肾素血管紧张素Ⅱ1型受体基因多态性与2型糖尿病伴或不伴有高血压的相关

作者:谢晓敏,史静,曾斌,李玲

     【摘要】  目的：分析宁夏地区人群肾素血管紧张素Ⅱ1型受体基因（AGTR1）A10208G位点多态性与2型糖尿病及2型糖尿病合并高血压之间的关系. 方法： 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCRRFLP）技术分析85例单纯2型糖尿病患者(DM组)、42例2型糖尿病合并高血压患者(DMH组)及224例健康对照者(NC组)AGTR1基因A10208G位点多态性，并测定其相应生化指标. 结果： DM组AGTR1基因A10208G位点基因型分布和等位基因频率与NC组比较差异有统计学意义（基因型： χ2=5.94, P＜0.05；等位基因： χ2=4.03, P＜0.05）；DMH组携G等位基因患者BMI、收缩压、舒张压均显著高于DM组携G等位基因患者，差异有统计学意义（P＜0.01）. 结论： AGTR1基因A10208G位点多态性与宁夏地区人群2型糖尿病存在相关性，与2型糖尿病是否合并高血压无明显关联，AGTR1基因A10208G位点多态性可能是宁夏地区人群2型糖尿病发病的遗传学易感基因.

【关键词】  肾素；受体，血管紧张素，2型；多态现象，遗传；糖尿病，2型；高血压

     0引言

    　遗传基因在2型糖尿病（DM）发病机制中起到重要的作用，并且与环境因素相互作用导致2型DM的发生发展［1-2］. 目前国内外一些研究结果表明，肾素血管紧张素Ⅱ1型受体基因（AGTR1）与高血压、心血管等疾病相关，但未见该基因A10208G位点是否与2型DM及2 型DM 合并高血压发生相关的研究报道. 本研究通过检测正常人群与2型DM及2型DM合并高血压患者AGTR1基因A10208G位点的多态性，探索其在2型DM及合并高血压诊断中的意义以及2型DM合并高血压者不同基因型与血脂等生化指标的关系.

    1对象和方法

    1.1对象选自宁夏医学院第二附属医院内分泌科住院的新诊断的2型DM患者127（男68，女59）例，均符合1999年WHO糖尿病诊断标准，平均（54.9+11.0）岁, 其中单纯2型DM患者85例，为DM组，2型DM合并高血压患者42例，为DMH组. 健康对照组（NC组）人群均来自健康志愿者224(男117，女107)例，平均(56.7+11.4)岁. 所有研究对象均无血缘关系且各组人群在血糖、血脂和高血压病程上均匹配，各项参数之间差异无统计学意义（P＞0.05）.

    1.2方法

    1.2.1一般情况询问病史及体检，包括血压、身高、体质量、腰围、臀围等，根据结果计算体质指数［BMI(kg/m2）］和腰臀比［WHR（cm/cm）］.

    1.2.2血脂及外周血分析采用全自动生化分析仪（日本日立7170型）检测空腹血糖（FPG）（采用葡萄糖氧化酶法）、血总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）、载脂蛋白A(ApoA)、载脂蛋白B (ApoB)；应用拜尔公司DCA2000糖化血红蛋白仪器检测糖化血红蛋白（HbA1c）.

    1.2.3AGTR1基因多态性分析取3 mL血样加EDTA抗凝剂后保存于-70℃冰箱中，样本收集齐后送至北京医院老年医学研究所用于基因分析. 用酚/氯仿法抽提外周血基因组DNA为模块，进行PCR扩增. 引物由Oligo6.0软件设计并进行评价、扩增，扩增产物经琼脂糖脂胶电泳证实后,用HpaⅡ内切酶37℃消化,酶切产物经溴化乙锭染色后通过凝胶成像系统读取酶切结果并拍照记录. AGTR1基因-10208位点PCR扩增片断大小为282 bp，野生型AA为一条带；纯合子突变型GG为两条带；杂合型AG型为三条带. 即基因型有三种： AA（282 bp）、GG（258 bp, 24 bp）、AG（282 bp, 258 bp, 24 bp），见图1.

