源的内皮细胞等［2］。正常的动脉没有CD40L，仅在内皮细胞有少量CD40L表达,人类动脉粥样硬化（AS）斑块内的内皮细胞，平滑肌细胞和单核巨噬细胞表达CD40与CD40L，二者在斑块的肩部，即斑块与正常动脉交界处最多，由于肩部是不稳定斑块最容易破裂的地方,因此，CD40、CD40L与斑块的稳定性密切相关。存在AS斑块的细胞可通过CD40、CD40L这一对配体与受体的相互作用，导致自身活化，表达和分泌一些有利于免疫反应发生，炎症反应，血凝和血板形成的蛋白质，细胞因子及酶类［3］，从而促使斑块破裂引起ACS的发生。 炎症促使冠脉内不稳定斑块破损，继发血小板活化与血栓形成，是急性冠脉综合征的主要发病机制，Heen等［4］于1998年首次报道，健康人血小板在体外诱导活化后，数秒钟内即可在其表面表达CD40L，国内张菲斐等报道不稳定性心绞痛患者体内血小板处于过度激活的同时，其表面CD40L分子表达也显著高于SA患者及对照组，并达到健康人血小板在体外中等浓度ADP，凝血酶诱导时CD40L的表达水平。 CD62P是一种分子量为140KD的膜糖蛋白，定位于血小板的α_颗粒和内皮细胞棒管状小体内。临床和实验研究均证明血浆低密度脂蛋白（LDL）浓度增高可促进动脉粥样硬化形成，而LDL又易被内皮细胞、平滑肌细胞和单核细胞氧化，被氧化的低密度脂蛋白可诱导CD62P在内皮细胞粘附，这种粘附可被CD62P单抗阻断，说明动脉粥样硬化的早期就有CD62P的参与［5］，另有研究表明,在血栓疾病发病时，血小板CD62P显著升高，可作为血栓疾病的病情监测和评价血栓前状态的有效指标，血小板激活在冠心病的血栓形成和冠心病的发病中起了重要的作用。 本文研究发现ACS患者血单核细胞和血小板表达CD40L水平及血小板CD62P含量明显高于SA及NC组,表明CD40L作为重要的炎症信号通路的配体，CD62P作为重要的血小板功能活化标志物在急性冠脉综合征发生发展中起重要作用，血单核细胞和血小板CD40L水平及血小板CD62P含量可能是冠状动脉病变活动性标志物，有望成为预测ACS及斑块稳定与否的敏感指标，而抗CD40L、CD62P的治疗可能成为预防和治疗急性冠脉综合征的有效方法。【参考文献】 ［1］Santilli F, Basilis, Feffonip, et al.CD40/Cd40L system and vascular disease［J］. Intern Emerg Med, 2007, Dec;2(4):256-258. ［2］Charkrabartl S, Blair P, Freedman JE. CD40-40L signaling in vascular inflammation［J］. J Biol Chem， 2007 Jun 22;282(25):18307-17.Epub 2007 Apr 25. ［3］Phipps RP. Atherosclerosis: the emerging role of inflammation and the CD40-CD40 ligand System［J］. Pro Natl Acad Sci USA, 2000,97:6930-6932. ［4］Hennv, Slupsky JR, Crafe M， et al. CD40 ligand on activated platelets triggers. an inflammatory relation of endothelial cells［J］. Nature, 1998, 391:591-594. ［5］Apple FS,Pearce LA, Chung A, et al.Mulitipll biomarker use for detection of adverse events impatients presenting with syndrome［J］. Clin Chem,2007, May;53(5):874-881.