    M: PCR Marker;  1, 11~14: GG基因型; 2~3, 9~10: AG基因型; 4~8: AA基因型.

    图1AGTR1启动子10208位点基因型20个g/L琼脂糖凝胶电泳图谱

 统计学处理：所有资料均用SPSS 10.0软件分析. 计量资料用x±s表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用F检验；计数资料比较采用χ2检验. 以P＜0.05为差异具有统计学意义.

    2结果

    2.1DM组和DMH组与NC组基因多态性分析3组研究对象AGTR1基因10208位点基因型符合HardyWeinberg平衡. GG基因型含量较少，因此与AG基因型合并为一组进行检验. DM, DY及NC三组间AG+GG基因频率比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；DM, DY, NC三组间G等位基因频率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）. DM组AG+GG基因频率及G等位基因频率与NC组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；DMH组AG、GG基因频率及G等位基因频率与DM组相似，但与NC组,DM组比较差异均无统计学意义（P＞0.05，表1). 表1各组研究对象AGTR1基因型和等位基因分布频率

    2.2DM组与DMH组患者AGTR1基因型和生化指标比较DM组患者收缩压和舒张压均值分别为(121±10) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)和(76+7) mmHg, DMH组患者分别为（132+16） mmHg和（84+10）mmHg，两组比较差异均有统计学意义（P<0.01）；DMH组携G等位基因的患者收缩压、舒张压、BMI均显著高于DM组患者（P＜0.01）. 各组间WHR, TC, TG, HDLC, ApoA, ApoB, FPG, HbA1c差异均无统计学意义（P＞0.05，表2).表2各组患者不同AGTR1基因型的生化指标比较

    3讨论

    　　糖尿病及其并发症候选基因有很多，主要涉及肾素血管紧张素系统（RAS）、糖代谢、脂代谢、胰岛β细胞合成分泌调节和周围胰岛素作用等有关的激素、受体、载体及酶基因.   近年来国外学者对AGTR1 基因作了大量的研究，其中研究最多的是对AGTR1 基因A1166C的多态性与2型DM合并冠心病、高血压、DM肾病等疾病的关系，但目前尚未得到一致的结论［3-11］. 在本研究中，我们对宁夏地区健康人群、单纯2型DM患者、2型DM合并高血压患者AGTR1基因A10208G位点多态性进行了分析，探讨该位点变异与2型DM及合并高血压之间是否存在相关性. 研究结果显示，单纯2型DM、2型DM合并高血压患者AGTR1基因A 10208G位点存在A→G的突变. 单纯2型DM患者、2型DM合并高血压患者和健康对照者间AGTR1基因A 10208G多态位点基因型分布存在明显差异（P<0.05）. 我们进一步研究发现， 2型DM合并高血压患者AGTR1基因A10208G位点多态位点基因型分布和等位基因频率与单纯2型DM患者相似，由于样本量较小，该结果尚需进一步证实. 2型DM合并高血压携G等位基因的患者BMI、收缩压、舒张压均显著高于单纯2型DM患者（P<0.01）. 从本研究可以看出，AGTR1 基因A10208G位点A→G突变可能是2型DM的共同遗传学易感基因；2型DM是否合并高血压与AGTR1基因A10208G位点多态性无明显关联；2型DM合并高血压携G等位基因的患者BMI、收缩压、舒张压显著高于单纯2型DM携G等位基因的患者，提示AGTR1基因A10208G位点多态性虽然可能不是高血压的易感基因，但是高血压可能是促发2型DM发病的重要环境因素之一.

    本研究初步显示，AGTR1 基因A10208G位点多态性与宁夏2型DM存在相关性，与高血压关系不大，它可能是宁夏地区2型DM发病的遗传学易感基因. AGTR1 基因A10208G位点多态性检测将有助于揭示肥胖、高血压等环境因素参与2型DM发病的病理生理机制，为预防、诊断和治疗2型糖尿病提供新的理论依据.

    致谢： 在此感谢北京医院老年病研究所和宁夏医学院中心实验室给予的技术支持！

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